尿液神經(jīng)絲蛋白檢測(cè)對(duì)老年阿爾茨海默病患者的臨床意義

董艷娟,蔡曉平，劉瑩，劉丹，賀昕

(中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院第七醫(yī)學(xué)中心干部病房三科,北京 100700)

近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)阿爾茨海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白(AD7c-NTP)是分子量為41 kD的跨膜磷蛋白，在神經(jīng)元胞體中表達(dá)，在AD患者腦內(nèi)選擇性升高[1]，與神經(jīng)炎的萌發(fā)以及細(xì)胞的死亡有關(guān)。AD7c-NTP在 AD 患者病理特征神經(jīng)元纖維纏結(jié)中大量存在，并在患者腦中呈分泌性上調(diào)表達(dá)，據(jù)此推測(cè)AD7c-NTP可能與AD的病理過(guò)程有關(guān)[2]。因此在早期或相對(duì)嚴(yán)重的AD患者腦脊液中可檢測(cè)到AD7c-NTP的增高，而且腦脊液中AD7c-NTP的水平與癡呆的嚴(yán)重程度相關(guān)。更進(jìn)一步的研究表明在患者尿液中AD7c-NTP含量的檢測(cè)可以達(dá)到與腦脊液檢測(cè)相同的效果。本文通過(guò)對(duì)老年AD患者尿液中AD7c-NTP的檢測(cè)分析其對(duì)AD診斷及病情嚴(yán)重程度的臨床意義。

表1 兩組基本情況比較

注：MMSE為簡(jiǎn)易智能狀態(tài)檢查量表；CDR為臨床癡呆評(píng)定量表；HIS 為Hachinski缺血指數(shù)量表;AD為阿爾茨海默病，下表同

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象 選取2015年10月至2017年8月在我院干部門(mén)診以及住院診斷為AD患者66例(AD組)，其中男性60例，女性6例；年齡范圍75～96歲，年齡(87.27±4.95)歲。另外選取在我院門(mén)診及老年科就診的智能正常老人85名作為對(duì)照組，其中男性72名,女性13名；年齡范圍74～98歲，年齡(86.93±5.21)歲，均無(wú)癡呆表現(xiàn)。兩組研究對(duì)象基本情況比較見(jiàn)表1。

全部病例年齡均在65歲以上，均進(jìn)行系統(tǒng)的病史采集、神經(jīng)專(zhuān)科查體及癡呆相關(guān)量表測(cè)試，其中包括簡(jiǎn)易智能狀態(tài)檢查量表(MMSE)、臨床癡呆評(píng)定量表(CDR)，Hachinski缺血指數(shù)量表(HIS)。所有病例均行頭部MRI檢查，排除顱內(nèi)占位性病變及感染性疾病。AD組的納入標(biāo)準(zhǔn)：按照美國(guó)國(guó)立神經(jīng)病、語(yǔ)言障礙和卒中研究院(NINCDS)阿爾茨海默病和相關(guān)疾病學(xué)會(huì)(ADRDA)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；按照疾病的嚴(yán)重程度，根據(jù)MMSE與臨床癡呆評(píng)定表(CDR)評(píng)分結(jié)果，將患者分為輕、中、重度3組，分別為21、29、16例；并排除其他原因引起的癡呆。對(duì)照組入組標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)嚴(yán)重心腦血管疾病，血壓、心電圖正常，血常規(guī)、血糖及血脂均在正常范圍；全部行頭部CT及MRI檢查，除外顱內(nèi)占位性病變及感染性疾病。無(wú)神經(jīng)系統(tǒng)體征及明顯的肝、腎或內(nèi)分泌疾病。MMSE≥26分；HIS≤4分；CDR<0.5分。

1.2 標(biāo)本采集 留取受試者晨尿的中段尿，選取清亮的標(biāo)本，經(jīng)尿液分析，去除不合格標(biāo)本(尿蛋白異常、尿液中有紅白細(xì)胞或有細(xì)菌生長(zhǎng)、尿PH值異常、尿糖、酮體、硝酸鹽、膽紅素或尿膽原陽(yáng)性)。合格標(biāo)本離心5 min，取上清液進(jìn)行AD7c-NTP 檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 儀器與試劑 深圳匯松科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的多功能酶標(biāo)分析儀(MB-580型)，試劑盒：來(lái)自深圳安群生物工程有限公司提供的阿爾茲海默病相關(guān)神經(jīng)絲蛋白檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)。

2 結(jié)果

2.1 兩組AD7c-NTP測(cè)定結(jié)果 AD組尿AD7c-NTP陽(yáng)性明顯高于對(duì)照組，兩組陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。見(jiàn)表2。AD組尿AD7c-NTP 的平均水平(3.02±1.53)μg/L明顯高于健康對(duì)照組(1.28±1.16)μg/L，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.439，P<0.001)。

表2 AD組與對(duì)照組尿AD7c-NTP陽(yáng)性率比較

2.2 兩組間MMSE、CDR評(píng)分與AD7c-NTP含量相關(guān)性分析 兩組受試者年齡、性別、教育背景與AD7c-NTP含量的相關(guān)性分析(Pearson相關(guān)分析)顯示，兩組尿AD7c-NTP含量與以上諸因素均無(wú)明顯相關(guān)性；MMSE分?jǐn)?shù)與AD7c-NTP含量呈負(fù)相關(guān)，CDR分?jǐn)?shù)與AD7c-NTP含量呈正相關(guān)。見(jiàn)表3。

表3 各指標(biāo)與尿NTP含量相關(guān)性分析

2.3 尿AD7c-NTP含量變化與AD嚴(yán)重程度的關(guān)系 輕度AD組[(2.02±0.48)μg/L]與中度[(2.89±0.15)μg/L]、重度AD組[(3.36±0.27)μg/L]尿AD7c-NTP含量比較，三組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；三組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=88.756，P<0.001)，且尿中的AD7c-NTP含量隨疾病嚴(yán)重程度增加而上升。

3 討論

近年來(lái)，隨著對(duì)于AD的研究不斷進(jìn)展，與AD相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物逐漸被發(fā)現(xiàn)，如tau蛋白、磷酸化的tau蛋白和Aβ42[4]。目前得到公認(rèn)的診斷阿爾茨海默病的生物學(xué)標(biāo)記有“c-匹茲堡復(fù)合物B”(C-PIB)，PET、基因檢測(cè)，以及腦脊液總tau蛋白、磷酸化tau蛋白、B-淀粉樣蛋白42(Aβ42)，其中，C-PIB PET和基因檢測(cè)費(fèi)用昂貴，檢測(cè)較為繁瑣；而且上述腦脊液標(biāo)志物的方法均為有創(chuàng)性，患者依從性較差，限制了這些方法的臨床應(yīng)用。

20世紀(jì)末Monte等[1]從AD患者的腦脊液中分離出AD7c-NTP神經(jīng)絲蛋白，并發(fā)現(xiàn)這種蛋白在神經(jīng)元中表達(dá)，定位于神經(jīng)細(xì)胞軸突，在AD患者的皮層神經(jīng)元、腦組織抽提物、腦脊液中都有升高，并且發(fā)現(xiàn)其含量與癡呆的嚴(yán)重程度成相關(guān)[5]。隨后的研究發(fā)現(xiàn)AD患者尿樣本中AD7c-NTP相對(duì)分子質(zhì)量與腦組織及腦脊液中AD7c-NTP相對(duì)分子質(zhì)量相同，對(duì)于診斷AD有較高的敏感度和特異度[6]，為臨床使用尿 AD7c-NTP含量對(duì) AD 的診斷，提供了一項(xiàng)有重要意義的檢測(cè)手段。并且尿液AD7c-NTP檢測(cè)為一項(xiàng)無(wú)創(chuàng)體外檢測(cè)方法，樣本采集方便，易于被患者接受，這使得通過(guò)檢測(cè)尿液中的AD7c-NTP來(lái)協(xié)助診斷AD成為可能。

本研究以老年人為研究對(duì)象，對(duì)尿液AD7c-NTP含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在老年AD 患者中尿 AD7c-NTP 水平較健康對(duì)照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，提示尿 AD7c-NTP 水平檢測(cè)有助于AD的診斷，與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果一致[4-5]。并且AD7c-NTP水平與AD嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，輕度、中度、重度AD組尿AD7c-NTP的含量有顯著差異，并且隨病情的嚴(yán)重程度增高，提示尿 AD7c-NTP 水平檢測(cè)有可能對(duì)于AD嚴(yán)重程度的判定有一定幫助。尿 AD7c-NT屬于神經(jīng)絲蛋白家族，在早中期AD患者的腦組織、腦脊液、尿液中均有所升高，有研究報(bào)道尿AD7c-NTP與認(rèn)知障礙患者的Aβ沉積方面具有較高特異性和中等敏感性[7]；其含量與癡呆的嚴(yán)重程度相關(guān)使得其有可能成為 AD 的特異性生物標(biāo)志物。檢測(cè)尿液中的AD7c-NTP水平，方法具有無(wú)創(chuàng)性，標(biāo)本留取方便，易被老年患者接受；ELISA檢測(cè)方法可操作性強(qiáng)、簡(jiǎn)單、方便，易于在臨床開(kāi)展，有助于早期發(fā)現(xiàn)和診斷AD。