玫瑰痤瘡與腸道菌群紊亂的相關性研究

梁博 李國東 何明璇

[摘要]目的：探討玫瑰痤瘡與腸道菌群的相關性。方法：選取2015年1月-2017年12月筆者醫院皮膚科門診確診的玫瑰痤瘡志愿者80例為實驗組，并選取同期健康志愿者60例為對照組。采用熒光定量PCR檢測腸道菌群中雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌、擬桿菌、梭桿菌和乳酸桿菌的拷貝數，分析兩組腸道菌群拷貝數的差異，以及腸道菌群與玫瑰痤瘡的相關性。結果：玫瑰痤瘡志愿者腸道菌群中乳酸桿菌、梭桿菌、雙歧桿菌的拷貝數及雙歧桿菌與腸桿菌比值 （B/E值）均低于健康對照組，腸球菌及擬桿菌拷貝數高于健康對照組，差異有統計學意義（均P<0.05）;腸桿菌拷貝數稍低于健康對照組，但差異無統計學意義（P>0.05）。乳酸桿菌、梭桿菌及雙歧桿菌拷貝數與玫瑰痤瘡病情呈負相關（P<0.05）;腸桿菌及腸球菌拷貝數與玫瑰痤瘡病情呈正相關（P<0.05）;擬桿菌與玫瑰痤瘡病情之間無明顯相關性（P>0.05）。結論：腸道菌群紊亂可能在玫瑰痤瘡發病中起到一定作用。

[關鍵詞]玫瑰痤瘡;腸道菌群;熒光定量PCR;相關性;菌群紊亂

[中圖分類號]R758.73+3 ? ?[文獻標志碼]A ? ?[文章編號]1008-6455（2019）07-0048-04

Clinical Study on the Correlation between Roseacne and Intestinal Flora Disorder

LIANG Bo，LI Guo-dong，HE Ming-xuan，CUI Zhao，LIU Ya-wei，LI Hui-rong，ZHOU Jian-hua

（Department of Dermatology，Baoding Second Hospital，Baoding 071000，Hebei，China）

Abstract： Objective ?To investigate the correlation between rosacea and intestinal flora， and to provide a theoretical basis for the correlation between intestinal flora and the incidence of rosacea. Methods ?From January 2015 to December 2017， we accepted 80 cases of rosacea patients in the dermatology clinic of our hospital as the experimental group， and 60 cases of health examination in our hospital were selected as control group. Real time PCR was used to detect the copy number of Bifidobacterium， Enterococcus， Enterobacter， Bacteroides， Fusobacterium and Lactobacillus in the intestinal flora of the experimental group and the control group. Statistical analysis show the difference of intestinal flora copy number between the two groups， and the correlation between rosacea condition severity and intestinal flora. Results ?The copy number of Lactobacillus， Fusobacterium and Bifidobacterium， and B/E value in the intestine of patients with rosacea were significantly lower than those in the control group， and the copy number of Enterococcus and Bacteroides in the patients with rosacea group were significantly higher than those in the control group， the differences were statistically significant （both P<0.05）. However， Enterobacters copy number of patients with rosacea group slightly lower than that of the normal control group， the difference was not statistically significant （P>0.05）. The copy number of Lactobacillus， Fusobacterium and Bifidobacterium were negatively correlated with rosacea condition severity （P<0.05）. The copy number of Enterobacter and Enterococcus were positively correlated with rosacea condition severity （P<0.05）. The copy number of Bacteroides was not significant correlated with rosacea condition severity （P>0.05）. Conclusion ?The intestinal flora disorder may be related to the pathogenesis of rosacea.

Key words： rosacea; intestinal flora; real-time PCR; correlation; microbiota disturbance

玫瑰痤瘡是一種常見的面中部皮膚血管及毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚病，主要臨床癥狀表現為陣發性潮紅、紅斑、丘疹、膿皰等，少數患者可發展成鼻贅，該病好發于30～40歲女性[1]，發病率約為1%～20%[2]。玫瑰痤瘡的發病原因及機制至今仍未明確，但有不少學者認為其發病與基因易感性，天然免疫、血管神經功能失調、紫外線輻射和微生物感染等因素存在相關性[3]。

玫瑰痤瘡多見于克羅恩病，潰瘍性結腸炎等炎癥性腸病患者中，Spoendlin等[4]認為兩者之間存在相關性。Parodi等學者[5]發現空腸未知細菌的過度生長（Small intestinal Bacterial Overgrowth， SIBO）和玫瑰痤瘡之間存在潛在的關系，但就腸道菌群與玫瑰痤瘡的確切關系尚未完全闡明。自2015年1月以來，筆者對玫瑰痤瘡與腸道菌群紊亂的相關性進行了研究，現報道如下。

1 ?資料和方法

1.1 一般資料：選取2015年1月-2017年12月筆者醫院皮膚科門診的玫瑰痤瘡志愿者80例為實驗組，其中男47例，女33例;年齡18～60歲，平均年齡（34.7±9.1）歲。選取同期筆者醫院健康志愿者60例為對照組，其中男34例，女26例，年齡20～60歲，平均（35.2±10.4）歲。兩組患者一般資料比較，無明顯統計學差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標準：納入標準：①符合玫瑰痤瘡的診斷標準;②除外尋常型痤瘡、脂溢性皮炎及糖皮質激素依賴性皮炎等其他面部慢性皮膚炎癥;③年齡18～60歲，性別不限;④所有患者知情同意，自愿參加本研究并簽署知情同意書。排除標準：①患有嚴重系統性疾病者;②年齡<18歲;③有胃腸道疾病者;④既往有胃腸道手術史者;⑤妊娠、擬妊娠、哺乳期女性;⑥近2個月內口服藥物或行物理治療，或近1個月內口服糖皮質激素、抗生素、抗過敏藥物者。

1.3 皮損面積評分：根據2004年美國國家玫瑰痤瘡協會專家委員會（NRSEC）制定的玫瑰痤瘡分型標準[6]，選取紅斑毛細血管擴張期、丘疹膿皰期、鼻贅期三期患者作為研究對象，其中紅斑毛細血管擴張期18例，丘疹膿皰期46例，鼻贅期16例。根據皮損面積及嚴重程度指數分別對紅斑、毛細血管擴張、丘疹及膿皰數目、皮損面積進行評分[7]。皮損總積分=（紅斑評分+毛細血管擴張評分+丘疹及膿皰數目）×皮損面積評分。試驗組皮損評分4～24分，平均（13.37±4.67）分。評分標準見表1。

1.4 方法

1.4.1 標本收集：收集兩組志愿者清晨新鮮中段糞便約5g于無菌干燥試管內，迅速保存于-80℃超低溫冰箱中。

1.4.2 腸道細菌DNA提取：取2g濕糞便樣品溶于20ml滅菌PBS，震蕩搖勻，10min后以3 000r/min速度離心5min，取上清，上述操作重復3次;以12 000r/min速度離心10min，棄上清，取沉淀并使用20ml PBS懸浮，12 000r/min速度離心5min，重復3次。將洗滌后菌體用2ml無菌水懸浮混勻，分別裝入2個EP管。然后根據DNA提取試劑盒（Biovision，美國）說明書進行糞便DNA的提取。

1.4.3 PCR引物設計：根據文獻報道[8-9]，設計雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌、擬桿菌、梭桿菌和乳酸桿菌的菌屬特異性引物，并在Gene Bank基因庫內比對不同引物序列的特異性和代表性。見表2。

1.4.4 熒光定量PCR：將質粒標準品連續10倍梯度稀釋，獲得102～1012個拷貝/ml的標準品作為模板，行熒光定量PCR。其反應體系為20μl：SYBR Green Master Mix 10μl，上下游引物各0.5μl，模板DNA 2μl，ddH2O 7μl;反應條件：95℃變性5min;95℃變性10s、退火溫度（見表2）20s、72℃延伸30s，共45個循環;反應完畢后進行溶解曲線分析，根據Ct值建立標準曲線。待測樣品DNA稀釋后，體系與條件同上，進行熒光定量 PCR檢測腸道菌群中雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌、擬桿菌、梭桿菌和乳酸桿菌的拷貝數量，同時計算雙歧桿菌與腸桿菌比值（B/E值），B/E值<1提示患者腸道抗定植能力弱，腸道菌群紊亂;B/E值>1，則提示患者腸道抗定植能力強。

1.5 統計學分析：所得數據均錄入SPSS 25.0軟件進行統計學分析，計量資料以均數±標準差（x?±s）表示，行t檢驗，采用Pearson相關系數行相關性分析。

2 ?結果

2.1 兩組腸道菌群狀況對比：玫瑰痤瘡患者腸道菌群中的乳酸桿菌、梭桿菌、雙歧桿菌的拷貝數及B/E值均明顯低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;腸桿菌拷貝數雖稍低于對照組，但差異無統計學意義（P>0.05）。玫瑰痤瘡組腸球菌及擬桿菌的拷貝數顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表3。

2.2 腸道菌群與玫瑰痤瘡的相關性分析：將腸道菌群拷貝數與玫瑰痤瘡的皮損評分進行Pearson相關性分析，腸道菌群中的乳酸桿菌、梭桿菌及雙歧桿菌拷貝數與玫瑰痤瘡呈負相關性（P<0.05）;腸球菌及擬桿菌玫瑰痤瘡呈正相關（P<0.05）;腸桿菌與玫瑰痤瘡的發病相關性不顯著（P>0.05），見表4。

3 ?討論

人體內有數以萬計的腸道菌群疏密有致地分布于消化道之中，在營養物質代謝、免疫調節及維生素合成等過程中發揮不可替代的作用[10]。腸道菌群的組成、數量、分布及生物活性與人體各種代謝活動、消化系統疾病、免疫功能及感染等疾病有著密切聯系[11]。研究發現，腸道菌群穩態失衡與多種疾病相關，如：2型糖尿病、代謝綜合征、肥胖、炎癥性腸病，高血壓及神經系統疾病等[12]。