E-cad啟動子區(qū)甲基化與其在子宮內(nèi)膜異位癥的表達的相關(guān)性分析

葉麗珍

研究背景：子宮內(nèi)膜異位癥簡稱內(nèi)異癥，作為一種具有侵襲性的婦科良性疾病，它表現(xiàn)的子宮內(nèi)膜組織的遠處種植與生長，與惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移性極其相似。目前其發(fā)病機制尚未清楚。最近研究表明，作為重要的粘附因子之一的E-cad表達的下降或喪失與惡性腫瘤的低分化、高侵襲、淋巴及遠處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。以E-cad基因啟動子區(qū)的DNA甲基化為代表的表觀遺傳改變可能是某些腫瘤中表達減少或喪失的主要原因。學(xué)者們推測，在具有與惡性腫瘤相似生物學(xué)行為的內(nèi)異癥發(fā)生、發(fā)展中，細胞粘附分子E-cad表達的下降或喪失可能起同樣重要作用，E-cad基因啟動子甲基化與內(nèi)異癥相關(guān)，可能是內(nèi)異癥發(fā)病中的異位內(nèi)膜種植的始發(fā)機制之一。

關(guān)鍵詞：鈣粘蛋白;啟動子甲基化;子宮內(nèi)膜異位癥

研究目的：本研究通過檢測子宮內(nèi)異癥的異位內(nèi)膜及對照組在位內(nèi)膜組織的E-cad啟動子區(qū)甲基化狀況與其蛋白表達關(guān)系，探索內(nèi)異癥可能的發(fā)病機制，以及在發(fā)生、發(fā)展中的作用，為子宮內(nèi)膜異位癥的治療找到新的突破點，并為進一步可能的臨床治療建立理論基礎(chǔ)。

研究方法：

1.樣本資料：采用隨機對照法，收集廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦科2013年1月至2015年1月手術(shù)治療的并經(jīng)病理證實的標(biāo)本共65例，其中異位內(nèi)膜組織（巧克力囊腫囊腫）45例為研究組，對照組為20例同期因診刮、子宮切除而取到的正常子宮內(nèi)膜組織。

2方法：通過免疫組化、Western Blotting檢測E-cad異位與在位內(nèi)膜表達情況;并采用甲基化特異性PCR檢測異位與在位內(nèi)膜E-cad啟動子甲基化狀況。

3.統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。用X²和Spearmans等級相關(guān)性分析比較異位內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜E-cad蛋白表達及甲基化情況。P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

對比結(jié)果：

1.內(nèi)異癥組E-cad蛋白陽性率為40%，對照組中E-cad蛋白陽性率為100%。X²=20.526，P=0.000，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.內(nèi)異癥組13例Ⅰ-Ⅱ期樣本中，E-cad蛋白陽性率為61%，17例Ⅲ期樣本中，E-cad蛋白陽性率為41%，15例Ⅳ期樣本中，E-cad陽性表達率降低為2%，內(nèi)異癥組E-cad蛋白陽性率在不同的臨床分期呈直線相關(guān)，X²=5.023，P=0.081，P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。

3.45例內(nèi)異癥組中甲基化例數(shù)為26例，甲基化率為58%;20例對照組中甲基化例數(shù)為0，甲基化率為0%。X²=19.259，P=0.000，P<0.05。有統(tǒng)計學(xué)意義。

4內(nèi)異癥組Ⅰ-Ⅱ期E-cad啟動子甲基化率為23%，Ⅲ期甲基化率為59%，Ⅳ期甲基化率為86%。X²=9.702，P=0.008，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

5.Spearmans等級相關(guān)分析顯示在內(nèi)異癥不同臨床分期中E-cad啟動子甲基化與蛋白表達之間相關(guān)系數(shù)，分別是Ⅰ-Ⅱ期r=-0.850，Ⅲ期r=-0.842，Ⅳ期r=--0.961，P=0.000，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

（一）內(nèi)異癥組異位內(nèi)膜和對照組在位內(nèi)膜組織中E-cad蛋白表達情況分析

把收取的45例內(nèi)異癥異位內(nèi)膜和20例對照組正常子宮內(nèi)膜樣本為對照分別石蠟包埋切片，以E-cad為一抗，進行免疫組化試驗，得到每個樣本的免疫組化的組織切片，按照上面試驗方法介紹的E-cad蛋白表達陽性與陰性判定方法，判定E-cad蛋白是否表達。按照要求讀片，根據(jù)文獻報道正常的子宮內(nèi)膜腺上皮有E-cad表達，而內(nèi)異癥中E-cad蛋白有低表達或者不表達。實驗結(jié)果見表1內(nèi)異癥組、對照組E-cad蛋白陽性率表達比較。（n，%）

E-cadherin基因啟動子CpG島的異常甲基化可能是導(dǎo)致蛋白表達下調(diào)的原因之一。諸多惡性腫瘤中，E-cad基因啟動子區(qū)域呈現(xiàn)高度甲基化引致的E-cad表達喪失是腫瘤侵襲性的可能機制，那么，在具有與惡性腫瘤相似遠處種植行為的內(nèi)異癥發(fā)病中，E-cad啟動子甲基化也可能是引起該基因表達下降或喪失的關(guān)鍵原因。

結(jié)論

E-cad在子宮內(nèi)膜異位癥中呈低表達，E-Cad啟動子5端CpG島甲基化可能是內(nèi)異癥中該基因失活的機制之一。E-cad啟動子區(qū)域5CpG島在內(nèi)異癥中呈高甲基化狀態(tài)，而在正常內(nèi)膜組織則為非甲基化狀態(tài)，E-cad基因啟動子異常甲基化可能與為內(nèi)異癥有密切相關(guān)性，可能參與內(nèi)異癥的發(fā)生、發(fā)展。E-cad基因啟動子區(qū)域5CpG島在Ⅲ、Ⅳ期內(nèi)異癥者中的甲基化率顯著高于Ⅰ、Ⅱ期，而E-cad蛋白表達率則相反。E-cad啟動子甲基化程度越高，其蛋白表達越低，內(nèi)異癥臨床分期越晚。