黨靈杞糖漿的提取工藝及質量標準探討

梁 文,楊敏飛,黃 鑫

西安市第五醫院制劑科(西安 710002)

黨靈杞糖漿原為湯劑，具有補中益氣、清肝明目、安神等功效，可用于各類眼底疾病的臨床治療，尤其對缺血型視網膜靜脈阻塞等相關疾病治療具有獨特功效。但因靈芝草、枸杞子均為相對貴重的中藥，且煎煮過程相對不便，尤其是對生活在節奏快、居住環境擁堵的城市上班人群來說，更會浪費時間，不利于其推廣使用[1]；同時，因不同人煎煮藥劑習慣或條件不同，可能會對藥效造成影響，進而影響服用效果[2]。因此，為更方便患者服用，更好的發揮藥效，本科室欲將其制備成糖漿制劑?，F將黨靈杞糖漿提取工藝及質量控制標準介紹如下。

材料與方法

1 儀 器 高效液相色譜儀型號：Waters600，配置Waters2996二極管陣列檢測器、色譜工作站為Empower型(均由美國Waters公司生產)，色譜柱選擇美國安捷倫公司提供的SB-Aq系列(5m，4.6 mm×250 mm)，KQ5200DE型數控超聲波清洗儀(昆山超聲儀器公司)，純水系統為Aquelix5型(美國)，JA系列電子分析天平(上海恒平科學儀器有限公司)。

2 藥品試劑 丹參產自于重慶市巫山縣廟宇鎮；靈芝草子實體(四川省農業科學院微生物研究開發中心提供)；枸杞產于甘肅白銀景泰；丙酮、低沸點石油醚、乙腈、乙醇均為分析純；黨參炔苷對照品批號111732-201607，純度≥98%(中國食品藥品檢定研究)。

3 黨靈杞糖漿制備工藝研究

3.1 黨靈杞有效成分提取工藝研究：黨靈杞糖漿是黨參、靈芝草及枸杞子3味中藥精制而成的中成藥，其中主要活性成分主要有黨參炔苷、靈芝三萜、類胡蘿卜素等有機物質，又有黨參多糖、靈芝多糖、枸杞多糖等水溶性成分。因此本研究先對以配方藥物為原材料提取上述有機活性物質，之后以上述提取殘渣為原料提取各類多糖。

3.1.1 黨參炔苷、靈芝三萜、類胡蘿卜素提取工藝考察：選擇黨參炔苷、類胡蘿卜素及靈芝三萜含量為考察指標，選取超聲時間(A)、超聲溫度(B)、料液比(C)為考察因素，每個因素3個水平，設計正交試驗，篩選最佳工藝，見表1。

表1 工藝因素水平設計表

按照處方分別稱取黨參20 g、靈芝草10 g、枸杞子10 g共9份(每份40 g)。按照表2所示，丙酮-石油醚=1∶2混合試劑為提取液，依次超聲提取2次，過濾，合并濾液，降壓濃縮，定容至100 ml，測定各項試驗樣品中黨參炔苷、類胡蘿卜素及靈芝三萜含量，按照40%、30%、30%的權重計算總評分。

表2 正交試驗結果

表3 黨參炔苷、靈芝三萜、類胡蘿卜素提取的方差分析

根據極差直觀分析顯示，影響黨靈杞糖漿中黨參炔苷、靈芝三萜、類胡蘿卜素提取的因素大小依次為A>B>C，最佳超聲組合為A2B2C2，見表2。方差分析顯示，A、B、C 3因素對提取結果的影響均具有統計學意義(P<0.05)，見表3。因此選擇A2B2C2，即最佳提取工藝為超聲時間40 min，超聲溫度43 ℃，料液比為1∶45。

3.1.2 多糖提取工藝考察：選擇多糖轉移率為考察指標，選取超聲溫度(A)、超聲時間(B)、料液比(C)為考察因素，每個因素3個水平，設計正交試驗，篩選最佳工藝，見表4。

表4 工藝因素水平設計表

稱取黨參炔苷、靈芝三萜、類胡蘿卜素提取殘渣20 g作為提取材料，以蒸餾水作為提取液。按照表4設計試驗，依次超聲提取2次，過濾，合并濾液，降壓濃縮，醇沉、除蛋白、離心分離純化，干燥后的多糖。測定各項試驗樣品中多糖含量。

極差直觀分析顯示，影響黨靈杞糖漿中主要機成分提取的因素大小依次為A>B>C，最佳組合為A3B3C1，見表5。方差分析顯示，A、B、C 3因素對提取結果的影響均具有統計學意義(P<0.01)，見表6。因此選擇A3B3C1，即最佳提取工藝為超聲溫度90 ℃，超聲時間55 min，料液比為1∶22。

表5 正交試驗結果

表6 多糖提取的方差分析

3.2 黨靈杞糖漿制備： 依據上述正交試驗所確定的黨靈杞配方中黨參炔苷、靈芝三萜、類胡蘿卜素及多糖提取工藝參數確定黨靈杞糖漿制備工藝如下：依據處方精確稱取黨參、靈芝草和枸杞子加入45倍的丙酮-石油醚混合提取液，43 ℃下超聲提取40 min，提取兩次，合并提取液，降壓濃縮、純化后得到干燥的有機活性物質冷藏待用；藥渣加入加入22倍蒸餾水，90 ℃下超聲提取55 min，提取2次，合并濾液，降壓濃縮、純化至適量。提取的有機活性物質與多糖混合，加入200 g蔗糖、1 g山梨酸鉀，蒸餾水定容至500 ml，攪拌溶解，煮沸20 min后裝罐即可。

4 質量控制

4.1 性狀:本制品為棕紅色黏稠液體，味甜。

4.2 黨參炔苷含量測定

4.2.2 對照品溶液制備： 分析天平精確稱取適量黨參炔苷標準品作為對照品，分別加入乙醇溶解，制備成濃度為6.20 mg/ml的對照品溶液備用[3]。

4.2.3 供試品溶液制備：按照處方分別精確稱取黨參20.00 g、靈芝草10.00 g、枸杞子10.00 g(共40.00 g)共9份，按照L9(33)正交試驗設計進行超聲處理、純化，合并濾液后降壓濃縮，加乙醇分別定容至100 ml，靜置后過濾，收集濾液為供試液。

4.2.4 線性范圍確定：依次精確吸取對照品溶液2、4、6、8、10、12、15l進樣測定，記錄峰面積。以進樣量(X)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標進行回歸處理。結果所得線性回歸方程Y=4.22×106X-1.49×105(R2=0.9993)。表明，黨參炔苷在0.15～1.12g范圍內具有相對良好的線性關系。

4.2.6 穩定性確定： 精確量取供試樣品(正交試驗表2中5號試驗)溶液，避光條件下分別于4、6、8、10、12、24 h時進樣進行色譜測量，記錄供試品溶液中黨參炔苷峰面積RSD。黨參炔苷峰RSD為2.41%。表明，供試樣品在24 h內穩定性良好。

4.2.7 加樣回收率驗證： 精確量取已知含量的正交試驗供試品溶液6分(正交試驗表2中5號試驗)，每份2 ml，分別精確加入2.5 ml對照品溶液，并定容至10 ml，按照色譜條件測定，記錄黨參炔苷峰面積，計算其回收率RSD。結果，黨參炔苷加樣回收率為99.6%，RSD為2.60%。表明，該測定條件準確可靠，可用于黨參中黨參炔苷含量測定。

4.3 黨靈杞糖漿驗證試驗：為確定最佳工藝的優劣性和穩定性，制備黨靈杞糖漿3批，通過測定糖漿中黨參炔苷含量驗證提取工藝，結果見表7。

表7 黨靈杞糖漿中黨參炔苷含量測定結果

討 論

糖漿即含有主要藥物成分的蔗糖水溶液，口服專用類制劑，其中蔗糖含量≥45%(g/ml)。通常情況下，糖漿因為澄清的，且在存儲期間不能出現異臭、酸敗或其它變質現象[4]。而含有中藥材提取物的糖漿制劑則允許存在少量沉淀，但該沉淀可在輕微晃動后散開[5]；此外制備所添加的其它物質不能對產品穩定性產生影響，不能違反《藥品衛生標準》中相關規定。

黨靈杞糖漿為純中藥制劑，方劑中黨參參氣濃烈、味香醇厚，是補益氣血、清肺和胃、生津化痰之良藥?，F代藥理研究表明，黨參多糖具有調節機體免疫力、促進智力和造血功能的藥理功效[6-7]；黨參炔苷則具有保護胃黏膜損傷的作用。而黨參炔苷為有機活性物質，其提取多采用有機溶劑[8]。靈芝草為我國的高等藥用真菌，具有鎮靜安神、養肺保肝、強心降脂、抗氧化、抗腫瘤等多種功效，其中靈芝多糖及三萜類化合物被認為是靈芝草中的主要藥理成分[9]。枸杞子是寧夏枸杞果實，其藥用功效主要為補益肝腎、明目潤肺[10]。其中主要藥理成分為類胡蘿卜素和枸杞多糖，其中類胡蘿卜素具有抗氧化、抗腫瘤等作用，其中的β-胡蘿卜素有維生素A活性，玉米黃素可清除氧自由基、保護視力的作用[10]；枸杞多糖則除具有黨參一樣的功效外，還具有降血脂的功效，預防脂肪肝。諸藥合用，可更好的發揮補中益氣、清肝明目、安神等功效[11]。

筆者通過查閱文獻發現，上述藥物中主要藥理成分黨參炔苷、靈芝三萜和枸杞中的類胡蘿卜素等成分更易溶于有機溶劑，而多糖屬于水溶性物質。且多項研究顯示，超聲提取在各味中藥主要藥理活性物質提取中具有更好的效果[12-14]。因此，筆者選擇超聲波熱回流技術提取三味中藥中的主要藥理活性物質。首先，選擇丙酮與石油醚的混合液為提取液對配方中易溶于有機溶劑的活性物質進行提取，分離、純化處理；之后，在其殘渣中加入蒸餾水提取多糖成分。將上述兩次分離純化后的提取物混合后制備糖漿。為最大限度提高3味中藥中主要活性成分的轉移率，筆者以黨參炔苷、靈芝三萜、類胡蘿卜素及多糖為指標，以影響各指標轉移率的超聲提取時間、溫度及料液比為因素設計L9(33)正交試驗，以篩選糖漿制備的最佳工藝。結果顯示，黨參炔苷、靈芝三萜和枸杞中的類胡蘿卜素等易溶于有機溶劑的成分最佳提取工藝為超聲時間40 min，超聲溫度43℃，料液比為1∶45；多糖的最佳提取工藝為超聲溫度90℃，超聲時間55 min，料液比為1∶22。pH是影響微生物滋生的重要因素，其中pH 4～6最適宜真菌生長，6～8適合細菌生長[15]。本研究制備的初液pH約為6，因此需加入一定量的防腐劑。最終測得黨參炔苷的線性范圍為0.15～1.12g，樣品平均加樣回收率為99.6%，RSD 2.60%。

綜上所述，采用超聲熱回流技術分批提取黨靈杞配方中主要藥理活性成分制備糖漿。工藝穩定，質量可控，活性成分測定方法結果可靠，重現性好。