冠心寧片對(duì)小劑量氯吡格雷抗血小板聚集增效的實(shí)驗(yàn)研究

王 奇

浙江省杭州市中醫(yī)院 浙江 杭州 310007

冠心寧片是丹參和川芎兩味中藥配伍而成的丹參復(fù)方制劑，主治冠心病心絞痛（屬中醫(yī)學(xué)“胸痹”“心痛”范疇），其主要成分有丹酚酸B、阿魏酸、原兒茶醛、丹參素等。本研究初步探索了冠心寧片對(duì)小劑量氯吡格雷抗血小板的增強(qiáng)作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 藥物及試劑：冠心寧片浸膏（正大青春寶藥業(yè)有限公司）；阿司匹林（拜爾公司，H20110419）；氯吡格雷（賽諾菲公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20130083）；花生四烯酸（AA，美國(guó)sigma公司）；二磷酸腺苷（ADP，美國(guó)sigma公司）采用磷酸鹽緩沖液配置成300μmol/L；P2Y12、CD62P及GPⅡb/Ⅲa試劑，美國(guó)BD公司。

1.2 主要儀器及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司，F(xiàn)ACSCanto）；酶標(biāo)儀（賽默飛，Multiskan FC）。SD大鼠，400±20g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物合格證：SCXK(滬)2010-0015，分籠飼養(yǎng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組與給藥：取SD大鼠24只，隨機(jī)分為4組各6只，空白對(duì)照組、冠心寧片組（生藥0.5g/kg）、氯吡格雷（5mg/kg）組及聯(lián)合治療組（冠心寧生藥0.5g/kg，氯吡格雷5mg/kg），雌雄各半。大鼠分別灌胃給藥生理鹽水、冠心寧片浸膏及氯吡格雷，給藥體積為0.5ml/100g。連續(xù)給藥7天。

1.4 血小板聚集率測(cè)定：末次給藥60min后，腹腔注射2%的戊巴比妥鈉0.2ml/100g麻醉，腹主動(dòng)脈取血，采用3.8%的枸櫞酸鈉抗凝。然后抗凝全血首先1000rpm離心10min，制備富血小板血漿；剩余血漿再3000rpm離心15min，取上層清液即為貧血小板血漿，用貧血小板血漿調(diào)節(jié)富血小板血漿，配制血小板濃度為4.5×108個(gè)/ml的血小板懸浮液。在37℃恒溫條件下孵育5min，加入ADP。采用血小板聚集儀測(cè)定血小板聚集率，并計(jì)算抑制率。抑制率=（對(duì)照組血小板聚集率-受試物處理組血小板聚集率）/對(duì)照組血小板聚集率×100%。

1.5 血小板內(nèi)磷酸腺苷含量測(cè)定：取腹主動(dòng)脈血，加入聚集誘導(dǎo)劑ADP誘導(dǎo)血小板聚集，5min后，加入10mM EDTA沸水浴5min終止反應(yīng)。冷卻后，4000rpm，離心10min，收集上清液。采用放射免疫法檢測(cè)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量。

2 結(jié)果

2.1 冠心寧片對(duì)小劑量氯吡格雷抗血小板聚集的影響：小劑量氯吡格雷對(duì)血小板聚集率無(wú)顯著抑制作用，聯(lián)合冠心寧片后能有效抑制血小板聚集，聯(lián)合治療組血小板聚集率顯著低于小劑量氯吡格雷組（P＜0.05）。見(jiàn)表1。冠心寧片、氯吡格雷、冠心寧聯(lián)合氯吡格雷對(duì)血小板聚集的抑制率分別為14.51%、14.91%和26.20%。

2.2 冠心寧片對(duì)小劑量氯吡格雷促血小板cAMP表達(dá)的影響：小劑量氯吡格雷對(duì)血小板內(nèi)磷酸腺苷表達(dá)無(wú)促進(jìn)作用，聯(lián)合冠心寧片后能有效促進(jìn)血小板內(nèi)磷酸腺苷表達(dá)，聯(lián)合治療組血小板cAMP表達(dá)水平顯著高于氯吡格雷組（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組血小板聚集率和cAMP表達(dá)比較（-x±s）

3 討論

血小板的異常激活和聚集致血栓機(jī)制在心血管疾病的發(fā)病中具有重要地位，抗血小板藥物的研發(fā)也成為了目前醫(yī)藥界研究的重點(diǎn)。氯吡格雷在急性冠狀動(dòng)脈綜合征（ACS）和腦卒中患者的急救中發(fā)揮了重大作用，但是其存在口服起效較慢、基因多態(tài)性影響藥物代謝等不足，另外還有出血、嚴(yán)重粒細(xì)胞減少、胃腸道反應(yīng)等不良作用，不利于其臨床進(jìn)一步應(yīng)用。本研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)小劑量的氯吡格雷聯(lián)合冠心寧片使用后，能增強(qiáng)其對(duì)血小板聚集的影響，提高其對(duì)促血小板內(nèi)磷酸腺苷表達(dá)的作用，我們認(rèn)為在臨床上冠心寧片與氯吡格雷聯(lián)合使用或許能降低氯吡格雷的使用劑量，從而減輕氯吡格雷的毒副反應(yīng)和患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。