乙型肝炎肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平變化及其臨床意義探討

孟淑榮，王山山

乙型肝炎可導致肝硬化、肝功能衰竭和原發(fā)性肝癌，其中失代償期肝硬化常并發(fā)腹水、肝性腦病和食管胃底靜脈曲張破裂出血等嚴重并發(fā)癥，治療難度大。研究表明，乙型肝炎病毒（HBV）對肝細胞的損害并非病毒直接破壞肝細胞的結(jié)構(gòu)和功能，而是通過免疫介導反應造成的損傷過程。以B7-H3為代表的共刺激分子 B7家族在調(diào)節(jié)細胞免疫應答的雙信號系統(tǒng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[1]。白介素-18（IL-18）是機體內(nèi)一種非常重要的前炎性細胞因子，由活化的巨噬細胞、T細胞和NK細胞等產(chǎn)生，有多種生物學功能，如能增強NK細胞的細胞毒作用，誘導T細胞增殖、分化和成熟，促進和調(diào)節(jié)機體的免疫應答反應等[2，3]。本研究檢測了乙型肝炎肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平，以探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2015年4月～2017年3月我院收治的乙型肝炎肝硬化患者113例，男性67例，女性46例；年齡 31～52歲，平均年齡為（43.52±6.69）歲。診斷符合慢性乙型肝炎防治指南的診斷標準，其中代償期肝硬化33例，失代償期肝硬化80例。排除標準：（1）肝細胞癌者；（2）合并甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒或人類免疫缺陷病毒感染者；（3）合并自身免疫性疾病者；（4）接受過器官或骨髓移植后服用免疫抑制劑者；（5）妊娠或哺乳期婦女。另選擇同期健康志愿者20名，男性12例，女性8例；年齡30～53歲，平均年齡（41.29±5.19）歲。受試者簽署知情同意書，本研究獲得我院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 血清檢測 晨起，抽取外周靜脈血5 ml，3000 r/m 離心10 min，分離血清，置-80℃冰箱凍存。采用ELISA法檢測血清B7-H3和IL-18水平（試劑盒均購自上海晶美生物有限公司，參考說明書制作標準曲線，使用EXL800酶標儀讀取吸光度值）；常規(guī)行肝功能指標檢測。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 21.0軟件行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（±s）表示，兩樣本間均數(shù)的比較采用t檢驗，多組樣本間均數(shù)的比較比較采用方差分析；采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組受試對象血清B7-H3水平比較 80例失代償期肝硬化患者血清B7-H3水平為（62.29±22.17）ng/ml，顯著高于33例代償期肝硬化患者的（32.27±10.29）ng/ml（P＜0.05）或 20例健康人的（11.35±4.48）ng/ml（P＜0.05，圖1）；代償期肝硬化患者血清B7-H3水平也顯著高于健康人（P＜0.05）。

圖1 不同受試對象血清B7-H3水平比較

2.2 不同受試對象血清IL-18水平比較 失代償期肝硬化患者血清IL-18水平為（585.63±121.28）pg/ml，顯著高于代償期肝硬化患者的（396.29±86.91）pg/ml（P＜0.05）或健康人的（155.31±76.93）pg/ml（P＜0.05，圖2）；代償期肝硬化患者血清IL-18水平也顯著高于健康人（P＜0.05）。

圖2 不同受試對象血清IL-18水平比較

2.3 肝硬化患者血清B7-H3與IL-18水平相關(guān)性分析 經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，肝硬化患者血清B7-H3水平與IL-18水平間呈顯著正相關(guān)（r=0.4111，P＜0.01，圖 3）。

圖3 肝硬化患者血清B7-H3與IL-18水平相關(guān)性分析

2.4 不同Child-Pugh分級患者血清B7-H3和IL-18水平比較 根據(jù)Child-Pugh分級標準，將肝硬化患者分為Child-Pugh A、Child-Pugh B和Child-Pugh C級。結(jié)果26例Child-Pugh C級患者血清B7-H3和IL-18水平顯著高于33例Child-Pugh A級或54例 Child-Pugh B 級（P＜0.05），Child-Pugh B 級患者血清B7-H3和IL-18水平也顯著高于Child-Pugh A 級（P＜0.05，表 1）。

表1 不同Child-Pugh分級患者血清B7-H3和IL-18 水平（±s）比較

表1 不同Child-Pugh分級患者血清B7-H3和IL-18 水平（±s）比較

與Child-Pugh A級比，①P＜0.01；Child-Pugh B級比，②P＜0.01

Child-Pugh 分級 例數(shù) B7-H3（ng/ml） IL-18（pg/ml）A級 33 23.3±9.8 243.8±57.0 B級 54 52.2±13.9① 408.1±92.4①C級 26 76.5±22.8①② 594.1±112.2①②

2 討論

約2%～6%慢性乙型肝炎患者將會進展為肝硬化。乙型肝炎病毒本身并不直接引起肝細胞病變，主要是通過激發(fā)人體的免疫系統(tǒng)反應進而識別并破壞肝細胞[4]。經(jīng)典的T淋巴細胞的有效活化和功能介導主要依賴于兩個信號的調(diào)節(jié)：（1）抗原遞呈細胞遞呈主要組織相容性復合體-抗原復合物；（2）協(xié)同刺激分子介導的輔助信號的協(xié)同作用。目前，針對T細胞活化的第2信號，即協(xié)同刺激分子的研究已逐漸成為研究的熱點。現(xiàn)已知協(xié)同刺激分子主要包括3個家族，分別為B7家族（免疫球蛋白超家族）、腫瘤壞死因子（TNF）家族和細胞因子家族，其中B7家族是研究最早和一直受高度關(guān)注的協(xié)同刺激分子。現(xiàn)有研究證實[5，6]，B7家族在抗病毒和抗腫瘤等諸多免疫反應過程中起到了非常重要的作用。B7-H3作為B7家族的成員之一，在免疫調(diào)節(jié)過程中介導負性協(xié)同信號的發(fā)出，該信號在免疫負性調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用，并在腫瘤免疫、自身免疫性疾病、移植免疫、病毒感染性疾病和血液病等發(fā)病過程中具有重要的意義[7]。有研究表明，B7-H3具有共刺激和共抑制的雙重作用，而其表達的微環(huán)境對B7-H3的功能發(fā)揮起了重要的調(diào)節(jié)作用。具體地說，B7-H3能夠促進刺激CD4+和CD8+T細胞的增殖，促進細胞因子IFN-γ、IL-8、TNF-α等的分泌，增強CD8+T細胞的細胞毒作用等。近年來研究發(fā)現(xiàn)[8-10]，B7-H3在包括肝細胞癌在內(nèi)的多種實體腫瘤呈異常高表達，并與疾病進展和預后較差相關(guān)。“乙型肝炎-肝硬化-肝癌”是目前較為公認的病理生理過程，既然現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)B7-H3在肝癌發(fā)病過程中發(fā)揮了較為重要的作用[11]，那其在具有高度癌變可能的肝硬化患者中表達情況及與疾病預后的關(guān)系如何，自然成為人們關(guān)注的課題，而目前相關(guān)研究卻鮮見。

IL-18最初是在經(jīng)內(nèi)毒素刺激誘發(fā)的中毒性休克小鼠肝臟提取液中發(fā)現(xiàn)的一種具有強烈誘生IFN-γ的蛋白質(zhì)[12]。成熟的IL-18主要由活化的巨噬細胞和肝臟庫普弗細胞產(chǎn)生。IL-18主要通過與宿主細胞表面IL-18受體的相互作用從而實現(xiàn)多種生理生化功能[13，14]。IL-18的主要生物學功能有[15-18]：（1）刺激T細胞增殖，增強淋巴細胞的細胞毒性；（2）誘導Th1類細胞產(chǎn)生相應的細胞因子，主要包括IFN-γ、IL-2、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）等；（3）誘導免疫細胞產(chǎn)生IFN-γ和激活NK 細胞活化；（4）增強 ICAM-1和FasL的表達；（5）抗感染、抗腫瘤和抗超敏反應等。在乙型肝炎發(fā)病過程中，Th1/Th2細胞比例失衡是乙型肝炎病毒感染慢性化的機制之一，而IL-18可通過誘生IFN-γ，促進Th1應答，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2細胞平衡[19]。隨著疾病的持續(xù)進展，當進展至肝硬化過程時，IL-18起到了何種作用，目前相關(guān)研究亦不充分。

我們分析了正常人群、代償期肝硬化患者和失代償期肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平差異。研究發(fā)現(xiàn)，肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平均顯著高于正常人群，提示兩者在乙型肝炎肝硬化發(fā)病過程中起了某種作用。進一步觀察發(fā)現(xiàn)，失代償期肝硬化患者兩指標均顯著高于代償期肝硬化患者。一方面，考慮B7-H3刺激CD4+T細胞和CD8+T細胞增殖，增強細胞毒性T細胞的誘導和選擇性地刺激IFN-γ 的 生產(chǎn)[20，21]；另一方面，考慮 IL-18 協(xié)同誘導Th1等細胞產(chǎn)生IFN-γ，而IFN-γ是一類主要在免疫細胞中合成的細胞因子，可作為抗原提呈細胞和淋巴細胞增殖、分化的調(diào)節(jié)劑，參與機體的炎癥反應和抗病毒免疫。有研究顯示[22，23]，IFN-γ可能作為主要細胞因子，在引起肝損傷過程中發(fā)揮觸發(fā)作用。此外，我們還進一步分析了肝硬化患者外周血B7-H3與IL-18水平間的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩指標間存在顯著的正相關(guān)，提示B7-H3與IL-18在乙型肝炎肝硬化發(fā)生、發(fā)展過程中可能起到了協(xié)同作用。我們進一步分析了不同Child-Pugh分級的肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著肝功能變差或病情加重，血清B7-H3和IL-18水平均呈明顯上升趨勢，這也印證了B7-H3和IL-18對促進乙型肝炎肝硬化患者疾病進展發(fā)揮協(xié)同作用。

本研究對肝硬化的分級還是停留在臨床檢測方面，缺乏影像學和病理學檢查的支持，且肝硬化的病因有些混雜，這些因素的存在可能造成數(shù)據(jù)偏倚，血清B7-H3和IL-18升高與肝組織內(nèi)的表達的關(guān)系還需要進一步研究，它們在乙型肝炎肝硬化發(fā)病過程中的作用也還需要更多研究去探明。