血小板抗體和T細胞亞群檢測在診斷原發免疫性血小板減少癥中的意義

岳小利，任宗明，李 莉，伏 俊

(1.廣元市第二人民醫院檢驗科，四川廣元 628000；2.廣元市中心醫院檢驗科，四川廣元 628000)

原發免疫性血小板減少癥(ITP)是一種好發于兒童和青少年的自身免疫性出血疾病[1]。該病的發病是由于不明原因的血小板生成減少和破壞增加，導致血小板計數減少[2-3]。臨床主要以皮膚黏膜出血為主，甚至出現顱內出血導致死亡。對于ITP的診斷尚無特異性指標，主要依靠患者臨床體征和實驗室常規檢查，其中血小板抗體和T細胞亞群檢測是常用的實驗室檢查手段[4-6]。本研究以廣元市第二人民醫院收治的ITP患者為研究對象，通過流式細胞儀檢測血小板抗體和T細胞亞群水平，探討其在疾病診斷中的價值，從而更好地指導臨床工作。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2017年3月至2018年5月廣元市第二人民醫院收治的143例免疫性血小板減少癥患者的臨床資料。其中ITP患者93例，繼發免疫性血小板減少癥(sITP)患者50例。納入標準：符合第8版《內科學》有關免疫性血小板減少癥診斷標準。排除標準：近期使用過激素或免疫抑制劑；凝血功能障礙；妊娠或哺乳期婦女。選取同期在廣元市第二人民醫院體檢的健康志愿者50例為對照組。ITP組男39例，女54例；年齡2～30歲，平均(16.5±9.5)歲。sITP組男31例，女19例；年齡2～29歲，平均(17.1±10.1)歲。對照組男29例，女21例；年齡2～29歲，平均(16.1±10.4)歲。3組性別、年齡等比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有均衡可比性。

1.2方法

1.2.1血小板抗體檢測 采集清晨空腹肘靜脈血2 mL，置入含有乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝劑的真空采血管，800 r/min離心15 min，分離血漿。將所得血漿轉移至流式細胞管，2 000 r/min離心5 min，分離血小板。將所得血小板轉移至另一根流式細胞管，加入磷酸鹽緩沖液洗滌血小板，2 000 r/min離心5 min，分離血小板，如此重復3次。最后用磷酸鹽緩沖液將所獲得的血小板稀釋至5×109/L，分別加入3支流式細胞管，每管100 μL。每管加入20 μL的CD41抗體，再分別加入血小板抗體(PAIgG、PAIgM、PAIgA)各20 μL。混勻器混勻，室溫避光反應15 min。每管加入磷酸鹽緩沖液洗滌，2 000 r/min離心5 min，棄去上清，再各自加入500 μL磷酸鹽緩沖液，上流式細胞儀檢測。

1.2.2T細胞亞群檢測 血樣采集和抗凝處理同1.2.1。將抗凝后的全血分別加入2支流式細胞管，每管100 μL。每管加CD3+/CD8+/CD45+/CD4+抗體各20 μL。混勻器混勻，室溫避光反應15 min。每管再分別加入1 mL的紅細胞裂解液，室溫避光反應15 min。1 000 r/min離心5 min，棄去上清，每管再各自加入500 μL磷酸鹽緩沖液，上流式細胞儀檢測。

2 結 果

2.1各組血小板抗體和T細胞亞群檢測結果比較 方差分析結果顯示，3組血小板抗體和T細胞亞群比較差異有統計學意義(P<0.05)。組內兩兩比較顯示，ITP組患者PAIgG、PAIgM、PAIgA均明顯高于sITP組和對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；ITP組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯低于sITP組和對照組，而CD8+水平明顯高于sITP組和對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2各組血小板抗體和T細胞亞群異常情況比較 ITP組患者PAIgG、PAIgM、PAIgA異常率均明顯高于sITP組和對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。ITP組患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+異常率均明顯高于sITP組和對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組血小板抗體和T細胞亞群檢測結果比較±s)

表2 各組血小板抗體和T細胞亞群異常情況比較[n(%)]

2.3血小板抗體和T細胞亞群診斷ITP的作用 血小板抗體聯合T細胞亞群診斷ITP的ROC曲線下面積(AUC)為0.932，靈敏度為86.5%，特異度為87.5%，均優于單獨診斷。見表3。

表3 血小板抗體和T細胞亞群診斷ITP的作用

3 討 論

臨床能夠引起血小板計數減少的原因很多，如白血病、自身免疫病、腫瘤、再生障礙性貧血、感染、Evans綜合征等都有可能引起血小板計數減少，這一類稱之為sITP[7-8]。目前對于ITP的診斷尚無特異性指標，診斷也主要為排他性診斷，依靠患者臨床體征和實驗室常規檢查，并排除sITP之后，對于不明原因所致的血小板減少可診斷為ITP。

對于ITP的發病機制目前尚無明確定論，大量研究顯示體液免疫和細胞免疫參與了ITP的發病，因為在ITP患者中可觀察到顯著的免疫功能異常改變，主要表現為T、B淋巴細胞活化[9-10]。T淋巴細胞是細胞免疫的主要成分，在抗原刺激時能夠活化并分泌相應的細胞因子，以參與免疫調節功能。其中CD3+、CD4+是最主要的誘導和輔助免疫細胞，能夠增強和擴大其他免疫細胞功能，CD8+又稱為抑制性T細胞，主要平衡CD3+和CD4+功能。有研究顯示[11]，ITP患者CD8+水平增加，能夠直接破壞被抗體包被的血小板，并抑制骨髓中衰老巨核細胞的凋亡，導致血小板生成減少。B細胞產生抗血小板抗體，加強單核巨噬細胞對血小板的吞噬，導致外周血血小板清除增加。有研究顯示[12],患者全血血小板計數與抗血小板抗體成明顯的負相關，也證實了抗血小板抗體增加是導致血小板計數減少的重要原因。

本研究采用流式細胞術檢測血小板抗體和T細胞亞群的水平變化，流式細胞儀具有檢測便捷、快速等特點，而且所需樣本量少，大大減少了工作量，縮短了檢測時間。本研究結果發現，ITP組患者PAIgG、PAIgM、PAIgA均明顯高于sITP組和對照組，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯低于sITP組和對照組，而CD8+水平明顯高于sITP組和對照組。結果表明ITP患者血小板抗體水平顯著升高，T細胞亞群比例失調。這與彭征等[13]、張雪等[14]學者的研究結果基本一致。提示血小板抗體升高和T細胞亞群紊亂參與了疾病的發病，而對于此二者的檢測有利于臨床對ITP的診斷。本研究進一步采用ROC曲線評價血小板抗體和T細胞亞群診斷ITP的作用，結果顯示，聯合診斷的AUC面積和靈敏度均優于單獨診斷，提示血小板抗體聯合T細胞亞群對于ITP具有較高的診斷效能。

4 結 論

ITP患者存在血小板抗體升高和T細胞亞群紊亂的現象，這可能與疾病的發病相關。聯合檢測血小板抗體和T細胞亞群能夠更加準確地反映患者病情，提高診斷的效能，為疾病的臨床治療提供更好的支持。