中原地區家族性乳腺癌BRCA1和BRCA2基因突變的臨床意義

程 多 梁 芳 張青松 霍彥平 張 楠 郜 輝 杜 潔

乳腺癌是中國女性最常見的惡性腫瘤，居癌癥相關死因的第5 位，年齡標化發病率為30.69/10 萬[1]。目前乳腺癌的病因及影響預后因素尚不明確，有研究表明基因的激活、抑癌基因的失活、生長因子受體的激活在乳腺癌的發生、發展及轉歸中發揮重要作用，預后因素除性別、年齡、病理分型、分化級別及免疫分型等外，腫瘤家族史也是發生乳腺癌及影響預后的高危因素[2]。

有研究表明，乳腺癌的易感基因與家族性乳腺癌密切相關[3]。本研究就中原地區家族性乳腺癌BRCA1 和BRCA2 基因突變的臨床意義進行分析，以提高乳腺癌的治愈率，使更多的乳腺癌早期發現，早期治療，提高患者生存率。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年7月至2018年12月鄭州大學附屬鄭州中心醫院乳腺外科、腫瘤內科和放療科收治的214 例乳腺癌患者作為研究對象，其籍貫均為中原地區，民族為漢族，經乳腺病理活體組織檢查確診。符合以下條件之一，則以遺傳性乳腺癌標準[4]獨立家系入組：至少1 個一級或二級親屬患遺傳性乳腺癌、家族中有患者同時發生遺傳性乳腺癌/卵巢癌綜合征、發病年齡＜35 歲的早發性乳腺癌。214 例乳腺癌患者中98 例符合遺傳性乳腺癌標準，并納入獨立家系，其年齡26～75 歲，平均（43.2±1.9）歲；臨床分期：Ⅰ期34 例，Ⅱ期46 例，Ⅲ期18 例；病理類型：浸潤型導管癌82 例，浸潤型小葉癌12 例，髓樣癌3 例，黏液癌1 例。

1.2 方法

1.2.1 BRCA1/2 基因組DNA 提取 取患者晨起肘靜脈血5 ml，采用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，經低滲溶血法提取標本中白細胞，通過酚/氯仿法進行標本抽提，隨后經乙醇洗滌后沉淀，提取目標白細胞DNA，通過紫外分光法測定DNA 水平（所用試劑由湖州申科生物生物技術有限公司，批號：20170301），所有操作均嚴格按照說明書進行，通過1.5%瓊脂糖凝膠電泳進行提取后DNA 水平的鑒定。

1.2.2 DNA 體外擴增-聚合酶鏈反應（PCR）與基因位點分析 引物序列依據條件和要求進行設定。隨后進行基因位點分析，使用Primer 3 軟件實施引物設計，并對BRCA1 和BRCA2 基因所有編碼區、外顯子和內含子拼接區進行PCR 擴增，檢測相關基因位點，試劑由云南洛宇生物科技有限公司提供，PCR儀器由Thermo 賽默飛世爾公司提供，型號為Piko系列，試劑則使用Thermo 賽默飛世爾公司配套試劑進行。并通過質譜儀對BRCA 基因的多態性進行基因分型。

1.2.3 基因結果判斷 BRCA 基因蛋白其主要表達產物位于細胞漿和細胞核中，并以出現黃色或棕褐色染色者評定為陽性，同時依據陽性細胞出現的百分率及染色顏色深度后行半定量分析。其染色強度分為4 級，其中無色者評定為0 分，淡黃色者評定為1 分，棕黃色者評定為2 分，棕褐色者評定為3 分，所有結果均以高倍鏡視野，隨機留取500 個腫瘤細胞進行評定，無陽性表達或陽性表達細胞數在5%以內者為陰性，其余評定為陽性[4]。

1.3 觀察指標

統計遺傳性乳腺癌患者BRCA1/2 突變情況，比較胃癌或其他惡性腫瘤家族史對BRCA1/2 突變的分布及其臨床影響。

1.4 統計學分析

采用SPSS 20.0 統計軟件進行數據分析，計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 BRCA1/2 突變情況

98 例入組患者中，14 例僅存在卵巢癌家族史者，9 例同時存在乳腺癌與卵巢癌家族史，75 例存在乳腺癌家族史，存在乳腺癌及卵巢癌家族史者其BRCA1/2 突變檢出率高于僅存在卵巢癌家族史者和僅存在乳腺癌家族史者（均P＜0.05）。見表1。

表1 遺傳性乳腺癌患者BRCA1/2 突變情況[例(%)]

2.2 BRCA1/2 同時突變情況

僅存在乳腺癌患者中，BRCA1/2 同時突變為11 例，14.7%（11/75）；僅存在卵巢癌患者中，BRCA1/2 同時突變1 例，7.1%（1/14）；家族史中患乳腺癌與卵巢癌同時患病者，BRCA1/2 同時突變7 例，77.8%（7/9）。BRCA1/2 突變檢出率呈逐漸增高趨勢。

2.3 胃癌或其他惡性腫瘤家族史對BRCA1/2 突變的影響

98 例入組患者中，33 例合并乳腺癌/卵巢癌以外的其他惡性腫瘤家族史，6 例檢測BRCA1/2 突變，其中胃癌4 例，其他惡性腫瘤2 例。

2.4 胃癌或其他惡性腫瘤家族史對BRCA1/2 突變的影響

存在胃癌家族史患者BRCA1/BRCA2 突變檢出率與其他惡性腫瘤家族史患者比較差異無統計學意義（P＞0.05)。見表2。

表2 胃癌或其他惡性腫瘤家族史對BRCA1/2 突變 的影響[例(%)]

3 討論

BRCA1 和BRCA2 兩種基因的突變屬于常染色體顯性遺傳，但并不是所有的突變攜帶者都會發展成癌癥。美國資料顯示在3 億多美國人中，2.5 萬～5 萬人攜帶有該突變基因，亞裔中比例較低，在歐美人群中，BRCA1 基因突變攜帶者在70 歲時罹患乳腺癌和卵巢癌的概率分別為57%及40%，而BRCA2基因突變的攜帶者其發病概率分別是49%及18%[4]。而國內數據表明，中國人中BRCA1 和BRCA2 的基因突變頻率為9.45%，在家族性乳腺癌患者中占13.4%，在早發性乳腺癌中占7.5%[5]。

本研究結果表明，中原地區有家族史的乳腺癌患者比率較歐美人群明顯偏低，對比國內相關研究結果，家族性乳腺癌患者的BRCA1/2 基因突變較高發，這可能是中原地區家族性乳腺癌的發病特點。本研究中患者中位年齡45 歲，與70 歲患者基因突變率相比，BRCA1/BRCA2 基因突變的頻率較低，不排除年齡影響因素，考慮與中原地區患者乳腺癌的發現與診治較晚有關，建議進一步推廣對乳腺癌高危人群進行BRCA1/BRCA2 基因的檢測，從而達到乳腺癌的早發現，早診斷，早治療，延長患者生存期的目的。

另有研究表明，BRCA1 和BRCA2 的基因突變的檢出為乳腺癌和卵巢癌的腫瘤診治提供了強有力的證據[6]。本研究發現僅有乳腺癌家族史患者的BRCA1/BRCA2 基因突變的檢查率較僅有卵巢癌家族史患者偏高，因此表明BRCA1/BRCA2 基因突變的檢測對于乳腺癌患者的診斷有著緊密的聯系。研究還表明，家族中同時存在乳腺癌和卵巢癌的患者的基因突變的檢出率明顯高于僅有乳腺癌家族史患者。因此，對于具有乳腺癌及卵巢癌家族史的患者，加強其BRCA1/BRCA2 基因突變的篩查也已成為必要。

在一項針對409 例中國北方女性家族性乳腺癌患者的研究中，發現有胃癌家族史的乳腺癌患者的BRCA1/BRCA2 基因突變的檢出率比其他癌癥家族史的乳腺癌患者略高[7]。其中，新疆地區的具有胃癌家族史的乳腺癌患者的基因突變檢出率也偏高[8]。本研究中也發現，合并胃癌家族史的BRCA1 和BRCA2突變檢出率明顯高于其他惡性腫瘤家族史者。這可能也是中原區具有乳腺癌家族史患者的發病特點。

目前國內乳腺癌篩查和監測，尚缺乏大量全面的資料，尤其是對中原地區家族性和早發性乳腺癌的BRCA1 和BRCA2 基因突變分析的相關資料研究少，希望通過此項研究能夠對中原地區乳腺癌家族史患者的BRCA1 和BRCA2 的基因突變研究的資料起到填補作用。但本研究由于時間有限，樣本采集數量有限，可能導致結果具有一定局限性。