腫瘤患者外周血T淋巴細胞亞群及NK細胞比例檢測的臨床意義

趙美淇，梁新強，劉海洲，宋慶峰，張夢雅，毛莉莎，蔣士偲，杜江標，曹 雪，崔 英

(廣西醫科大學附屬腫瘤醫院 實驗研究部,廣西 南寧530022)

研究表明，腫瘤的發生與機體免疫功能有著密切的聯系。人體的免疫細胞有很多種，其中外周血T淋巴細胞及自然殺傷細胞起重要作用，T淋巴細胞在腫瘤的發生、發展和抗腫瘤環節中，起到識別、標記和清除腫瘤細胞的作用[1,2]，而自然殺傷細胞不僅與抗腫瘤、免疫調節有關，還有可能參與自身免疫性疾病的發生。通過對淋巴細胞亞群的檢測，可以反映機體的免疫功能狀態[3]。本研究采用流式細胞技術對腫瘤患者和健康人外周血 T 細胞亞群和 NK 細胞活性進行研究,以了解機體的免疫狀態，分析其在健康人與腫瘤患者中的區別，為臨床診治提供相應依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2013年10月—2018年1月廣西醫科大學附屬腫瘤醫院收治的621例腫瘤患者作為腫瘤組，其中男406例，女215例，年齡16-88歲，平均年齡(54.58±12.25)歲；其中，肝癌183例，肺癌114例，胃癌168例，乳腺癌67例，鼻咽癌89例。所有患者均經影像學、病理檢查明確診斷。選取同期到本院體檢的健康人115名為健康組，其中男76例，女39例，年齡25-69歲，平均年齡(53.97±13.08)歲。兩組患者性別構成比、年齡等方面比較差異無統計學意義 (P>0.05),可以進行比較。

1.2 儀器與試劑

采用美國Beckman coulter公司生產的儀器與試劑，ABC溶血素，型號為Epics XL的流式細胞儀，型號為COULTERQ-PREP的自動溶血儀，鼠抗人單克隆抗體CD45/CD4/CD8/CD3和鼠抗人單克隆抗體CD45/CD(16+56)/CD19/CD3。

1.3 檢測方法

被檢者分別于清晨空腹抽取5 ml肘靜脈血，將抽取的靜脈血置于含有乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)的試管中。從試管中吸取100 μl全血，與20 μl熒光素標記的鼠抗人單克隆抗體 CD45/CD4/CD8/CD3、20 μl熒光素標記的鼠抗人單克隆抗體CD45/CD(16+56)/CD19/CD3混勻，在室溫下進行30 min避光反應，1 h內上機檢測。根據前向和側向散射光雙參數點圖，設“門”于白細胞共同抗原(CD45)陽性細胞，計數5000個淋巴細胞，雙參數分析淋巴細胞表面標記，計算出CD3+、CD4+、CD8+、NK和CD19+細胞的百分比含量。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 外周血淋巴細胞亞群在腫瘤組與健康組間的區別

腫瘤組外周血CD3+、CD4+、CD19+細胞比例、CD4+/CD8+比值均低于健康組，NK細胞比例高于健康組(P<0.05)，差異有統計學意義。健康組與腫瘤組間的CD8+值差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組淋巴細胞亞群檢測結果比較

2.2 外周血淋巴細胞水平在不同類型腫瘤患者間的區別

對鼻咽癌患者的數據分析顯示其CD3+、CD4+細胞比例、CD4+/CD8+比值低于其他腫瘤患者(P<0.05)，NK細胞比例高于其他腫瘤患者(P<0.05)；乳腺癌患者的CD4+/CD8+比值低于其他腫瘤患者(P<0.05)；胃癌患者的CD3+細胞比例高于其他腫瘤患者，CD19+細胞比例低于其他腫瘤患者(P<0.05)；不同腫瘤患者間CD8+細胞比例無差異，見表2。

表2 腫瘤組不同腫瘤類型患者淋巴細胞亞群檢測結果比較

3 討論

機體抵抗腫瘤的主要方式是由T細胞介導的細胞免疫，機體的免疫水平可以通過對腫瘤患者外周血淋巴細胞亞群檢測體現[4]。因此，對外周血淋巴細胞亞群的變化進行檢測，可以快速、準確的監視機體免疫狀態。外周血T淋巴細胞亞群包含多種細胞，目前對 CD3+細胞、CD4+細胞和CD8+細胞的作用研究較多[5-8]。NK 細胞在免疫調節中起到非特異性殺傷腫瘤細胞的作用，NK細胞活化后通過細胞因子發揮抗腫瘤作用，其機制是迅速分泌 IFN-α、IFN-γ、IL-2、GM-CSF 等細胞因子，與此同時，NK細胞可以對吞噬細胞的功能進行調節[9]。B細胞是體內唯一能夠產生抗體的細胞，在B淋巴細胞表面有許多種跨膜蛋白，CD19分子是其中一種糖基化Ⅰ型跨膜蛋白，它能夠調節B細胞的活化、增殖，并以協同受體的形式參與B細胞的活化和信號轉導過程[10]。

本研究選擇廣西地區發病率和死亡率較高的惡性腫瘤(肺癌、肝癌、乳腺癌、鼻咽癌)[11]作為研究對象，用流式細胞儀對外周血淋巴細胞亞群的變化進行檢測。結果發現，腫瘤組與健康組比較，CD3+、CD4+、CD19+細胞比例、CD4+/CD8+比值均低于健康組，NK細胞比例高于健康組。說明腫瘤患者存在免疫抑制狀態，這種狀態對機體識別和殺傷突變細胞的能力產生了負面影響，引起免疫功能的失衡，這與國內一些研究結果基本一致[12,13]。已有研究表明：腫瘤細胞微環境中存在許多能夠抑制CD4+細胞成熟、分化的免疫抑制因子，同時CD8+細胞比例上升[14]，CD4+/ CD8+比值降低，使機體進入免疫抑制狀態，導致免疫功能紊亂，腫瘤細胞無法被正常清除，促進了腫瘤細胞的增殖，使病情加速惡化[15]。在T淋巴細胞被抑制的同時，NK細胞比例有所升高，說明NK細胞的免疫反應增強，提示腫瘤患者體內的細胞免疫功能可能促進并激活了NK細胞的增殖。

本研究進一步發現，患有不同腫瘤的個體外周血淋巴細胞比例有差異。其中鼻咽癌與其他腫瘤差異較大，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例顯著低于其他腫瘤，NK細胞比例顯著高于其他腫瘤。乳腺癌的CD4+/CD8+比例低于其他腫瘤。胃癌的CD3+比例高于其他腫瘤，CD19+比例低于其他腫瘤。說明惡性腫瘤細胞在生長、侵襲的過程中，由于組織來源、惡性程度等不同，導致細胞免疫功能也存在一定的差異[16]。這與國內其他研究者的結果略有不同[17-20]，可能與入選腫瘤的類別、樣本量及地域差異有很大關系。由于腫瘤來源的不同，有些腫瘤細胞如鼻咽癌細胞，其表面特異性受體的結構與其他腫瘤有很大差異，使其自身產生不同于其他腫瘤的免疫逃逸機制，在識別與結合靶點方面，效應性T細胞失去了應有的準確性，反饋抑制了CD4+、CD8+細胞等殺傷性淋巴細胞的增殖[21]。NK細胞比例升高可能是由于T細胞在殺傷腫瘤的過程中不斷增殖與進化，NK細胞的非特異性殺傷功能無法識別發生變化的T細胞。因此，在腫瘤的發生、發展過程中，各淋巴細胞亞群的比例會隨著免疫微環境的改變而發生變化，若想及時有效地反映機體的完整免疫狀態，有必要全面的結合其他因子進行聯合檢測[22]，才能更好地評估患者的病情與預后。

綜上所述，外周血中淋巴細胞亞群及NK細胞的變化對早期發現和早期診斷惡性腫瘤具有一定的臨床價值。通過檢測不同淋巴細胞亞群的變化情況，可以及時了解惡性腫瘤患者的免疫狀態。