ELISA法在檢測HIV抗體中的影響因素

石 楠

（朝陽市中心血站檢驗科，遼寧 朝陽 122000）

ELISA法的優勢是便捷操作、高靈敏度與特異性，可以檢測各類抗原與抗體，它是普適的固相免疫檢測法[1]。艾滋病正呈不斷蔓延的態勢，就更加應當重視艾滋病檢測的準確度。本次實驗選擇2016年12月至2018年12月3860例患者作為本次實驗的研究對象，實驗研究結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2016年12月至2018年12月3860例患者作為本次實驗的研究對象,所有患者接受常規檢查與抽血檢查,進行抽血檢查時，務必嚴格遵照安全防護制度與臨床采血技術要求，并按照試劑盒說明書規定，實施血液樣本采集。所有患者的靜脈血采集量為3～5 mL。

1.2 試劑與設備。試劑：試劑經國家食品藥品監督管理局批準，批檢合格，全部處在有效期內。運輸與貯存試劑時，應保持在2～8 ℃環境中，忌在常溫下存放試劑過長時間，試劑盡量不要多次凍融或受熱，否則致酶失活，運用當中應當密閉保存防止受潮。實驗開始前，把試劑放到室溫下大約0.5 h，讓試劑與室溫趨于一致，從而以最快速度達到實驗標準。儀器：全自動酶免分析儀。

表1 不同年齡組HIV抗體檢測情況

1.3 檢測方法：如果無法立刻檢測標本，把在5 d內檢測的血清標本保存在4 ℃的環境中，把1周后檢測的血清標本保存在低溫的環境中。嚴格遵照試劑使用說明書、檢測規程，對血清標本進行檢測，避免交叉污染。數次檢測，處理檢測結果，建立質控圖。經過檢測，結果呈陰性，出具HIV抗體陰性報告。檢測結果呈陽性，將陽性人員送至省疾控中心，以待進一步確認。

1.4 統計學處理：此次實驗所有數據全部由SPSS21.0版統計軟件進行處理，計量資料采用±標準差（）表示，采用t檢驗進行組間數據對比；以率（%）表示計數資料，采用卡方檢驗比較組間資料。以P＜0.05代表差異有統計學意義。

2 結果

檢測3860例患者HIV抗體，10例確認為陽性，陽性率為0.26%。10例陽性確診病例中，男性7例，女性3例，年齡20～46歲，見表1。

3 討論

3.1 ELISA法：ELISA法就是酶聯免疫吸附測定法，經免疫酶技術演化而來的特殊試劑分析法，檢測當中，注入特殊的酶底物，經酶的催化或水解，無色的底物就會呈現出顏色；因而，通過肉眼或依靠分光光度計，即可觀測檢測結果[2]。

3.2 ELISA法檢測HIV抗體的影響因素

3.2.1 樣本因素。運用酶聯免疫吸附測定法進行檢測時，HIV病毒抗體標本自身的質量會對檢測產生重大影響。臨床醫學常規血檢標本就是通常的血清，檢驗血清時，需要徹底分離，攝入纖維蛋白會產生一定的反應孔。出現上述情況的原因在于纖維蛋白本身有著吸附功效，檢測時難以清除干凈，從而檢測結果的準確性受到一定影響；其次，在冷凍保存血清樣本時，切忌反復冷處理血清樣本，因為每進行一次冷處理都會破壞血清蛋白分子；與此同時，催化處理溶血標本中產生的紅血蛋白，以防止二次洗板當中，殘留存活的蛋白給檢測結果的正確反應帶去影響[3]。

3.2.2 加樣因素。運用ELISA法檢測HIV抗體時，加樣的操作人員會直接影響檢測質量，因此，務必重視控制此過程的質量。通常選擇移液器進行加樣，定時校準移液器，操作人員應當對加樣時間加以控制，保證在短期內完成，但是若加樣量過大，就應當分批次操作，并掌握好每批次間的實施時間，防止產生相互干擾現象。加樣時，提前搖勻滴瓶，接著進行預吸，在擠出第1滴后，再增加滴數，旨在避免產生氣泡。嚴格把握滴入量，以保證酶標板孔底部的滴入量達到要求，防止接觸孔壁的邊緣，也就是操作人員選擇垂直加樣的方法，可以較好防止加樣對檢測結果準確度所帶去的影響[4]。

3.2.3 溫度控制因素。相關實踐研究證明，ELISA法檢測HIV抗體時，溫度成為致檢測結果呈現假陽性或假陰性的主要因素，所以操作人員一定要對溫度進行嚴格控制。首先，應當關注冰箱溫度與實際溫度的不同，在冰箱中放入溫度計，以監測樣本與試劑盒所處環境的溫度情況，并記錄相關情況。把樣本與試劑盒從冰箱內取出后，需將其于室溫中放置一段時間，當樣本與試劑盒的溫度與室溫達到一致后，再行開始操作。沒有用完的試劑，依舊密閉保存，并清楚標注其實際情況。在操作開始之前，調整室溫溫度到20～25 ℃。溫度會影響抗原、抗體結合，顯色深度會隨著溫度的上升而加深，所以應當控制顯色過程中的溫度。比如：把辣根過氧化物酶（HRP）當作標記酶物，一般底物是3，3～5，5～-四甲基聯苯胺（TMB），務必溫度要控制在（37±1）℃，且此溫度要保持30 min，方可產生催化反應。另外，如果希望弱陽性標本孔可以充分顯色，務必要把溫度控制在37 ℃以下，且維持30 min后終止反應，防止時間過長，影響繪制質控圖。

3.2.4 洗板因素。如果進行機洗，就要注意清潔與維護儀器，適時檢測，保證洗板質量。使用后，務必使用蒸餾水沖洗管道，一方面清潔管道，另一方面防止污染環境[5]。洗板過程中，防止混用洗滌液，以免不同試劑采用對應洗滌液。通常清洗洗板次數為5～6次，清洗時間需控制在60 s以內，從而可以防止假陽性應對浸泡板子。

3.2.5 比色因素。進行比色時，挑選雙波長。微孔板與孔內標本具有非特異性吸收、灰塵的功能，會對吸光度產生一定影響，雙波長就能較好防止此種影響[6]。

3.2.6 讀板因素。在讀板過程中，打開酶標儀，至少預熱20 min，接著方可測定樣本吸光度，且須控制在15 min內讀完。

HIV病毒是艾滋病的主要誘發因素，所以臨床十分重視監測HIV病毒。伴隨醫療技術的進步，目前臨床檢測HIV病毒方法有了長足發展，這其中被廣泛應用且有著頗高價值的檢測方法就是酶聯免疫吸附劑測定法（ELISA），ELISA可以檢測HIV抗體，從而讓診斷、監測艾滋病的功效大大提升。

酶聯免疫吸附劑測定法（ELISA）是一種特異性基因工程檢測技術，是檢測HIV較為理想的手段。ELISA法檢測操作便捷，成本不高，有著很高的特異性與靈敏度，同時可以實現自動化操作，十分有利于把控實驗室檢測質量，檢測結果準確度高，其檢測結果數據也利于保存，正是因為有著上述這些優勢，ELISA法被廣泛運用到醫院大批量體檢、篩查血站獻血人員、中型醫院檢測科早期檢測HIV抗體，從而減少假陽性率，降低醫患糾紛的概率[7]。與此同時，其他比如：監測艾滋病流行病學，檢測特定人群HIV感染情況與發展趨勢，針對流行病學、臨床、病毒學或HIV相關研究對象開展自愿檢測等，應當挑選具有高特異性的ELISA試劑。

綜上所述，運用ELISA法檢測HIV抗體時，應當分析影響ELISA法檢測抗體結果的因素，挑選優質試劑，確保檢測操作規范，從而保證最后檢測結果的準確度，讓真陽性率能夠進一步提高。