5-羥吲哚乙酸在胃癌早期診斷中的臨床應用

袁曉陽 周丹 李士軍 秦桂娥 靳巖

(大連醫科大學附屬第一醫院檢驗科，遼寧 大連 116011)

我國胃癌患者發病率和死亡率高,且患者就診時大多已進入中晚期〔1〕。因此，在我國的胃癌控制工作中，預防和早期診斷極為重要。目前臨床上常應用癌胚抗原(CEA)、糖鏈抗原(CA)72-4等血清腫瘤標志物進行胃癌的早期篩查，但是確診病情和疾病分型等方面并不能盡如人意〔2〕。惡性腫瘤細胞中產生的代謝物含量與非惡性腫瘤細胞不同〔3〕。5-羥吲哚乙酸(HIAA)是5-羥色胺(HT)經單氨氧化酶作用氧化脫氨形成的，是5-HT的主要代謝產物。人體內的5-HIAA經過自然代謝，幾乎均由尿液排泄。目前，尿液5-HIAA的檢測已經被作為診斷神經內分泌腫瘤如類癌的腫瘤標志物〔4〕。本研究擬探討 5-HIAA是否可以應用于早期胃癌的篩查，以提高胃癌早期診斷率。

1 材料與方法

1.1研究對象 選取2016年8月至2017年2月在大連醫科大學附屬第一醫院初診疑似胃癌的住院患者70例為研究對象，男41例，女29例，年齡37～78歲；經胃鏡確診為各型胃炎的患者12例，男8例，女4例，年齡53～71歲；選取同時期50例不同職業、性別、年齡的健康體檢者為正常對照組。排除既往有內分泌及免疫性疾病、血液病、消化系統等惡性腫瘤的患者，以及體檢前一日使用過激素類、抗炎類等影響代謝的藥物治療者。

1.2材料 5-HIAA檢測試劑盒(Test-Reagent for 5-hydroxyindole acetic acid，URC)，由武漢市晨康科技有限責任公司提供，醫療器械注冊證書編號：國械注準20143401815號，批號：20151116。

1.3方法

1.3.1樣本采集與處理 在大連醫科大學附屬第一醫院嘉禾病例系統上，采集70例初診疑似胃癌患者的病理診斷結果及CEA、CA72-4的檢驗結果。病理診斷結果及CEA、CA72-4的檢驗結果應與5-HIAA檢測時間一致。病理診斷結果確診為胃癌者標記為有癌(+)，否則標記為無癌(-)；CEA正常參考范圍0～5 ng/ml，CA72-4正常參考范圍0～6.9 U/ml，超出正常參考范圍標記為陽性(+)，否則標記為陰性(-)。5-HIAA 和CEA、CA72-4聯合診斷有一項陽性則標記為陽性(+)。

1.3.2尿5-HIAA檢測方法 采用比色法，嚴格按照操作說明書進行檢測。取三組受檢者的清潔晨尿3 ml加入裝有0.5 ml試劑的安瓿中，搖勻后靜置3～5 min，將沉淀物顏色與標準比色板對照以判定結果。無沉淀物或沉淀物無色或淺黃色判定為陰性，沉淀物為深黃色或紅褐色等判定為陽性。若出現綠色等為干擾色，則剔除此病例。受檢者前一日應忌酒，忌對檢測結果可能有影響的食物和藥物，低蛋白飲食，留取尿液樣本后立即測試。

1.4統計學方法 應用SPSS17.0軟件，計數資料組間比較采用χ2檢驗，繪制受試者工作特征(ROC)曲線，獲得曲線下面積(AUC)。

2 結 果

2.1正常對照組、胃炎組與胃癌組5-HIAA陽性率比較 胃癌組、胃炎組和正常對照組5-HIAA陽性率分別為67.14%(47例)、16.70%(2例)、2.00%(1例)，組間比較有顯著差異(χ2=55.124，P=0.000)。其中胃癌組與正常對照組(χ2=57.571，P=0.000)、胃癌組與胃炎組之間(χ2=10.835，P=0.003)有顯著差異，而正常對照組與胃炎組之間無顯著差異(χ2=4.521，P=0.093)。

2.25-HIAA與胃癌診斷金標準的比較 70例初診疑似胃癌的患者中，5-HIAA檢測結果陽性且病理確診為胃癌的病例44例，5-HIAA檢測結果陰性且病理檢查結果確定沒有癌癥的病例7例，5-HIAA陽性但病理檢查結果陰性3例，5-HIAA陰性但病理檢查陽性16例。5-HIAA與胃癌病理結果符合率為72.86%，靈敏度為73.33%，特異性為70%。

2.35-HIAA、CEA、CA72-4單獨及聯合診斷胃癌的靈敏度和特異性比較 70例初診疑似胃癌患者中，進行CEA檢驗的共有56例，陽性率為69.64%，靈敏度為80.00%，特異性為42.31%；進行CA72-4檢驗的共28例，陽性率為57.14%，靈敏度為60.00%，特異性為66.67%；5-HIAA與CEA、CA72-4兩項及以上聯合檢測陽性率為78.57%，靈敏度為96.30%，特異性為76.92%。聯合檢測的陽性率、靈敏度、特異性均顯著高于單獨檢測5-HIAA(均P<0.05)。

2.4繪制單獨檢測5-HIAA與聯合CEA、CA72-4診斷胃癌的ROC曲線 5-HIAA+CEA+CA72-4聯合檢測診斷早期胃癌的AUC為0.958，95%CI為0.914～1.000；高于單獨檢測5-HIAA診斷早期胃癌的AUC(0.892)及95%CI(0.817～0.966)。見圖1。

圖1 單獨檢測5-HIAA與聯合檢測CEA、CA72-4診斷胃癌的ROC曲線

3 討 論

胃鏡活檢和X線鋇餐檢查是我國胃癌診斷的常用方法。胃鏡檢查圖像清晰，對病變部位和范圍觀察直觀，并且能夠判斷腫瘤的浸潤深度、轉移情況及臨床術前分期；X線鋇餐比胃鏡檢查痛苦小，并且能夠對胃癌病灶進行定位、定量〔5〕。但是二者有各自的方法學局限：胃鏡活檢是一種有創傷性檢查，老年、體弱、危重患者難以承受，且有并發胃穿孔、出血、心血管意外等疾病的風險；X線鋇餐較胃鏡陽性率低，不能進行活檢，敏感度較低，且二者發現病灶時大多已進入中晚期，早期診斷率低。

胃癌腫瘤標志物是進行胃癌早期篩查的有效手段。血清、腹水、胃液、尿液等〔6〕均可以進行腫瘤標志物的檢測。近年發展起來的新的檢測指標——癌癥尿液篩查監測試劑(URC)就是通過分析尿液中代謝物質對人群癌癥進行篩查。惡性腫瘤常伴隨細胞代謝活性改變，導致氨基酸等代謝紊亂，因此癌癥患者尿液中色氨酸及其代謝衍生物(5-HIAA)的含量遠遠超過正常人〔7〕。URC可以與異常代謝的物質發生特異性顏色反應，然后與標準比色板比較，即可判定被試者體內是否有癌細胞代謝活動，從而達到早期發現、早期診斷和早期治療的效果。本研究中的5-HIAA試劑盒即為URC的一種。

5-HIAA的檢測方法主要有4種：高效液相色譜法(HPLC)、質譜法(MS)、熒光分析法、比色法。通常用HPLC法同時測定5-HT、5-HIAA含量，具有快速、準確的特點。其中，用HPLC-FLD分離5-HT、5-HIAA效果良好，且在7 min內能使二者同時出峰〔8〕。除此之外，HPLC與其他檢測方法聯合檢測5-HIAA，大大提高了檢測時間和靈敏度。馮成亞等〔9〕建立了在線衍生-HPLC法同時測定血漿中色氨酸及其衍生物5-HIAA等濃度的方法，利用醋酸鋅在線衍生的HPLC進行內標法定量，此法快速簡便，線性相關性好，內源性物質干擾小，適合臨床常規檢測。段虹飛等〔10〕采用HPLC串聯MS測定人血清中5-HIAA含量，平均回收率可達92.1%～96.5%，且線性范圍寬、分析時間短，能更好地滿足臨床需求。

傳統的比色法是用亞硝基萘酚比色法檢測5-HIAA〔11〕，首先將酸化后的尿液用有機溶劑進行萃取，然后用1-亞硝基-2-萘酚及亞硝酸進行顯色，最后用l，2-二氯乙烷進行抽提〔12〕。Goldenberg〔13〕在此基礎上進行了改進，在原有試劑中加入2-巰基乙醇提高了檢測的特異性和準確性。雖然傳統的比色法經多次改進，特異性與準確性已有所提高，但操作復雜，不適合臨床快速檢測。本研究采用5-HIAA試劑盒，簡便快速，通過汞鹽與5-HIAA發生特征顯色反應，再與標準比色卡比較顏色的不同即可判定被測試者體內是否有相關的代謝異常。本研究結果表明，胃癌患者的尿5-HIAA排泄量較胃炎患者和正常人明顯升高，且胃癌患者與胃炎患者、正常人的5-HIAA排泄功能有差異，但正常人與胃炎患者的排泄功能無差異。

因為癌癥患者腫瘤細胞異常代謝釋放大量的5-HT,導致尿中5-HIAA 排泄量明顯增多，可達156.9～3 138 mol/24 h〔4〕。臨床研究證實，24 h尿5-HIAA檢測類癌的特異性為85%～90%，靈敏度高達100%,診斷空回腸神經內分泌腫瘤的靈敏度為70%～75%，特異性可達100%〔12，14〕。本研究可以初步得出結論，5-HIAA 檢測胃癌的靈敏度較高，特異性較好，可以作為腫瘤標志物進行胃癌的早期篩查。

胃癌的腫瘤標志物主要包括蛋白類、糖類、基因類三種。蛋白類腫瘤標志物主要為CEA、胃蛋白酶原(PG)、組織多肽特異性抗原(TPS)；糖類腫瘤標志物主要包括CA72-4、CA19-9、CA24-2；基因類腫瘤標志物主要有p53基因、p16基因、nm23基因。其中CEA特異性為50%～92%，在胃黏液腺癌、印戒細胞癌的陽性率高于其他組織，廣泛應用于消化系統腫瘤的輔助診斷；CA72-4的胃癌診斷價值高于CEA等，對胃癌有較高的敏感性，對胃癌患者的陽性率為36%～94%，故是檢測胃癌首選的腫瘤標志物〔15〕。目前臨床上多采用多種標志物聯合檢測以提高診斷率，如聯合檢測CEA、CA19-9、 CA72-4是早期診斷胃癌的有效手段之一〔16〕。本研究中聯合檢測相較于單項腫瘤標志物的檢測靈敏度更高，特異性更強。

5-HIAA的檢測會受到很多食物和藥物的影響，如菠菜、西蘭花、椰菜花、退熱冰、利血平、非那西丁等可使5-HIAA水平升高；而肝素、左旋多巴、異煙肼等可使5-HIAA水平降低。故進行5-HIAA檢測時應注意飲食，避免食物和藥物對檢測造成干擾，出現假陽性或假陰性的結果〔17〕。本研究因受時間和條件的影響，未能對正常對照組和胃炎組中5-HIAA陽性病例進行跟蹤隨訪、查明原因，但不排除發展為胃癌的可能。

綜上所述，尿液5-HIAA的發展為胃癌的早期無創性診斷提供了新思路，聯合檢測傳統的腫瘤標志物CEA、CA72-4可以提高靈敏度和特異性。本研究存在一定的局限性，如比色法不能完全定量，且肉眼判定存在人為誤差；患者采集時間受限于癥狀的輕重程度，標本來源單一；標本量少，尤其胃炎組因大多數患者門診隨診不容易采集校本；回顧性研究存在偏倚，需要增加研究對象數量并跟蹤隨訪，以進一步明確5-HIAA與早期胃癌的相關性。