低情緒對雌性大鼠血清性激素作用及與多囊卵巢綜合征的關系探討

李鴻奎，姬丙哲，張祖源，陳 靜，李丙楠，馬金鑫，段麗娜，丁 玉

(黃河科技學院 醫學院，河南 鄭州 450000)

多囊卵巢綜合征[1](Polycystic ovarian syndrome,PCOS)，是育齡婦女常見的一種內分泌疾病，在1935年由Stein和Leventhal首次報道，近年來其患者的心理問題受到一些學者的關注，而從精神、心理學在解剖、遺傳和內分泌等方面的研究進展，特別是從應激所引起的內分泌變化方面的研究來看，精神、心理因素與之有廣泛的聯系，有可能是多囊卵巢綜合征的誘因之一，并可能是引起其遠期并發癥的重要因素。本實驗通過對大鼠進行情志刺激，觀察大鼠血清性激素的改變，進而探討情志刺激對多囊卵巢綜合征的影響具有臨床意義。

結果匯報如下。

1 實驗材料

1.1 動物

選用SPF級6～8周齡雌性大鼠45只，體重(200±20) g,由河南省鄭州市中原區玉飛種兔公司提供。飼養于黃河科技學院實驗樓，三樓動物飼養房，采用IVC鼠籠喂養，投喂標準飼料，光照10 h/d，溫度20～23 ℃，相對濕度45%～65%。

1.2 主要實驗藥物與試劑

50%葡萄糖注射液(湖北科倫藥業有限公司，產品批號：C180902XA)、水合氯醛[2](上海展云化工有限公司，批號：180923)

1.3 實驗儀器及設備

三諾安穩免調碼血糖儀(產品標準編號：YZB/湘0043-2012，版本號：QY-PY-VPU)、三諾安穩免調碼血糖試條(批號820625)、三諾一次性使用末梢采血針(生產批號：180908)、電子天平(批號：XJ320M,上海精科天美科學儀器有限公司)、顯微鏡(奧林巴斯CX22無窮遠生物顯微鏡，日本)、一次性使用負壓采血容器(山東省成武縣醫用制品廠，生產批號：20181102)、羅氏Cobas e601型全自動電化學發光免疫分析儀(試劑批號：304760、315724、315772、329429)、羅氏Cobas e602型全自動電化學發光免疫分析儀(試劑批號：295188、304760、315772、329429)。

2 方法

2.1 具體動物分組及造模方法

2.1.1 動物分組

進行open-field[3]法行為學評分后，45只雌性大鼠隨機分為正常健康組15只、輕度抑郁組15只、重度抑郁組15只。

2.1.2 造模方法[4]

不良刺激包括：禁食(除去鼠籠飼料，24 h)、禁水(除去鼠籠存水，24 h)、濕籠(向鼠籠中均勻灑水300 mL，早7點至晚19點，共12 h，晚上更換墊料)，斜籠(鼠籠靠墻傾斜放置，24 h)、水平搖晃(不斷劇烈水平搖晃鼠籠，每日早、中、晚，共3次，每次5 min)、敲打鼠籠(用木棒不斷敲打鼠籠，每日早、中、晚，共3次，每次5 min)、日照直射(放置于日光直射處，12 h)。正常健康組，每日進行正常飼喂，保證飲水、飼料充足，鼠籠干燥，無不良刺激。輕度抑郁組，每日進行一項不良刺激，每種刺激不連續使用，且根據每日刺激要求，進行飼喂大鼠。重度抑郁組，每日同時進行兩項不良刺激，每種刺激不連續使用，且根據每日刺激要求，進行飼喂大鼠。連續30 d。造模結束后，在正常組、輕度組、重度組中，分別隨機選取12只，進行陰道脫落物涂片及口服糖耐量實驗(OGTT)，于大鼠動情間期，將其麻醉，腹主動脈取血后，稱量子宮及附件凈重，并將大鼠處死。

2.2 觀察內容及方法

2.2.1 口服糖耐量試驗(OGTT)

大鼠禁食不禁水12 h，以3 g/kg劑量灌服50%葡萄糖溶液，用血糖儀測定大鼠灌胃后0、30、60、120 min時血糖值，計算葡萄糖曲線下面積(AUC)，公式為AUC=A/2+B+C+D/2(A為空腹值，B為30 min值，C為60 min值，D為120 min值)。

2.2.2 計算穩態模型胰島素抵抗指數[5](IR)、胰島素敏感指數(ISI)

IR=空腹血糖(mmol/L)×空腹胰島素(mIU/L)/22.5；

ISI=1/(空腹血糖×空腹胰島素)。

2.2.3 動情周期

連續2個周期大鼠陰道脫落物細胞涂片，HE染色觀察大鼠動情周期。

2.2.4 計算BMI值

分別用電子體重測量儀測量體重，用皮尺測量大鼠鼻至肛門直線距離，并計算BMI值。BMI=體重(kg)/身長2(m)

2.2.5 稱量子宮及附件凈重

腹主動脈取血后，解剖大鼠子宮及附件，觀察期形態是否存在異常，并且使用電子體重測量儀測量子宮及附件凈重。

2.2.6 大鼠血清胰島素(INS)、卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成素(LH)、睪酮(T)水平

待測血清，用ELISA法檢測其INS、FSH、LH、T水平，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

2.3 統計學方法

3 結果與分析

3.1 低情緒大鼠對于空腹血糖值(GLU)及葡萄糖曲線下面積(AUC)的影響

與健康組相比，輕度抑郁組GLU及AUC(P>0.05)無明顯差異，重度抑郁組的GLU及AUC增加顯著(P﹤0.01)具有顯著差異。與輕度抑郁組相比，重度抑郁組的GLU及AUC增加顯著(P﹤0.01)具有顯著差異，見表1、圖1。

表1 低情緒大鼠對于空腹血糖值(GLU)及葡萄糖曲線下面積(AUC)的影響

注:與健康組相比，△△P﹤0.01、△△△P>0.05；與模型組比較，##P﹤0.01。

圖1 三組大鼠葡萄糖曲線下面積(AUC)比較折線圖

3.2 低情緒大鼠對于穩態模型胰島素抵抗指數(IR)、胰島素敏感指數(ISI)的影響

與健康組相比，輕度抑郁組IR有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異，ISI有明顯減少(P﹤0.01)具有顯著差異，重度抑郁組的IR有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異，ISI有明顯減少(P﹤0.01)具有顯著差異。與輕度抑郁組相比，重度抑郁組IR有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異，ISI有明顯減少(P﹤0.01)具有顯著差異，見表2、圖2。

表2 低情緒大鼠對于穩態模型胰島素抵抗指數(IR)、胰島素敏感指數(ISI)的影響

注:與健康組相比，△△P﹤0.01；與模型組比較，##P﹤0.01。

圖2 三組大鼠胰島素抵抗指數(IR)比較折線圖

3.3 低情緒大鼠對于其體重、BMI值及卵巢質量的影響

與健康組相比，輕度抑郁組大鼠體重和BMI(P>0.05)無明顯差異，卵巢重量有明顯上升(P﹤0.05)具有顯著差異，重度抑郁組大鼠體重和BMI(P>0.05)無明顯差異，卵巢質量有顯著上升(P﹤0.01)具有顯著差異。與輕度抑郁組相比，重度抑郁組大鼠體重和BMI(P>0.05)無明顯差異，卵巢質量有明顯上升(P﹤0.01)具有顯著差異，見表3。

表3 低情緒大鼠對于其體重、BMI值及卵巢質量的影響

注:與健康組比較，△P﹤0.05、△△P﹤0.01、△△△P>0.05；與輕度組比較，##P﹤0.01、###P>0.05。

3.4 低情緒大鼠對于INS、FSH、LH、T水平的影響

與健康組相比，輕度抑郁組INS、LH、T有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異，FSH(P>0.05)不具有顯著差異，重度抑郁組INS、LH、T、FSH有明顯增加(P﹤0.01)具有顯著差異。與輕度抑郁組相比，重度抑郁組T具有明顯增高(P﹤0.05)，INS、LH、FSH有顯著增高(P﹤0.01)具有顯著差異，見表4、圖3、4。

表4 低情緒大鼠對于INS、FSH、LH、T水平的影響

注:與健康組比較，△△P﹤0.01、△△△P>0.05；與輕度組比較，#P﹤0.05，##P﹤0.01。

圖3 三組大鼠FSH、LH、T比較柱狀圖

圖4 三組大鼠血清胰島素(INS)比較折線圖

4 討論

多囊卵巢綜合征(PCOS)是婦科臨床常見的生殖功能障礙性疾病，主要臨床表現是月經后期、閉經、不孕、卵巢內卵泡增多及卵巢增大等生殖功能障礙和肥胖、多毛、黑棘皮、瘦瘡等代謝異常癥狀。現代研究明確，PCOS患者垂體分泌的LH(促黃體生成素)水平、LH(促黃體生成素)水平升高，卵母細胞被LH誘導，過早成熟導致其受精能力下降及著床困難，最終導致PCOS患者不孕和流產。PCOS患者體內分泌雄激素升高，造成高雄激素血癥[6]，這會使得卵泡成熟停滯及閉鎖。與此同時，閉鎖的卵泡導致顆粒細胞快速調亡，被成纖維細跑和卵泡膜細胞替代，卵巢的間質增厚且細胞在LH的作用下又合成雄激素，形成高度惡性循環。此外，體內的雌激素過多是PCOS患者的另一重要病理特征。過量的雄激素抑制了卵泡的發育，雄激素在芳香化酶的催化作用下還可以轉變成雌激素。雌激素的含量的上升直接反饋于下丘腦及垂體，使患者FSH分泌減少和LH分泌増多，患者卵泡成熟障礙及排卵阻礙形成多囊卵巢。PCOS病理生理復雜，長期以來被公認為是一個異質性綜合征，遠期來看還增加了患者的也血管疾病、子宮內膜癌等疾病的發生率。此外，胰島素抵抗和高胰島素血癥提升了PCOS患者非胰島素依賴性糖尿病的患病風險。

PCOS的發病機制十分的復雜，目前對精神也理因素的探究受到越來越多的國內外學者的關注。大多數學者認為情志關系與PCOS的發病關系非常密切，其原因為女性的生殖內分泌系統受到下丘腦-垂體-卵巢軸的拉制與調節。其中的下丘腦不但調節著人體內分泌中樞，還調控著人體的情感中樞和情緒中樞。情緒和情感的變化在這個時候反作用于下丘腦。PCOS患者抑郁狀態還可能與炎性因子有關，但需進一步研究其機制。有研究表明，生活壓力大和低學歷水平，長期的焦慮和抑郁、和不同的工作性質是引發PCOS的危險因素。

本課題，目的在于探索通過對大鼠進行情志刺激，觀察大鼠血清性激素的改變，進而探討情志刺激對多囊卵巢綜合征的影響，初步研究情志刺激對大鼠性激素的影響作用，重點對受刺激大鼠血清雄激素、卵泡雌激素、黃體生成素與多囊卵巢的關系進行分析。

本實驗中，在大鼠抑郁模型造模結束后，進行腹主動脈采血的過程操作時，剖開腹部后，可明顯見到子宮整體充血脹大，重度抑郁組尤甚，采血后稱量卵巢重量，重度抑郁組也明顯高于其他兩組。經過分批次的血樣送檢，并對最終結果進行整合分析后發現，與健康組相比，由于輕度抑郁組和重度抑郁組大鼠，所受刺激強弱和程度不同，其各組大鼠的空腹血糖、空腹胰島素和葡萄糖曲線下面積、HOMA-IR指數、INS、LH、T、卵巢重量，均有不同程度的上升，ISI指數下降，體重及BMI值、FSH(P>0.05)無明顯差異，并且兩組大鼠均無規律的動情周期，無排卵。

實驗表明:由于情志刺激，可引起大鼠血性清激素的改變，繼而引發相關的多囊卵巢綜合征的發病。本實驗證明了情志刺激引起的激素變化與多囊卵巢相關的影響因素，并為臨床進行低情緒預防性和針對性治療提供依據，提高患者的生存質量。