紫景天黃酮對實驗性牙周炎大鼠血清中IFN-γ水平的影響

姜 靜，孔晨飛，王曉峰*，王 偉，王歡歡，張殿文，王 清

(1.吉林大學中日聯誼醫院 a.口腔科;b.科學研究中心，吉林 長春130033；2.吉林省中醫藥科學院)

牙周炎是口腔臨床多發病，是導致牙缺失的主要原因之一，嚴重影響咀嚼功能，牙周炎病因尚未完全明確，但國內外學者較公認免疫因素與牙周炎發生有重要的關系[1]。IFN-γ是Th1型細胞因子，由CD4+T淋巴細胞分泌，Th1參與牙周炎的免疫應答[2,3]。本研究通過應用紫景天黃酮治療大鼠實驗性牙周炎，探討紫景天黃酮對實驗性牙周炎大鼠血清中IFN-γ水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級Wistar大鼠28只,購買于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司，雌雄各半，體重：180-220 g，年齡：6-8周，序號：201800020338。

1.2 實驗試劑與儀器

牙齦卟啉單胞菌(吉林大學基礎醫學院病原生物學系提供)，濃度1.0%紫景天黃酮凝膠(基質為16%泊洛沙姆)由吉林省中醫藥科學院制劑室提供，大鼠血清IFN-γ的ELISA試劑盒(武漢華美生物工程有限公司)，離心機(德國Eppendorf)，微量移液儀(德國Eppendorf),多功能酶標儀(加拿大BioTek公司)

1.3 建立實驗性牙周炎大鼠模型及分組

8只健康的大鼠作為正常對照組。20只健康Wistar大鼠按參考文獻方法[4，5]采用帶菌絲線結扎的方法建立大鼠實驗性牙周炎模型。4周后有2只大鼠因結扎線脫落被淘汰，任選2只處死，取牙周炎患牙牙周組織進行組織病理學檢查，鏡下牙周組織內大量炎細胞浸潤，可見微小膿腫形成；牙齦深層組織內形成水腫與纖維組織增生，可見牙槽骨吸收，表明牙周炎模型建立成功。剩余建模成功大鼠共16只，隨機分為紫景天黃酮治療組和模型對照組，每組各8只。

1.4 藥物干預

治療組大鼠在牙周炎患牙齦溝注入1.0%紫景天黃酮凝膠，模型組注入基質，均為每日2次，0.5 ml/次/只，次間隔為8 h，連續涂藥14天。

1.5 血樣采集

將3組大鼠用3%水合氯醛10 ml/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，將血液離心(1 500 r/min,15 min)后取上清，-80℃保存。最終每組大鼠取合格血清樣本為6份。

1.6 實驗室檢測

嚴格按照ELISA試劑盒的使用方法對各組大鼠血清中的IFN-γ進行檢測，使用酶標儀測量得到光密度值(OD值)。

1.7 統計學分析

2 結果

正常組、模型組和治療組大鼠血清中IFN-γ的表達量分別為0.171±0.023 pg/mL，0.373±0.026 pg/mL，0.216±0.027 pg/mL。模型組大鼠血清中IFN-γ的含量明顯高于正常大鼠(P<0.001),紫景天治療組血清中IFN-γ含量明顯低于模型對照組(P<0.001)。三組大鼠血清中IFN-γ含量的比較見圖1。

圖1 紫景天黃酮對實驗性牙周炎大鼠血清中IFN-γ的影響

3 討論

牙周炎是以牙菌斑為始動因子引起的感染性疾病，伴有牙周支持組織的破壞，牙周袋形成、附著喪失和牙槽骨吸收。牙周炎病情的進展是由菌斑和宿主反應共同引起的，宿主的防御細胞既能抵御外界病源微生物,又能釋放大量的細胞因子和炎癥介質，導致牙周組織的繼發性損傷[5]。IFN-γ在慢性牙周炎的發病機制中發揮作用，并與疾病狀態有很大的關聯，且牙周炎患者唾液中IFN-γ的水平較正常人有明顯增高[6]。隨著牙周袋深度和附著喪失的增加，齦溝液中IFN-γ的表達也明顯上升[7]。本研究結果表明實驗性牙周炎大鼠血清中IFN-γ的含量明顯高于正常大鼠，可以推論IFN-γ確與牙周炎具有一定的相關性。

牙周炎病因尚不清楚，治療方法有限，其中最主要的治療方法是牙周袋內用藥。牙周袋內用藥多為抗生素類藥物，易導致菌群失調等副作用，用抗菌藥物輔助治療牙周炎成為牙周病藥物治療的主要用藥方法[8]。牙周袋局部用藥多為抗生素類藥物，長期使用易引起局部菌叢失調[9]。

紫景天為長白山野生藥材，前期藥理實驗中[10]通過鼠耳腫脹法、腹腔通透性法、熱板法、醋酸扭體法等證明，紫景天可明顯抑制藥物導致的小鼠耳腫脹和小鼠腹腔通透性，顯著延長熱刺激所致小鼠疼痛反應時間，減少醋酸所致小鼠扭體反應次數，表明該藥兼有抗炎和鎮痛作用。紫景天含有槲皮素和山柰素等黃酮類成分，對牙齦卟啉菌、放線共生放線桿菌、產黑色素擬桿菌均有較好的抑菌療效,即對牙周炎易感菌有明顯的抑制作用[9]。

本研究采用紫景天提取黃酮制作出凝膠劑治療大鼠實驗性牙周炎，明顯降低了實驗性牙周炎大鼠血清中IFN-γ的表達水平，對大鼠免疫功能可能具有一定的調節作用，從而起到減輕大鼠牙周炎癥的作用。紫景天黃酮對大鼠全身及牙周局部免疫因子的調節機理還有待于進一步的研究。