E-cad啟動子區甲基化與其在子宮內膜異位癥的表達的相關性分析

葉麗珍

研究背景：子宮內膜異位癥簡稱內異癥，作為一種具有侵襲性的婦科良性疾病，它表現的子宮內膜組織的遠處種植與生長，與惡性腫瘤的侵襲及轉移性極其相似。目前其發病機制尚未清楚。最近研究表明，作為重要的粘附因子之一的E-cad表達的下降或喪失與惡性腫瘤的低分化、高侵襲、淋巴及遠處轉移呈正相關。以E-cad基因啟動子區的DNA甲基化為代表的表觀遺傳改變可能是某些腫瘤中表達減少或喪失的主要原因。學者們推測，在具有與惡性腫瘤相似生物學行為的內異癥發生、發展中，細胞粘附分子E-cad表達的下降或喪失可能起同樣重要作用，E-cad基因啟動子甲基化與內異癥相關，可能是內異癥發病中的異位內膜種植的始發機制之一。

關鍵詞：鈣粘蛋白;啟動子甲基化;子宮內膜異位癥

研究目的：本研究通過檢測子宮內異癥的異位內膜及對照組在位內膜組織的E-cad啟動子區甲基化狀況與其蛋白表達關系，探索內異癥可能的發病機制，以及在發生、發展中的作用，為子宮內膜異位癥的治療找到新的突破點，并為進一步可能的臨床治療建立理論基礎。

研究方法：

1.樣本資料：采用隨機對照法，收集廣州醫科大學附屬第二醫院婦科2013年1月至2015年1月手術治療的并經病理證實的標本共65例，其中異位內膜組織（巧克力囊腫囊腫）45例為研究組，對照組為20例同期因診刮、子宮切除而取到的正常子宮內膜組織。

2方法：通過免疫組化、Western Blotting檢測E-cad異位與在位內膜表達情況;并采用甲基化特異性PCR檢測異位與在位內膜E-cad啟動子甲基化狀況。

3.統計學分析：采用SPSS17.0統計軟件進行統計學分析。用X²和Spearmans等級相關性分析比較異位內膜與正常子宮內膜E-cad蛋白表達及甲基化情況。P<0.05有統計學意義。

對比結果：

1.內異癥組E-cad蛋白陽性率為40%，對照組中E-cad蛋白陽性率為100%。X²=20.526，P=0.000，P<0.05，有統計學意義。

2.內異癥組13例Ⅰ-Ⅱ期樣本中，E-cad蛋白陽性率為61%，17例Ⅲ期樣本中，E-cad蛋白陽性率為41%，15例Ⅳ期樣本中，E-cad陽性表達率降低為2%，內異癥組E-cad蛋白陽性率在不同的臨床分期呈直線相關，X²=5.023，P=0.081，P>0.05，無統計學意義。

3.45例內異癥組中甲基化例數為26例，甲基化率為58%;20例對照組中甲基化例數為0，甲基化率為0%。X²=19.259，P=0.000，P<0.05。有統計學意義。

4內異癥組Ⅰ-Ⅱ期E-cad啟動子甲基化率為23%，Ⅲ期甲基化率為59%，Ⅳ期甲基化率為86%。X²=9.702，P=0.008，P<0.05，有統計學意義。

5.Spearmans等級相關分析顯示在內異癥不同臨床分期中E-cad啟動子甲基化與蛋白表達之間相關系數，分別是Ⅰ-Ⅱ期r=-0.850，Ⅲ期r=-0.842，Ⅳ期r=--0.961，P=0.000，P<0.05，有統計學意義。

（一）內異癥組異位內膜和對照組在位內膜組織中E-cad蛋白表達情況分析

把收取的45例內異癥異位內膜和20例對照組正常子宮內膜樣本為對照分別石蠟包埋切片，以E-cad為一抗，進行免疫組化試驗，得到每個樣本的免疫組化的組織切片，按照上面試驗方法介紹的E-cad蛋白表達陽性與陰性判定方法，判定E-cad蛋白是否表達。按照要求讀片，根據文獻報道正常的子宮內膜腺上皮有E-cad表達，而內異癥中E-cad蛋白有低表達或者不表達。實驗結果見表1內異癥組、對照組E-cad蛋白陽性率表達比較。（n，%）

E-cadherin基因啟動子CpG島的異常甲基化可能是導致蛋白表達下調的原因之一。諸多惡性腫瘤中，E-cad基因啟動子區域呈現高度甲基化引致的E-cad表達喪失是腫瘤侵襲性的可能機制，那么，在具有與惡性腫瘤相似遠處種植行為的內異癥發病中，E-cad啟動子甲基化也可能是引起該基因表達下降或喪失的關鍵原因。

結論

E-cad在子宮內膜異位癥中呈低表達，E-Cad啟動子5端CpG島甲基化可能是內異癥中該基因失活的機制之一。E-cad啟動子區域5CpG島在內異癥中呈高甲基化狀態，而在正常內膜組織則為非甲基化狀態，E-cad基因啟動子異常甲基化可能與為內異癥有密切相關性，可能參與內異癥的發生、發展。E-cad基因啟動子區域5CpG島在Ⅲ、Ⅳ期內異癥者中的甲基化率顯著高于Ⅰ、Ⅱ期，而E-cad蛋白表達率則相反。E-cad啟動子甲基化程度越高，其蛋白表達越低，內異癥臨床分期越晚。