蔬菜農藥殘留檢測方法變更的驗證方法探析

高強 孫榕 薛耀武

摘要? ? 檢測標準發生變更時，檢驗檢測機構應做好新方法的驗證工作。本文以水果和蔬菜中阿維菌素殘留量測定標準變更為例，詳述了如何開展方法驗證，以期為化學分析方法發生變更時更好地開展驗證工作提供參考。

關鍵詞? ? 農藥殘留;檢測標準;方法變更;方法驗證

中圖分類號? ? TS207.3;O652.1? ? ? ? 文獻標識碼? ? A? ? ? ? 文章編號? ?1007-5739（2019）12-0084-01

Abstract? ? The inspection and testing organization should do a good job of verifying the new method when the test standard changed.In this paper，the change of avermectin residue in fruits and vegetables was taken as an example，the process of method validation was detailed，in order to provide reference for better verification of chemical analysis methods.

Key words? ? pesticide residue;test standard;method change;method validation

蔬菜在生產周期內，由于易發生病蟲害，農藥使用的頻次較高，農藥殘留問題一直受到消費者重點關注。做好監管，合理使用農藥是農產品質量安全的重要保障。近年來，為了進一步提升食品安全水平，國家對食品安全國家標準和食品安全相關標準進行了專項清理整合工作。因此，有大量農藥殘留檢測標準被作廢或代替，還有許多全新標準發布實施。由于新版《檢驗檢測機構資質認定管理辦法》（163號令）的實施，資質認定證書有效期增加到6年，依據資質認定準則4.5.14的規定[1]，檢驗檢測機構應跟蹤方法的變化，并重新進行證實或確認，當檢測標準發生變更代替時，要做好變更后檢測方法的驗證工作，質量監督局安排考核組專家現場進行能力確認。綜上所述，有必要對檢測方法變更驗證試驗進行探析，這對檢驗檢測人員在應對方法變更時有很好的指導意義。本文在論述過程中以水果和蔬菜中阿維菌素殘留量的測定GB 23200.19—2016代替SN/T 2114—2008為實例。

1? ? 標準變化內容

通過對新舊標準內容對比，可找出新標準對以下幾個方面進行了修訂，標準的本質內容未發生改變。

（1）此標準由出入境檢驗檢疫行業標準變更為食品安全國家標準。

（2）應用范圍。由其他水果和蔬菜可以參考本標準改變為其他食品可參照執行，增加了檢測應用范圍。

（3）增加了規范性引用文件內容。

（4）修訂了試樣制備與保存，與現行強制標準GB 2763附錄A對接。

（5）試劑和材料。丙酮的試劑等級變更為色譜純。

（6）儀器和設備。增加了對于分析天平的規格。

（7）結果計算與表述。增加了計算結果保留有效數字的位數。

（8）增加了對精密度的要求描述。

（9）將測定底限準確變更表述為檢測定量限。

2? ? 實驗室是否滿足新標準要求

2.1? ? 人員

儀器設備的操作人員未發生改變，所有實驗室檢測人員都通過考核，持證上崗，明確人員授權能力范圍;人員年度能力確認，使檢測人員能夠持續滿足檢測工作要求。

2.2? ? 儀器設備

做好儀器設備的檢定、期間核查工作，使儀器性能確保符合檢測要求以及量值溯源;檢測所用儀器及檢測器未發生變化，均滿足檢測需求。

2.3? ? 試劑耗材

每年做好供應商評價工作、耗材驗收工作，以及指定購買特定廠家的服務。

2.4? ? 體系文件

每年做好管理評審工作，根據體系文件的適應性以及資質認定準則和機構考核細則的變化，及時完成體系文件的再版、修訂工作，使體系文件運行持續有效，檢測工作受到嚴格控制。

2.5? ? 環境條件

做好實驗室環境控制工作，對于可能對實驗結果產生影響的實驗室溫濕度進行控制，并及時記錄環境條件，液相色譜儀所在檢測室符合儀器運行的規定。

3? ? 方法驗證參數

3.1? ? 線性范圍

農藥殘留檢測濃度范圍通常覆蓋關注濃度50%～150%，應至少包含方法定量限濃度點;元素檢測應覆蓋關注濃度0～150%，要充分考慮試劑對響應值的影響[2]。濃度為0.20、0.40、0.80、1.00、2.00、4.00 μg/mL時，對應的峰面積分別為7.629 01、15.464 94、32.122 50、40.704 24、79.919 59、163.440 83，線性擬合方程為y=40.865 58x-0.569 963，R=0.999 94。其中0.20 μg/mL是定量限濃度值。

3.2? ? 檢出限和定量限

通常只有當目標物的含量接近于0時確定檢出限（LOD）或定量限（LOQ）。對于濃度接近痕量和超痕量檢測時，檢測報告為“未檢出”時，或者接近超標限量時，實驗室需要利用檢出限和定量限進行風險評估或者法規決策。對于現代儀器分析方法來講，檢出限可分為儀器檢出限和方法檢出限2個部分，定量限也可分為儀器定量限和方法定量限。農藥殘留定量檢測主要應用色譜法和質譜法，均可采用信噪比法評估檢出限和定量限;較低濃度的分析物濃度的確定可根據檢測標準的方法檢出限或超標限量確定;典型可接受的信噪比是3∶1為檢測限，10∶1為定量限[3-4]。由于農產品的基質較復雜，不同的基質可能需要分別評估檢出限和定量限。

3.2.1? ? 儀器檢出限和儀器定量限。儀器信噪比法評估：根據阿維菌素標品濃度0.20 μg/mL檢測譜圖信噪比（s/n）約為10∶1;阿維菌素標品濃度0.40 μg/mL檢測譜圖信噪比（s/n）約為20∶1。按照信噪比3∶1為檢出限，10∶1為定量限，可以推算出儀器檢出限為0.003 3 mg/kg，儀器定量限為0.010 mg/kg。

3.2.2? ? 方法檢出限和儀器定量限。儀器信噪比法評估：按照下述加標實驗方案，加標濃度0.20 mg/kg，檢測譜圖信噪比（s/n）約為20∶1。按照信噪比（s/n）3∶1為檢出限，10∶1為定量限，可以推算出方法檢出限為0.003 3 mg/kg，方法定量限為0.010 mg/kg。

3.3? ? 正確度和精密度

測量結果的正確度用于表述多次重復測定結果的平均值與參考值之間的接近程度，表示的是系統誤差，系統誤差可通過加標回收試驗進行評估，方法回收率的偏差范圍可參考相關規定進行評價（可參考GB/T 27404附錄F.1）[5-6]。精密度通過測量結果重復性和再現性進行評估。重復性（rep-eatability）是指在正常和正確操作情況下，由同一操作人員，在同一實驗室內，使用同一儀器，并在短期內對相同試樣所做多個單次測試結的分散性，用測試結果變異系數進行評價（可參考GB/T 27404附錄F.3）。再現性（reproducibility）是指在正常和正確操作情況下，用相同的方法、同一試驗材料，在不同的條件下獲得的單個結果之間的一致程度[7-9]。不同的條件指不同操作者、不同實驗室、不同或相同的時間，對不同試樣所做多個單次測試結果，在95%置信概率水平獨立測試結果的最大差值[10-12]。在實例中選擇了用加標回收率評定正確度，加標回收檢測結果的重復性評定精密度。

阿維菌素加標試驗方案：樣品為菠菜;稱樣量20 g;標液濃度4.0 μg/mL，加入100 μL（0.40 μg）;加標量0.020 mg/kg;7組平行樣。

7組平行樣的檢測結果見表1。平均值x為0.018 1;標準偏差S為0.001 09;變異系數（相對標準偏差）CV為6.0%。

4? ? 結論

以阿維菌素農藥殘留檢測標準變更為實例，對比了標準變化內容，從“人、機、物、法、環”5個方面分析實驗室是否滿足新標準要求，設計了線性范圍、檢出限、定量限、正確度、精密度等方法驗證參數的試驗方案，通過對施工檢驗結果評價符合相關要求，可以證明實驗室具備此標準方法檢測能力，以期為大家開展化學分析方法發生變更時的驗證工作提供參考。此外，試驗方案設計時可從再現性、基質效應、測量不確定度評定等方面做繼續探析。

5? ? 參考文獻

[1] 馮秀梅，陳君.化學分析方法驗證和確認的應用研究[J].中國無機分析化學，2018，8（5）：61-66.

[2] 許明哲，黃寶斌，楊青云，等.分析方法確認內容介紹[J].藥物分析雜志，2015，35（1）：183-189.

[3] 郟征偉，苗水，毛秀紅，等.食品分析水平測試計劃農藥殘留能力驗證中分析方法的選擇及其結果評價[J].農藥學學報，2011，13（3）：293-298.

[4] 李淑敏，李靜，應波.離子色譜法同時測定飲用水中三價鉻與六價鉻分析方法驗證[J].中國衛生檢驗雜志，2011，21（10）：2403-2405.

[5] 侯雪，鄭衛東，胡莉，等.淺析化學檢測實驗室的方法確認和方法驗證[J].實驗室研究與探索，2016，35（2）：255-258.

[6] 田強兵.分析化學中檢出限和測定下限的探討[J].化學分析計量，2007（3）：72-73.

[7] 高婷婷，杜鵬，徐澤瓊，等.污水中常見違禁藥物分析方法優化及驗證[J].環境科學，2017，38（1）：201-211.

[8] 王思寰，吳越，王玉，等.藥品分析方法驗證要點的討論[J].藥物分析雜志，2018，38（9）：1646-1651.

[9] 魯靜，付凌燕，王旭.質量分析方法驗證中檢出限和定量限測定方法探討[J].中國藥品標準，2012，13（1）：33-35.

[10] 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.合格評定 化學分析方法確認和驗證指南：GB/T 27417-2017[S].北京：中國標準出版社，2017.

[11] 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.實驗室質量控制規范 食品理化檢測：GB/T 27404-2008[S].北京：中國標準出版社，2008.

[12] 逄瑜，于新蘭，李海芳，等.農藥殘留測定結果不確定度評定方法指南介紹[J].中國新藥雜志，2018，27（1）：17-21.