白羽王鴿卵清蛋白關聯蛋白Y基因(OVALY)克隆與生物信息學分析

徐小欽，杜 雪，李國勤，4，張 龍，陶爭榮，盧立志，4，*

(1.浙江省農業科學院 畜牧獸醫研究所，浙江 杭州310021； 2.西華師范大學 生態研究院，四川 南充637000； 3.南京農業大學 動物科技學院，江蘇 南京 210095； 4.農業農村部農產品信息溯源重點實驗室，浙江 杭州 310021)

OVALY(ovalbumin-related protein Y)是蛋清中一種常見蛋白，在雞蛋清中含量很少[1-2]，但在鴿蛋清中卻是最主要的蛋白[3]。Guérin-Dubiard等[4]于2005年采用高通量基因組測序的方式，獲得了雞的OVALY基因堿基序列，同時發現該基因存在兩種基因亞型。2006年Guérin-Dubiard等[5]運用雙向凝膠電泳技術分離鑒定了雞OVALY蛋白，其分子量大小為53 ku。通過軟件預測該蛋白分子量為55 ku，包含21個磷酸化位點和4個N-鏈接的糖基化位點，造成此種差異的原因尚未知曉。雖然該蛋白在蛋清中含量少，但有研究表明在雞受精卵孵化第7天的卵清中含量迅速增加，因此推測其可能參與了雞胚胎發育調控，具體機制尚不明了[6]。2017年Ren等[3]對鴿蛋清蛋白進行分離，利用MALDI-TOF-MS技術進行鑒定，發現OVALY蛋白為鴿蛋清中最主要的蛋白。但關于鴿子OVALY基因及其對應的蛋白的報道鮮有所聞。巖鴿OVALY基因預測序列于2015年已經發布，但其確切序列尚未獲得。

為了研究鴿蛋清中最主要蛋白OVALY的編碼基因，本試驗運用RACE技術獲得白羽王鴿OVALY基因全部的cDNA序列，并利用生物信息學數據庫和相關軟件進行分析，預測其功能結構。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

白羽王鴿輸卵管膨大部組織樣本采集自平陽縣鰲峰鴿業有限公司，保存于液氮中。

1.2 試驗方法

1.2.1 輸卵管膨大部中總RNA提取

將適量樣本置于盛有液氮的研缽中，迅速研磨直至粉末狀，加入Trizol試劑，按照使用說明書進行實驗操作，提取輸卵管膨大部總RNA。……