類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白的變化及其意義

郭冬芳，黨 箏，劉 喆，孟慶防

(駐馬店市中心醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科；2.風(fēng)濕免疫科，河南 駐馬店463000)

摘要：目的探討類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者血清免疫球蛋白、14-3-3η蛋白的變化及其意義。方法選取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者110例(RA組)和年齡、性別相匹配的健康對(duì)象40例(對(duì)照組)，檢測(cè)兩組的血清IgA、IgG、IgM、補(bǔ)體C3、C4、14-3-3η蛋白水平，并根據(jù)RA患者是否處于疾病活動(dòng)期和放射學(xué)分級(jí)進(jìn)行分層分析。結(jié)果RA組的血清IgG、14-3-3η蛋白水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，血清IgA、IgM、補(bǔ)體C3、C4蛋白水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；活動(dòng)期RA患者血清IgG、14-3-3η蛋白水平顯著高于非活動(dòng)期的RA患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、補(bǔ)體C3、C4水平與非活動(dòng)期的RA患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；放射學(xué)分級(jí)3級(jí)、4級(jí)RA患者血清IgG、補(bǔ)體C3、14-3-3η蛋白水平顯著高于非活動(dòng)期組的2級(jí)患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、補(bǔ)體C4水平與放射學(xué)分級(jí)2級(jí)RA患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論RA患者血清IgG、補(bǔ)體C3 14-3-3η蛋白水平較高，血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平變化與RA患者病情、活動(dòng)情況具有一定的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；免疫球蛋白；14-3-3η蛋白

中圖分類(lèi)號(hào)：R593.22文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Relationshipbetweenserum14-3-3ETAandimmunoglobulinlevelandthedevelopmentofRApatients

GUODong-fang1，DANGZheng1，LIUZhe2，etal.

(1.DepartmentofClinicalLaboratory;2.DepartmentofRheumatologyandImmunology,ZhumadianCentralHospital,Zhumadian463000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the changes and significance of serum immunoglobulin and 14-3-3 ETA protein in patients with rheumatoid arthritis (RA).MethodsIn our hospital (2015.02-2017.12),110 cases of RA patients (group RA),age and sex matched healthy subjects (control group)were selected to detect the levels of serum IgA,IgG,IgM,complement C3,C4,14-3-3 ETA protein in the two groups,and stratified analysis according to whether the patients were in the period of disease activity and the radiological classification.ResultsSerum IgG and 14-3-3 ETA protein levels in group RA were significantly higher than those in the control group(P<0.05).There was no significant difference in serum IgA,IgM,complement C3 and C4 protein levels between the RA group and the control group(P>0.05),and the serum IgG and protein levels of the RA patients in the active group were significantly higher than those in the non active group.There was no significant difference in serum IgA,IgM,complement C3,and C4 levels between the patients with RA in the dynamic phase group and the RA patients in the inactive group (P>0.05);the serum IgG,complement C3,14-3-3 ETA protein levels of the radiological classification (grade 3,4)were significantly higher than those of the group 2 in the inactive group (P<0.05),and the radiological classification (grade 3)There was no significant difference in serum IgA,IgM and complement C4 levels between patients with RA and those of grade 2 RA (P>0.05)in patients with RA.ConclusionCombined detection of serum IgG and complement C314-3-3 ETA protein level is helpful for clinicians to make judgments on the condition and activity of RA patients,so as to guide treatment.

Keywords:Rheumatoid arthritis;immunoglobulin;14-3-3 ETA protein

(ChinJLabDiagn,2019,23:0784)

近年來(lái)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)發(fā)生率明顯上升，流行病學(xué)研究證實(shí)，RA的發(fā)病率可達(dá)373-583/萬(wàn)人左右[1]。臨床上RA的發(fā)生能夠?qū)е禄颊哧P(guān)節(jié)功能損傷風(fēng)險(xiǎn)的上升，并能夠增加患者遠(yuǎn)期的致殘率[2]。血清免疫球蛋白的紊亂能夠通過(guò)對(duì)免疫因子的吞噬作用，促進(jìn)滑膜組織上皮細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致局部關(guān)節(jié)腔內(nèi)環(huán)境的異常[3,4]；14-3-3η蛋白是重要的酸性蛋白成分，能夠參與到多種生物學(xué)活性的調(diào)控過(guò)程中。14-3-3η蛋白的高表達(dá)能夠激活下游腫瘤壞死因子α，促進(jìn)炎癥性信號(hào)通路的激活，參與到關(guān)節(jié)的炎癥性損傷過(guò)程[5]。為了揭示14-3-3η蛋白或者免疫球蛋白與RA病情的關(guān)系，從而為臨床上RA患者的病情評(píng)估提供參考，本研究選取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者為研究對(duì)象，探討14-3-3η蛋白或者免疫球蛋白的表達(dá)及其與患者病情的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2015年2月—2017年12月收治的RA患者110例為RA組，其中男26例，女84例，年齡42-77歲，平均(61.5±13.0歲)；RA活動(dòng)期患者64例，非活動(dòng)期患者46例。選取同期年齡、性別相匹配的健康者40例為對(duì)照組，其中男8例，女32例，年齡40-76歲，平均(63.0±12.4)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)RA患者的診斷及分期參考1987年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ARA)修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)患者具有典型的關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、畸形等癥狀，經(jīng)X線檢查、血清學(xué)檢查確診；(3)對(duì)照組來(lái)源于我院體檢健康的自愿者；(4)本研究獲得研究對(duì)象的知情同意和醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有凝血功能疾病、血液系統(tǒng)疾病；(2)伴有惡性腫瘤；(3)結(jié)核；(4)急性心肌梗死；(5)免疫功能缺陷；(6)長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑。兩組研究對(duì)象年齡、性別比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 指標(biāo)檢測(cè)方法

采集患者入院后靜脈血，離心后收集上清液，采用免疫發(fā)光法檢測(cè)IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體C3、C4水平，檢測(cè)儀器為美國(guó)Bio-Bad全自動(dòng)酶標(biāo)儀，配套試劑盒購(gòu)自羅氏檢測(cè)公司。

將采集患者的靜脈血3 ml,加入14-3-3η蛋白單抗，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的14-3-3η蛋白會(huì)與單抗結(jié)合,PBS液體洗滌5 min。按照1∶500的比例加入羊標(biāo)志的一抗5 ml，4℃放置過(guò)夜，PBS緩沖液洗滌3次，每次5 min，加入鼠來(lái)源的二抗(1∶1 000)2 ml，室溫放置2 h，PBS液體洗滌5 min。加入顯色底物,辣根過(guò)氧化物酶會(huì)使無(wú)色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色,加終止液變黃。在450 nm處測(cè)OD值。

1.3 放射學(xué)分級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

RA患者的放射學(xué)分級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)采用Steinbrocker標(biāo)準(zhǔn)。1級(jí)：正常或可能存在骨質(zhì)疏松；2級(jí)：骨質(zhì)疏松伴軟骨下骨質(zhì)破壞和輕度的關(guān)節(jié)間隙狹窄；3級(jí)：可見(jiàn)明顯的關(guān)節(jié)面下骨質(zhì)破壞、關(guān)節(jié)變形、關(guān)節(jié)間隙狹窄或消失，但未出現(xiàn)纖維性或骨性強(qiáng)直；4級(jí)：除伴有2級(jí)和3級(jí)的表現(xiàn)外，伴有纖維性或骨性強(qiáng)直。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

RA組的血清IgG、14-3-3η蛋白水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，血清IgA、IgM、補(bǔ)體C3、C4蛋白水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組研究對(duì)象的血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

2.2 不同分期的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

活動(dòng)期RA患者的血清IgG、14-3-3η蛋白水平顯著高于非活動(dòng)期的RA患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、補(bǔ)體C3、C4水平與非活動(dòng)期組RA患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同分期RA患者的血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

2.3 不同放射學(xué)分級(jí)的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

放射學(xué)分級(jí)3級(jí)、4級(jí)RA患者的血清IgG、補(bǔ)體C3、14-3-3η蛋白水平顯著高于非活動(dòng)期組的2級(jí)患者(P<0.05)，血清IgA、IgM、補(bǔ)體C4水平與2級(jí)的RA患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表3 不同放射學(xué)分級(jí)的RA患者血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平比較

3 討論

多種病理性因素均能夠?qū)е玛P(guān)節(jié)滑膜組織損傷，特別是在有相關(guān)家族易感基因攜帶的基礎(chǔ)上，RA的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)具有進(jìn)一步上升趨勢(shì)。炎癥性損傷、自身免疫性功能紊亂等均能夠?qū)е禄せ准?xì)胞的凋亡，加劇軟骨組織的破壞，進(jìn)而增加了RA不良臨床預(yù)后的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7,8]。現(xiàn)階段臨床上主要通過(guò)免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素等治療RA，但一項(xiàng)囊括了627例樣本量的RA治療的臨床結(jié)局分析發(fā)現(xiàn)，RA治療后的病情緩解率不足36%，治療后的遠(yuǎn)期關(guān)節(jié)脫位、關(guān)節(jié)壞死、骨折或者關(guān)節(jié)畸形等的發(fā)生率仍然較高[9]。而本次對(duì)于RA患者血清中免疫球蛋白或者14-3-3η蛋白水平的分析研究，不僅能夠?yàn)樯钊虢沂綬A的發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)，同時(shí)還能為RA的免疫靶向治療提供新的治療靶點(diǎn)。

14-3-3η蛋白是糖蛋白家族的重要成員，能夠通過(guò)羧基結(jié)構(gòu)的磷酸化修飾或者甲基化修飾作用，影響生物體的炎癥反應(yīng)、自身免疫應(yīng)答或者組織細(xì)胞的退行性病變過(guò)程。14-3-3η蛋白的表達(dá)能夠通過(guò)結(jié)合細(xì)胞膜上的多種糖蛋白配體，導(dǎo)致上皮細(xì)胞膜內(nèi)的信號(hào)通路的激活，影響上皮細(xì)胞的凋亡和氧化應(yīng)激損傷過(guò)程。基礎(chǔ)方面的研究還認(rèn)為，14-3-3η蛋白的表達(dá)能夠通過(guò)激活三磷酸腺苷或者鈣離子的表達(dá)，進(jìn)而提高M(jìn)APK下游效應(yīng)因子的上調(diào)程度，導(dǎo)致組織炎癥性損傷及淋巴細(xì)胞毒性作用的加強(qiáng)[10,11]。有部分研究者探討14-3-3η蛋白的表達(dá)與RA的關(guān)系認(rèn)為，14-3-3η蛋白的表達(dá)上升能夠顯著促進(jìn)RA患者的病情進(jìn)展，導(dǎo)致患者免疫抑制劑治療敏感性的下降[12]，但缺乏對(duì)于14-3-3η蛋白的表達(dá)與RA患者的不同分期或者不同影像學(xué)評(píng)級(jí)間的關(guān)系研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，RA組的血清IgG、14-3-3η蛋白的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組，差異較為明顯，提示血清IgG、14-3-3η蛋白均可能影響RA的病情進(jìn)展過(guò)程。通過(guò)薈萃分析不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為血清IgG、14-3-3η蛋白的高表達(dá)主要通過(guò)下列幾個(gè)方面的途徑促進(jìn)RA的發(fā)生或者病情進(jìn)展[13,14]：(1)血清IgG的上升能夠通過(guò)激活巨噬細(xì)胞或者單核細(xì)胞，導(dǎo)致其對(duì)于滑膜組織上皮細(xì)胞吞噬作用的增強(qiáng)，促進(jìn)了滑膜組織的自身免疫性損傷程度，導(dǎo)致滑膜上皮細(xì)胞的凋亡明顯加速；(2)14-3-3η蛋白表達(dá)濃度的上升能夠促進(jìn)體內(nèi)炎癥信號(hào)通路AKT或者M(jìn)APK的激活，導(dǎo)致下游IL-6或者腫瘤壞死因子的上調(diào)，增加了炎癥性因子對(duì)于關(guān)節(jié)軟骨或者關(guān)節(jié)腔的浸潤(rùn)過(guò)程。曾婷婷等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在RA患者血清或者局部關(guān)節(jié)腔液體中，免疫球蛋白IgG的表達(dá)濃度明顯上升，特別是在病情進(jìn)展速度較快或者糖皮質(zhì)激素治療敏感性較低的RA患者中，血清IgG的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的下調(diào)。活動(dòng)期RA患者的病情進(jìn)展速度、臨床預(yù)后等均不佳。本次研究發(fā)現(xiàn)，處于活動(dòng)期的RA患者血清IgG、14-3-3η蛋白的表達(dá)均明顯的上調(diào)，提示二者的表達(dá)與RA患者的病情密切相關(guān)，這主要是由于血清IgG、14-3-3η蛋白的表達(dá)上升導(dǎo)致襯里細(xì)胞增生、間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理過(guò)程的進(jìn)展，并促進(jìn)了血管翳的形成及軟骨和骨組織的破壞等病理過(guò)程。但本次研究中并未發(fā)現(xiàn)IgA、IgM、補(bǔ)體C3、C4水平等在RA患者不同分期中的表達(dá)差異，提示相關(guān)指標(biāo)并不能評(píng)估患者的病情狀態(tài)。放射學(xué)分級(jí)通過(guò)關(guān)節(jié)面下骨質(zhì)破壞程度、關(guān)節(jié)有無(wú)變形、關(guān)節(jié)間隙等情況進(jìn)而評(píng)估RA患者病理性損害的程度，隨著放射學(xué)分級(jí)的上升，可以發(fā)現(xiàn)RA患者的血清IgG、補(bǔ)體C3、14-3-3η蛋白水平均顯著上升，提示IgG、補(bǔ)體C3、14-3-3η蛋白能夠顯著促進(jìn)RA患者關(guān)節(jié)解剖結(jié)構(gòu)的破壞，加劇關(guān)節(jié)的退行性和炎癥性病變程度。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了IgG、14-3-3η蛋白在不同放射學(xué)分級(jí)和RA分期中的差異性表達(dá)情況。綜上所述，RA患者血清IgG、補(bǔ)體C314-3-3η蛋白水平較高，血清14-3-3η蛋白、免疫球蛋白水平變化與RA患者病情、活動(dòng)情況具有一定的相關(guān)性。