產金屬酶的腸桿菌科細菌耐藥表型研究

徐淼，郭文臣，李世榮

濰坊市人民醫院檢驗科，山東 濰坊 261041

抗生素藥物在臨床治療中發揮著較為重要的作用。隨著抗生素藥物的廣泛使用，細菌的耐藥性開始成為患者治療效果的主要影響因素。以產金屬酶的腸桿菌科細菌為例，金屬β-酰胺酶為產金屬酶的腸桿菌科細菌的代表元素，次活性部位以金屬離子為主，是借助金屬離子發揮催化活性的酶類物質。此種物質的活性并不能為青霉素類藥物、頭孢菌素類藥物及碳青霉烯類藥物所控制。既有研究結果表明，此種物質的耐藥基因多集中于細菌染色體、質粒及轉座子等區域，耐藥基因的存在方式以基因盒的形式為主。整合子在同種細菌及不同種細菌中的基因水平轉移，會讓此類細菌的耐藥基因呈現出快速傳播的特點。

1 產金屬酶的腸桿菌科細菌的耐藥基因傳播與多重耐藥性分析

1.1 產金屬酶的腸桿菌科細菌的耐藥基因的傳播 根據既有研究結果，腸桿菌科細菌所具有的獲得性耐藥基因多位于其他耐藥基因決定簇中的整合子[1]。在與其他耐藥基因中的移動基因元件相結合的情況下，產金屬酶的腸桿菌科細菌耐藥性可以借助質粒及轉座子，在同種細菌及不同細菌之間完成基因水平轉移。轉化方式、轉導方式與接合方式也可以被看作是產金屬酶的腸桿菌科細菌耐藥表型船舶方式。在耐藥基因在菌株間傳播的情況下，轉座接合方式在致病菌流行過程中發揮著較為重要的作用。通過對質粒內的基因組進行分析，在存在于不同質粒中的插入序列存在一定差異的情況下，插入序列的差異性也會讓耐藥基因的傳播效率有所提升。在細菌耐藥性研究方面，研究者多認為產金屬酶的腸桿菌科細菌的耐藥基因的傳播過程已經在一定程度上突破了普通細菌之間的局限性，與之相關的傳播機制的研究，在疾病治療及疫情控制等方面均發揮著較為重要的作用[2]。為控制耐藥基因的水平傳播，相關人員需要讀細菌的播撒路徑進行控制。如在產金屬酶的腸桿菌科患者進入重癥監護病房以后，相關人員需要通過合理使用抗生素類藥物的方式清除細菌，避免耐藥菌與耐藥基因的傳播，相關人員也需要對手部衛生及環境衛生進行關注，并要及時對污染物品進行消毒處理。規范化的管理措施與無菌操作理念的有效落實，也可以避免交叉感染的出現。

1.2 產金屬酶的腸桿菌科細菌的多重耐藥性分析 在臨床醫學領域，多重耐藥性主要指的是細菌對3種及3種以上的藥物的耐藥性。通過對此類細菌的耐藥基因傳播路徑進行分析，與細菌耐藥基因傳播路徑有關的可移動介導元件中包含有耐非β-內酰胺類抗生素的相關基因，如磺胺類基因及喹諾酮類基因是可移動介導元件中較為常見的基因。這一研究結果表明產金屬酶的腸桿菌科細菌的多重耐藥性是多因素的綜合作用下的產物，耐藥基因短時期內的大規模傳播，會給抗生素藥物的臨床應用及衛生防疫工作帶來一定的挑戰。除基因因素以外，外膜蛋白缺失、藥物作用靶位變化及青霉素結合蛋白變化等因素的出現，也會在改變細菌與抗生素之間的親和力及提升主動外排系統的活躍性的基礎上，誘發多重耐藥性的出現。

2 產金屬酶的腸桿菌科細菌耐藥表型檢測方法

現階段應用于產金屬酶的腸桿菌科細菌耐藥表型檢測的表型檢測方法可分為以下內容：一是，基于2-巰基乙醇的協同試驗方式；二是，基于EDTA雙紙片技術的協同試驗方式；三是基于吡啶二羧酸的復合紙片技術；四是，基于EDTA的復合紙片技術。根據表型檢測的實施效果，EDTA雙紙片協同試驗可表現出靈敏度高與特異度高的優勢。在反應底物選擇過程中，研究者多認為亞胺培南為更理想的反應底物。現階段表型檢測技術可以表現出簡單實用的優勢，上述檢測方式可在多種不同實驗室中得到應用，但僅限表型的篩查與確認。

改良碳青霉烯滅活實驗也是適用于產金數米誒的腸桿菌科細菌耐藥表型檢測的表型檢測方式。在此種技術應用以后，研究者利用1 μL接種環，將待測菌株置入2 mL肉湯之中，在震蕩混勻15 s以后，將MEM紙片放入含有待測菌株的肉湯，后在25oC分溫水中放置4 h。此種實驗方式的產金屬酶的腸桿菌科細菌的陽性率可以達到98.1%[3]。實驗方式也可以發揮出成本低與操作簡單的優勢。

基因檢測技術葉也在表型檢測分析過程中發揮著較為重要的作用。以實時熒光定量聚合酶鏈反應技術為例，在病原體分離的初始階段，此種技術可以以快速合成的基因為陽性對照物，開展致病基因檢測，此種檢測方式可以讓基因的檢測效率得到一定程度負擔提升，也可以二位稀缺樣品的病原監測提供一定的支持。環節到恒溫擴增技術可以在恒溫環境下進行，在試驗實施過程中，反應引物可以在無需溫度循環的情況下，識別目標序列去種更多的把序列，可以讓基因檢測技術的靈敏度與特異度得到有效提升[4]。免疫層析技術也具有一定的實用性，此種群檢測技術也可以呈現出靈敏度高與特異度高的優勢。

3 結語

腸桿菌科細菌是臨床治療中常見的細菌類型。產金屬酶的腸桿菌科細菌的耐藥性是臨床研究領域所關注的內容。受新型超級耐藥基因及青霉烯酶類抗生素的使用現狀的影響，產金屬酶的腸桿菌科細菌的耐藥情況已經呈現出了嚴峻化的特點。在對與之相關的表征因素進行分析的基礎上，加強細菌耐藥性監測，是抗生素藥物治療方面不可忽視的內容。