SPF金黃地鼠乳汁成份分析

夏 爽，范方玲，甘 露，夏 放

(成都生物制品研究所有限責(zé)任公司，成都 610023)

金黃地鼠(golden hamster;Mesocricetusauratus)又稱(chēng)敘利亞地鼠，毛色呈金黃色，成年體重120～150 g左右，染色體22對(duì)。金黃地鼠作為常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中的作用越來(lái)越受到重視，使用量?jī)H次于小鼠、大鼠和豚鼠而居嚙齒類(lèi)第4位[1]。金黃地鼠的用途主要在三個(gè)方面，首先是對(duì)可誘發(fā)腫瘤的病毒很易感，腫瘤組織接種到口腔頰囊中易生長(zhǎng)，也便于觀察，同時(shí)還是能夠誘發(fā)胰腺癌的唯一動(dòng)物模型。故成為腫瘤學(xué)研究中最常用的動(dòng)物；第二， 金黃地鼠常年發(fā)情，妊娠期短，性成熟早，繁殖傳代快，發(fā)情周期準(zhǔn)確，特別適用于生殖生理研究；第三，金黃地鼠組織細(xì)胞體外培養(yǎng)容易建立二倍體細(xì)胞株，特適合組織培養(yǎng)研究。腎細(xì)胞可被做成細(xì)胞培養(yǎng)物接種病毒，用以分離或制備疫苗；為了長(zhǎng)期保持已有SPF金黃地鼠種群的質(zhì)量?jī)?yōu)勢(shì)，最大限度降低種群被污染的風(fēng)險(xiǎn)，為此需要建立一支無(wú)菌金黃地鼠種群，可以通過(guò)剖腹產(chǎn)技術(shù)，由無(wú)菌金黃地鼠代乳或者將無(wú)菌金黃地鼠直接降級(jí)為SPF金黃地鼠，從而避免種群由于污染而面臨毀滅的危險(xiǎn)。無(wú)菌金黃地鼠還可作為某些人類(lèi)腸道疾病的動(dòng)物模型，在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域有著不可替代的價(jià)值[2]。本文對(duì)金黃地鼠乳汁的主要成份進(jìn)行測(cè)定，并與牛乳、人乳及嬰兒配方奶的主要成分進(jìn)行比較，為下一步創(chuàng)建無(wú)菌金黃地鼠種群的人工哺乳工作及配方乳的配制工作提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)金黃地鼠種群來(lái)自成都生物制品研究所有限責(zé)任公司[SCXK(川)2016-126]，分批選取60只分娩后(1～10 d)的哺乳期雌鼠。動(dòng)物飼養(yǎng)間為C級(jí)屏障系統(tǒng)[SYXK(川)2016-090]，溫度控制范圍(20～26)℃，相對(duì)濕度40%～70%，日光照12 h，飼養(yǎng)間內(nèi)保持清潔、安靜、通風(fēng)良好，定期消毒。金黃地鼠全價(jià)顆粒飼料，主要營(yíng)養(yǎng)成份符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料標(biāo)準(zhǔn)GB14924.1-2001和GB14924.3-2010，懷孕哺乳期間自由采食。本實(shí)驗(yàn)遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道主義關(guān)懷。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 地鼠乳汁的采集

每批選取10只分娩后(1～10 d)的哺乳期雌鼠，先將幼崽與母鼠分籠飼養(yǎng)4 h以上，保持母鼠水料充足。4 h以后給母鼠注射3%戊巴比妥鈉每只0.6 mL，后繼續(xù)注射獸用縮宮素(寧波市三生藥業(yè)有限公司，2 mL：每支10單位)每只0.3 mL。待母鼠完全麻醉處于放松狀態(tài)后，暴露乳頭，用溫水清潔乳頭皮膚并輕柔按摩，用自制電動(dòng)吸奶裝置收集乳汁，隔日1次,連續(xù)3～5次，每只金黃地鼠采取乳汁總量約6～10 mL，每次采集完畢立即凍存于-26℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 檢測(cè)方法

將所凍存的金黃地鼠乳汁(混合樣品)低溫運(yùn)送至廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限由該中心按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行檢測(cè)，其中粗蛋白：參照GB/T 6432-1994 7.2；粗脂肪：參照GB/T 6433-2006；乳糖：參照GB/T 5413-2010第二法；灰分：參照GB/T 5009.4-2016第一法；水分：參照GB/T 5009.3-2016第一法；PH:參照GB/T5009.237-2016；鉀、鋅、錳、鈣、鐵、鈉、銅、鎂、鋁：參照GB/T5009.268-2016第一法；磷：參照GB/T 5009.87-2016第一法；氟：GB/T 5009.18-2003第三法；維生素C:參照GB/T 5009.86-2016第一法；維生素K1:參照GB/T 5009.158-2016第一法；維生素A參照GB/T 17817-2010第一法；維生素D:參照GB/T 5009.82-2016第四法；維生素E:參照GB/T 17812-2008第一法；維生素B1:參照GB/T 5009.84-2016第一法； 維生素B2:參照GB/T 5009.85-2016第一法；維生素B6:參照GB/T 5009.154-2016。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)單位換算。

2 結(jié)果分析

2.1 金黃地鼠乳汁成分

金黃地鼠乳汁由水分和總干物質(zhì)組成，其中總干物質(zhì)中又包括了脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、礦物質(zhì)及維生素等[3](表1)。金黃地鼠乳水分含量86.9%、脂肪2.4%、蛋白質(zhì)6.95%、乳糖2.61%、灰分0.83%(表1)。

2.2 金黃地鼠乳成分分析

金黃地鼠乳和牛乳、人乳的主要成份十分相似，都是由水分、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、鈣、磷、鉀、鈉、鎂、銅、鋅等物質(zhì)構(gòu)成[4]。本次參考的嬰兒配方奶粉為荷蘭生產(chǎn)的海普諾凱嬰兒配方奶粉(0～6個(gè)月齡適用)，金黃地鼠乳中蛋白質(zhì)含量明顯高于牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉，分別為牛乳的1.66倍，人乳的3.52倍，嬰兒配方奶粉的4.63倍；金黃地鼠乳中脂肪含量低于牛乳和嬰兒配方奶粉，僅為牛乳的35.6%，嬰兒配方奶粉的68.4%，與人乳接近；金黃地鼠乳中乳糖含量最低，僅為牛乳的58.7%，人乳的41.4%，嬰兒配方奶粉的18.5%；金黃地鼠乳微量元素中鉀、鈉、銅鋅的含量明顯高于牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉；維生素B2、維生素B6的含量也明顯高于牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉，具體參見(jiàn)表2。

表1 金黃地鼠乳主要成份含量表

表2 金黃地鼠乳，牛乳、人乳和嬰兒配方奶粉主要營(yíng)養(yǎng)成分

3 討論

金黃地鼠在動(dòng)物模型建立以及疫苗制造過(guò)程中的用途越來(lái)越廣泛，為進(jìn)一步拓展金黃地鼠的應(yīng)用范圍，計(jì)劃建立無(wú)菌金黃地鼠種群。建立無(wú)菌金黃地鼠種群的必要性：可以長(zhǎng)期保持已有SPF金黃地鼠種群的質(zhì)量?jī)?yōu)勢(shì)，防止和避免SPF金黃地鼠種群受到污染而種群毀滅的危險(xiǎn)；可以實(shí)驗(yàn)性用于乙腦等疫苗的生產(chǎn)，以克服因SPF金黃地鼠攜帶菌污染細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程；作為人類(lèi)疾病動(dòng)物模型的材料，可用于多種人類(lèi)疾病動(dòng)物模型的建立和腸道菌群的研究。培育無(wú)菌動(dòng)物通常采用無(wú)菌剖腹產(chǎn)方法，然后用配方乳或代乳喂養(yǎng)。乳汁是乳腺在受神經(jīng)和內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)下，腸內(nèi)吸收的物質(zhì)與血液之間的過(guò)濾，提取分離而生成，對(duì)自然環(huán)境中培育新生子代的成活率起到關(guān)鍵的作用[8]。本文對(duì)金黃地鼠乳汁的主要成分進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與人乳、牛乳、嬰兒配方奶粉的主要營(yíng)養(yǎng)成分十分相似，均由水、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、礦物質(zhì)及維生素等組成，初步弄清金黃地鼠乳的主要成份及含量。并與牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉的主要成分比較，由于哺乳動(dòng)物物種特性的差異，金黃地鼠乳汁與牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉在成分含量上還是存在明顯差異；同時(shí)可以根據(jù)金黃地鼠乳汁高蛋白、低脂肪和低乳糖的特點(diǎn)指導(dǎo)人工乳配方成分的調(diào)制，以提高人工喂養(yǎng)仔鼠的成功率，為建立無(wú)菌金黃地鼠種群提供科學(xué)依據(jù)和基礎(chǔ)保障。

注：金黃地鼠是倉(cāng)鼠科倉(cāng)鼠亞科金倉(cāng)鼠屬動(dòng)物，在公開(kāi)出版物中使用倉(cāng)鼠作為名稱(chēng)更為科學(xué)。但鑒于目前我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中提到的動(dòng)物的種類(lèi)都是地鼠，作為專(zhuān)業(yè)人員能夠清楚該物種在動(dòng)物分類(lèi)中地位，并不妨礙科學(xué)研究的成果和使用，故本文在發(fā)表時(shí)仍沿用“金黃地鼠”，待國(guó)標(biāo)修訂后再統(tǒng)一命名為“倉(cāng)鼠”。