外周血T-SPOT.TB 檢測結核TAM受體水平在痰涂片陰性肺結核的診斷價值

劉德平 劉黎 陳慧冬 楊金邊 石應元 劉德軍

武漢市傳染病醫院1結核病科；3檢驗科（武漢430023）；武漢科技大學天佑醫院2感染科，4檢驗科（武漢430064）；5深圳市偉光醫院急診科（廣東深圳518000）

臨床中實現結核病的早期快速診斷是實現早治療的基礎，也是臨床中控制和預防結核病傳播的重要手段［1］。結核分枝桿菌培養及痰涂片是臨床中確診結核病的傳統方法，但常規痰涂片耗時較長在患者確診后多已錯過最佳治療時機［2］。而痰涂片陽性率較低，僅為10%至30%。此外，有研究結果顯示，痰涂片陰性肺結核患者接觸者感染概率約在10%～20%之間，因而臨床中及時且準確的對痰涂片陰性結核病患者進行確診，具有十分重要的意義［3］。現有的常規檢測手段無法有效實現快速篩檢要求，而近年來迅速發展的分子生物學技術為痰涂片陰性肺結核的診斷提供了諸多有效手段［4］。結核感染T 細胞斑點試驗（Dot blot test for tuberculosis infected T cells，T-SPOT.TB）是近年來飛速發展的醫學診斷技術，其可通過檢測受試者外周血中MTB 抗原刺激活化的T 細胞釋放的干擾素，是目前較為敏感的細胞學檢測技術之一［5］。TAM（Tyro3/Axl/Mer receptor tyrosine kinase）細胞缺失常導致出現自身免疫性疾病和慢性炎癥發生，而當TAM 信號異常時常伴隨出現諸多病理性改變［6］。但T-SPOT.TB 檢測結核TAM 受體水平在痰涂片陰性肺結核診斷中的應用仍鮮有報道。因而筆者選取我院收治的痰涂片陰性肺結核患者作為研究對象，分析在痰涂片陰性肺結核中外周血T-SPOT.TB 檢測結核TAM 受體水平的診斷價值。

1 資料方法

1.1 一般資料 經我院倫理委員會批準，選取2016年1月至2018年3月間我院收治300 例痰涂片陰性疑似肺結核患者作為本組研究對象，其中確診肺結核150 例患者作為觀察組，非肺結核150例患者作為對照組。觀察組中男89 例，女61 例，年齡（45.83±9.28）歲，對照組中男93 例，女57 例，年齡（47.19±10.02）歲，兩組患者一般臨床資料差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 入組排除標準

1.2.1 入組標準 （1）患者均經胸部X 線檢查；（2）患者伴隨出現咳嗽、咳痰癥狀大于2 周；（3）至少3 次痰涂片檢測陰性；（4）觀察組患者符合《痰涂片陰性活動性肺結核的診斷治療與管理》標準［7］；（5）對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 （1）惡性腫瘤患者；（2）痰涂片檢查陽性；（3）經病理檢查無法確診；（4）主動申請退出本研究。

1.3 方法 采集所有受試者空腹靜脈血5 mL，取2 mL 離心收集血清，采用酶聯免疫吸附法檢測血清中TAM 水平，所用試劑盒均購買自聯科生物科技有限公司，所有操作均嚴格遵照試劑盒說明書進行操作，若TAM ≤60 pg/mL 則判定為TAM 陽性。取3 mL 血樣，使用Oxford Immunotec 公司試劑盒檢測外周血T-SPOT.TB 水平，若符合如下任一標準則判定T-SPOT.TB 陽性：（1）若對照無反應性孔點數≥6，抗原A 或抗原B 有反應性樣本斑點數≥無反應性孔點數×2；（2）對照無反應性孔點數在0～5 之間，抗原A 或抗原B 有反應性樣本數-對照無反應性孔點數≥6。在行聯合診斷時，若所有指標均為陽性則判定為系列聯合診斷陽性，若任一指標為陽性則判定平行聯合診斷陽性。

1.4 統計學方法 本組研究中使用SPSS 19.0 行統計學分析，采用均值±標準差表示計量資料，采用百分率表示計數資料，行t及χ2檢驗分析組間數據差異，以《痰涂片陰性活動性肺結核的診斷治療與管理》標準作為金標準，分析各指標的診斷價值，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血中TAM 受體水平檢測結果 本組研究結果顯示，觀察組患者血中TAM 受體水平高于對照組，且差異存統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 患者血中TAM 受體水平檢測結果Tab.1 Serum TAM receptor levels in patients x±s

2.2 外周血T-SPOT.TB 水平檢測結果 本組研究結果顯示，觀察組患者A 孔斑點數及B 孔斑點數均明顯高于對照組，且差異存統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 外周血T-SPOT.TB 水平檢測結果Tab.2 Test results of T-SPOT.TB level in peripheral blood x±s

2.3 各指標檢測結果 本組研究結果顯示，TAM受體診斷陽性數為153 例，T-SPOT.TB 診斷陽性數為166 例，平行聯合診斷的陽性為197 例，系列聯合診斷的陽性為116 例，見表3。

表3 各指標檢測結果Tab.3 Test results of various indicators例

2.4 各指標診斷價值分析結果 本組研究結果顯示，平行聯合診斷的敏感度為98.67%，系列聯合診斷的特異度為98.67%，平行聯合及系列聯合診斷的AUC 為0.984 和0.974，且聯合診斷曲線下面積（AUC，Area Under Curve）均顯著高于TAM 受體和T-SPOT.TB 單獨診斷，且差異存統計學意義（P＜0.05），見表4、圖1。

表4 各指標診斷價值分析結果Tab.4 Diagnostic Value Analysis of Indicators%

圖1 各種診斷ROC 曲線Fig.1 Various diagnostic ROC curves

3 討論

痰涂片陰性肺結核的快速診斷是臨床中較為棘手的亟待解決的問題，有助于患者獲取及時有效治療，具有較高的臨床應用價值［8］。有研究指出，急慢性炎癥反應與免疫細胞大量凋亡和結構細胞聚集密切相關，此時需要大量吞噬細胞發揮其胞葬作用進而起到促進炎癥消退。有效清除凋亡細胞可有效促進機體恢復穩態［9］。在炎癥消退過程中，存在可有效識別凋亡細胞的一類受體，可防止炎癥反應誘發的繼發感染。有研究［10］指出，TAM 配體Gas6 作為橋接分子可有效連接細胞表面TAM，促進細胞吞噬，因此在清除凋亡細胞中起到十分重要作用。有學者指出，血中TAM 水平與系統性紅斑狼瘡處于活動期與否密切相關，相較于健康者及非活動期系統性紅斑狼瘡患者，活動期系統性紅斑狼瘡患者血中TAM 水平顯著升高，認為TAM 可作為臨床中評估系統性紅斑狼瘡的生物學標志物之一［11］。一般情況下，TAM 在免疫監視及防御過程中起到十分重要的作用，且免疫系統異常在結核病的發生及發展過程中均起到十分重要的作用［12］。

近年來，隨著免疫學技術的發展，T-SPOT.TB是近年來發展的新型診斷結核感染的方法，日益受到廣大臨床醫師的重視。有大量研究結果顯示，采用T-SPOT.TB 在對結核進行診斷時均具有較高的特異性和敏感性，且其檢測結果并不受卡介苗接種與否的影響［13］。有學者指出，T-SPOT.TB 在對結核病進行診斷時具有較高的診斷價值，采用小樣本研究結果顯示，外周血及胸水中T-SPOT.TB水平進行檢測具有較高的特異性和敏感性［14］。國外有研究結果顯示，外周血中T-SPOT.TB 水平可作為診斷和評估結核病的重要指標［15］。

本組研究結果顯示，觀察組患者血中TAM 水平顯著高于對照組，且觀察組外周血T-SPOT.TB 水平顯著高于對照組。對患者血中TAM 水平及TSPOT.TB 水平檢測在結核并中的診斷價值分析結果顯示，采用血中TAM 水平及T-SPOT.TB 水平聯合診斷可顯著提高單純采用血中TAM 水平或TSPOT.TB 水平的診斷價值，采用平行聯合診斷時可有效提高診斷的敏感度，采用系列聯合診斷時可顯著提高診斷特異度。分析認為，在結核病的發生及發展過程中包括TAM 在內的TAM 受體異常起到是十分重要的作用，且T-SPOT.TB 水平檢測可有效對結核病進行診斷。

綜上所述，通過檢測外周血T-SPOT.TB 檢測結核TAM 受體水平可有效提高臨床中痰涂片陰性結核病的診斷價值，在臨床中具有較高的應用價值。但本組研究臨床樣本數較少，有待后續擴大臨床樣本數深入研究。