臨沂市銀雀花組織培養技術研究

樊青峰

摘要? ? 以銀雀花的莖段為外植體，通過對不同基本培養基、不同植物生長調節劑種類和濃度的篩選，建立銀雀花的組織培養再生體系，為銀雀花的組織快繁提供技術指導。結果表明，初代培養宜選用培養基MS+1.2 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA;最佳增殖培養基為MS中添加0.4 mg/L TDZ，誘導形成 4～5個叢生芽，將嫩莖接種在添加0.75 mg/L NAA的1/2 MS培養基中，生根率為83.0%。

關鍵詞? ? 銀雀花;組織培養;再生體系;山東臨沂

中圖分類號? ? S688? ? ? ? 文獻標識碼? ? A? ? ? ? 文章編號? ?1007-5739（2019）12-0103-01

金雀花、銀雀花是臨沂市兩大地方性花卉，也是與金雀山和銀雀山地名相匹配的名優特色花卉，與臨沂歷史文化緊密相連。金雀花、銀雀花在臨沂市種植歷史悠久[1]，但是由于種種原因已瀕臨滅絕。由于近年來綠色食品和食花文化的興起，對金雀花、銀雀花及其種苗的需求與日俱增，因人為采摘花朵及環境影響等導致其結實率低，而分株和扦插繁殖系數也低，無法滿足市場需求。目前，僅對金雀花食用價值、藥物成分、栽培管理和組織培養開展了研究[2-5]，但對于銀雀花組織培養的報道極少。因此，本文研究不同植物生長調節劑種類和濃度誘導叢生芽，建立銀雀花組織培養再生體系，以期實現種苗快速繁育，滿足臨沂地方花卉產業種苗需求。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗材料

分別于2016年4月和5月在臨沂市農業科學院試驗基地多年生的銀雀花上采取半木質化枝條作為試材。

1.2? ? 試驗方法

1.2.1? ? 材料滅菌。剪取銀雀花生長健壯的枝條，流水沖洗30 min，然后在超凈工作臺上用75%乙醇處理10 s，再用0.5%次氯酸鈉滅菌15 min，無菌水沖洗3～4次。將材料切成帶腋芽的長1.0 cm莖段，每個莖段帶1個腋芽，接種到誘導培養基。

1.2.2? ? 初代培養。試驗采用3因素3水平正交設計，研究基本培養基和植物生長調節劑對初代培養的影響。基本培養基為 MS、WPM和LP;植物生長調節劑為6-BA 0.4、0.8、1.2 mg/L;NAA 0.05、0.10、0.15 mg/L。每個處理接種外植體10 個，3次重復，30 d時統計成活率。成活率（%）=（成活外植體/接種總數）×100。

1.2.3? ? 無菌苗增殖培養?；九囵B基為MS，在培養基中分別添加TDZ 0、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/L，然后均添加0.15 mg/L NAA，研究不同濃度的TDZ對增殖的影響。外植體10個，重復3 次，30 d時統計增殖系數。增殖系數=增殖后的總芽數/接種芽數。

1.2.4? ? 生根培養。在1/2 MS培養基中分別添加0、0.25、0.50、0.75、1.00 mg/L NAA，研究不同質量濃度的NAA對生根的影響。每個處理接種外植體10個，先暗培養7 d后再轉入光下培養。3次重復，30 d時統計生根率。生根率（%）=（生根芽數/接種芽數）×100。

培養條件：除生根培養基添加20.0 g/L蔗糖外，其余添加30.0 g/L蔗糖;均添加6.0 g/L瓊脂，pH值5.6～5.8。光照時間為12 h/d，光照強度為2 000 lx，培養溫度為（25±1）℃。

2? ? 結果與分析

2.1? ? 基本培養基和植物生長調節劑對莖段腋芽萌發誘導的綜合影響

將材料切成帶腋芽的長1.0 cm的莖段消毒后接種到不同的誘導培養基上，10 d后即可萌發，30 d后統計萌發率。MS成活率最高，平均成活率為45.9%，MS培養基上生長的芽粗壯;在WPM和LP上的萌發效果基本相同，平均成活率分別為35.6%和35.1%，生長后期小葉有黃化脫落現象。從表1可以看出，在MS培養基添加0.15 mg/L NAA和1.2 mg/L 6-BA腋芽的成活率最高，為58.5%，且差異顯著。

2.2? ? 不同濃度TDZ對增殖的影響

將誘導的腋芽新梢切下，轉接到增殖培養基上。試驗結果（表2）表明，無菌苗隨著TDZ濃度的增加，增殖系數呈上升趨勢，并生成了叢生芽;但當TDZ濃度達到0.8 mg/L時，增殖系數為4.8，出現玻璃化現象;當TDZ濃度達1.0 mg/L，基部愈合組織多，不定芽生長緩慢。因此，增殖培養基中添加0.4 mg /L為TDZ最佳濃度。

2.3? ? 不同濃度 NAA 對無菌苗生根的影響

試驗結果（表3）表明，在NAA質量濃度為0.25～1.00 mg/L范圍內，隨著濃度升高，生根率上升;在0.75 mg/L時，誘導根系粗壯，平均根數為3.6條，差異顯著。當NAA為1.0 mg/L時，生根率較高，但基部形成大量愈合組織，生根倍數有所下降，不利于后期生長。

3? ? 結論與討論

銀雀花組培快繁過程中，選擇合適的基本培養基是組培快繁成功的關鍵之一[6]。本試驗結果表明，初代培養以MS+1.2 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA培養基為宜，可以獲得較高的成活率。在增殖培養過程中，在一定范圍內，TDZ隨著濃度的增加，有利于增殖，并較好誘出叢生芽;在0.4 mg/L的條件下TDZ增殖效果最好，增殖系數可達4.5;但濃度過高反而抑制芽的再生，導致芽苗玻璃化等現象。生根以1/2 MS基本培養基中添加0.75 mg/L NAA生根效果最好。

4? ? 參考文獻

[1] 張謙，劉延剛，彭金海，等.臨沂市金雀花的植物學特性及盆景制作技術[J].農業科技通訊，2013（5）：263-256.

[2] 李洪文.多功能野生物種：金雀花繁苗用豐產栽培技術[J].耕作與栽培，2003（4）：27-28.

[3] 樊建，趙天瑞，李永生，等.野生金雀花營養成分研究[J].昆明理工大學報（理工版），2006，31（2）： 97-99.

[4] 陳家龍，朱建軍，吳秀水，等.金雀花組織培養與快繁[J].浙江農林大學學報，2013，30（4）：611-614.

[5] 馬青，唐民科.線葉金雀花的研究進展[J].世界科學技術-中醫藥現代化，2018，20（6）：998-1003.

[6] 陳家龍，朱建軍，陳功楷，等.金雀花花期促成栽培研究[J].上海農業學報，2014，30（4）：57-61.