BO新生兒溶血診斷指標（卡式法）與臨床指標相關性分析

辛磊，林瓊琳，彭燕，郭雅春，徐晶心

（南昌市第三醫院 輸血科,江西 南昌 330000）

0 引言

新生兒溶血病是指母胎血型不合所致的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病。以ABO新生兒溶血最常見，新生兒因遺傳父親顯性抗原即A（B）抗原，母親在妊娠期間反復“經胎盤出血”，抗原進入母親體內并刺激母體產生免疫性抗體，當足量IgG抗體進入胎兒體內時，即可導致新生兒紅細胞溶血被破壞[1]。本文旨在研究新生兒溶血診斷指標包括母親抗體效價、溶血三項（卡式法）和臨床新生兒溶血常用指標（血紅蛋白和血清總膽紅素）之間的關聯。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月至12月臨床上疑為新生兒溶血癥狀的胎兒及其母親血液，共127例。其中，母親血型均為O型；新生兒年齡均≤9 d且血型為A或B型，總膽紅素為33.2-691.2 umol/L。

1.2 材料與試劑

微柱凝膠抗球蛋白卡、濃度0.8%的A、B、O標準紅細胞、甘氨酸/EDTA放散試劑均由長春博訊生物技術有限責任公司提供、2-Me優上海血液生物醫藥有限公司提供、ADVIA2400生化分析儀和ADVIA500i血細胞分析儀均由德國西門子公司提供。

1.3 方法

IgG抗A（B）抗體效價檢測方法：采用微柱凝膠法檢測抗體效價。取127例O型血母親得200 uL血漿，加入等量2-Me液混勻，置37℃水浴約15 min，排6個小管，取上述混合液20 μL加生理鹽水300 μL（1∶32）第1管。第2-6管；分別加入生理鹽水200 μL。從第1管吸出200 μL加入第2管。再從第2管吸出200 μL加入第3管，依次倍比稀釋滴度32、64、128、256、512、1024。取抗球蛋白檢測卡，每孔分別加入與新生兒同型的0.8% A型B型O型標準紅細胞試劑50 μL，然后依次加入倍比稀釋好的血漿各50 μL。37℃專用孵育箱孵育15 min，離心（900-1500）g，最后判斷結果[2]。

新生兒溶血三項檢測方法和診斷標準：直抗試驗：取新生兒全血洗滌三次后配成濃度4%紅細胞懸液，取25 uL加入至抗球蛋白檢測卡中，離心（900-1500）g，判斷結果。游離試驗：在標有A、B、O抗球蛋白卡檢測卡中，加入新生兒血漿各50μL，加入相應的4%A型、B型、O型標準紅細胞試劑25μL，放置37℃專用孵育箱孵育15 min，離心（900-1500）g，判斷結果。放散試驗：在標有A、B、O抗球蛋白卡檢測卡中，放入新生兒紅細胞酸放散后的放散液各50 μL，加入相應的4%A型、B型、O型標準紅細胞試劑25 μL，放置37℃專用孵育箱孵育15 min，離心（900-1500）g，判斷結果。新生兒溶血病血清學檢查判斷詳見表1[3]。

表1 新生兒溶血病血清學檢查

血紅蛋白和血清總膽紅素測定皆由儀器完成，其中，血紅蛋白≤130 g/L則判定為新生兒貧血[4]。若血清總膽紅素（STB）＜220.6 umol/L為輕度黃疸，若STB水平介于220.6-342.0 umol/L則為中度黃疸，若STB＞342.0 umol/L則為重度黃疸。

1.4 統計學處理

應用SPSS 20.0軟件中χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

（1）O型血母親血清抗體效價與溶血三項判定的ABO新生兒溶血相關性分析：O型血母親血清IgG 抗 體 效 價 ≤ 1∶32，=1∶64，=1∶128，=1∶256，=1∶512，≥1∶1024，各對應的新生兒溶血率發生率 分 別 為 7.1%，29.4%，32.0%，75.0%，80.0%，85.7%。χ2檢驗值為 45.991，P＜0.05，說明 O型血母親血清IgG抗體效價越高，其相對應的新生兒發生ABO新生兒溶血概率越高，詳見表2。

表2 母親IgG抗體效價與新生兒溶血發生率的相關性分析

（2）新生兒通過溶血三項確定的新生兒溶血病與其所對應的血紅蛋白之間的相關性溶血三項結果能證實為ABO新生兒溶血的總共有60例，其中有13例存在新生兒貧血；無法證實為ABO新生兒溶血的總共有67例，其中只有10例存在新生兒貧血。兩者交叉關聯所得到的χ2值為0.160，P＞0.05。故無法判斷兩者之間的相關性，詳見表3。

表3 通過溶血三項確定的新生兒溶血病與其所對應的血紅蛋白之間的相關性分析

（3）新生兒通過溶血三項確定的新生兒溶血病與其所對應的黃疸程度之間的關聯性。其中溶血三項結果能證實為ABO新生兒溶血的總共有60例，其中21例是輕度黃疸或以下，31例為中度黃疸，8例為重度黃疸；無法證實為ABO新生兒溶血的總共有67例，其中有47例是輕度黃疸或以下，10例為中度黃疸，10例為重度黃疸。這兩項結果的χ2值為20.596，P＜0.05，認為溶血三項檢測結果與黃疸程度有一定關聯，且溶血三項試驗陽性的黃疸程度越嚴重，見表4。

3 討論

新生兒溶血是指母胎血型不一致而使得胎兒產生免疫性溶血的疾病。在我國以ABO血型不合者占多數，RhD血型不合者較少[5]。ABO新生兒溶血病是因為胎兒血反復刺激母親體內免疫系統，到達一定程度時產生的抗體即可破壞紅細胞而產生溶血癥狀[6]。從上述過程可以看出，母親的免疫性抗體效價和新生兒紅細胞上的免疫性抗體成為重要檢測對象。而新生兒溶血最常見的臨床表現是貧血和黃疸等，測定新生兒血紅蛋白和血清總膽紅素常作為臨床診斷、治療乃至預后的重要指標。

表4 通過溶血三項確定的新生兒溶血病與其所對應的黃疸程度相關性分析

本次研究中，發現隨著母親為O型血的血清中IgG抗A或B效價的增加，其新生兒發生新生兒溶血的概率也隨之提升。這說明在新生兒溶血病，母親的抗體效價測定在產前診斷可以提供一定程度的幫助，并客觀的表明新生兒溶血病發生的可能性。研究中選取的127例樣本皆為臨床懷疑或需排除新生兒溶血病的臨床病例，而這次研究也表明了新生兒溶血的有無與胎兒的黃疸程度有一定的相關性，而與新生兒貧血有無未發現相關性，這可能是ABO溶血更容易提升新生兒體內的血清游離膽紅素，而相對于血紅蛋白，因新生兒自身的代償以及ABO溶血的自限性而使得相對穩定，也有可能所選取的樣本中因其他因素比如疾病、出生時間等所造成的影響，最終對血紅蛋白的波動更不敏感[7-8]。總之，O型血母親抗A（B）抗體效價一定程度上可以對新生兒溶血率進行預測。ABO溶血三項的檢測結果與黃疸嚴重程度有一定聯系，但無法判斷新生兒貧血與否，臨床上需合理結合各診斷指標來綜合判斷患兒病情和預后，選取最優的治療手段，有效的處理新生兒溶血病。