實時定量PCR法快速檢測水產品中的副溶血性弧菌

陳 琳，周青青，顧 青，*，酈 萍

(1.浙江工商大學 浙江省食品微生物技術研究重點實驗室，浙江 杭州 310018； 2.杭州娃哈哈集團有限公司，浙江 杭州 310018)

副溶血性弧菌又稱腸炎弧菌，是一種廣泛分布在海洋和水產品中的嗜鹽性革蘭氏陰性菌，在腌肉、咸菜等高鹽制品中也可檢出[1]。若含有該菌的水產品未煮熟或處理不當，食用后極容易引起食物中毒[2]。因此，快速高效地檢測水產品中的副溶血性弧菌[3]，對于及時診斷和降低此類風險至關重要。

目前，食品中副溶血性弧菌的檢測方法主要可分為2類：一類是微生物平板計數方法；另一類是常規的PCR檢測[4]。平板計數方法操作復雜，耗時；常規的PCR檢測方法需要從反應體系中吸取產物做電泳，轉移過程中易污染，從而造成假陽性，而且耗費時間[5]。隨機擴增多態性分析(RAPD)是建立在PCR基礎之上的一種可對整個未知序列的基因組進行多態性分析的分子技術，具有退火溫度低、核苷酸引物與模板的結合穩定、擴大引物配對的隨機性、檢出率高、簡單易操作、省時省力的特點[6]。實時定量PCR技術利用熒光信號實時監測PCR進程，直接進行定量分析[7]，快速，準確，高效。

浙江省地處我國東南沿海長江三角洲南翼，水產品資源豐富。近年來，由副溶血性弧菌引起的食物中毒是該省報告發病最多的食物中毒病種。相關報告顯示，浙江省細菌性食物中毒案例中， 43.06%為由副溶血性弧菌引起的食物中毒[8]。本文從20株副溶血性弧菌的基因中找出特異性高的序列，設計引物，建立一種基于熒光定量PCR快速檢測副溶血性弧菌的方法，并通過對部分市售水產品中的副溶血性弧菌污染進行檢測，測試該方法的可行性。……