原薯蕷皂調(diào)控JNK/P38 MAPK信號通路對卵巢癌SKOV3細(xì)胞系增殖、凋亡及遷移侵襲的影響①

朱利紅 段樹鵬 秦海霞 張秀玲 趙淑珍 李少儒 王世進(jìn)

(河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院一附院婦產(chǎn)科，新鄉(xiāng)453000)

卵巢癌是一類常見的惡性婦科癌癥，其發(fā)病率稍次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌，而死亡率在婦科癌癥中居于首位[1]。早期卵巢癌患者經(jīng)手術(shù)治療預(yù)后良好，5年生存率>90%，而多數(shù)晚期卵巢癌患者經(jīng)手術(shù)、鉑類化合物和紫杉烷化療后仍出現(xiàn)復(fù)發(fā)，5年生存率≤30%[1,2]。現(xiàn)階段，臨床靶向治療策略是改進(jìn)癌癥治療方案的理想選擇，因此，尋找新的可替代藥物用于抑制癌癥的發(fā)生及發(fā)展成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點。原薯蕷皂苷(Protodioscin,PD)是一種主要來源于薯蕷科及姜科植物根莖中的呋甾皂苷前體[3]，可作為抗癌藥物誘導(dǎo)包括卵巢癌細(xì)胞在內(nèi)的60種癌細(xì)胞發(fā)生凋亡[4]。有研究表明，在宮頸癌細(xì)胞中，PD可通過激活絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號通路中的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)亞通路和p38亞通路，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的發(fā)生[5]。也有研究表明，卵巢癌細(xì)胞JNK/p38 MAPK信號通路的激活可促進(jìn)癌細(xì)胞發(fā)生凋亡[6]。但目前還沒有關(guān)于卵巢癌中PD作用于JNK/p38 MAPK信號通路的報道，而且PD對卵巢癌細(xì)胞的作用及功能也沒有詳細(xì)研究。因此，本文利用PD處理卵巢癌SKOV3細(xì)胞，檢測PD對癌細(xì)胞生存、運動能力以及JNK/p38 MAPK信號通路的影響及作用，為抑制卵巢癌的發(fā)生及發(fā)展提供新的治療思路。

1 材料與方法

1.1材料 原薯蕷皂苷(Protodioscin,PD)由南京春秋生物工程有限公司提供。胎牛血清(FBS)RPMI1640培養(yǎng)液由美國Gibco公司提供。青霉素-鏈霉素溶液、MTT、Hoechst染色試劑盒、RIPA裂解液和BCA試劑盒由上海碧云天生物技術(shù)研究所提供。MAPK通路抑制劑SB203580及JNK通路抑制劑SP600125由美國Sigma公司提供。Ki67、增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因伴隨蛋白x(Bcl-associated x protein,Bax)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因-2(B-cell lymphoma/leukemia gene-2,Bcl-2)、血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和MMP-2抗體由美國Santa Cruz公司提供。cleaved Caspase-3、磷酸化p38激酶(p-p38)、p38、磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(phosphoryl-ated extracellular signal-regulated kinase1/2,p-ERK1/2)、ERK1/2、磷酸化c-Jun氨基末端激酶1/2(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase1/2,p-JNK1/2)和JNK1/2抗體由美國Cell Signaling Technology公司提供。3-磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)抗體及實驗所用二抗由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 卵巢癌細(xì)胞系SKOV3由美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC)提供。細(xì)胞培養(yǎng)液為含有100 U/ml青霉素、100 μg/ml鏈霉素和10%FBS的RPMI1640。培養(yǎng)箱條件為37℃、5%CO2。傳代條件為細(xì)胞融合率≥85%，傳代濃度為1×104個/ml。

1.2.2PD濃度梯度預(yù)實驗 將細(xì)胞以1×105個/ml的濃度接種于6孔板后培養(yǎng)24 h，然后以不同濃度梯度的PD(0、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500 μmol/L)處理SKOV3細(xì)胞，24 h后檢測細(xì)胞存活率。選取細(xì)胞存活率≥80%且數(shù)值較高的PD濃度作為最佳給藥濃度。

1.2.3細(xì)胞分組及處理 將細(xì)胞以1×105個/ml的濃度接于6孔板后培養(yǎng)24 h，細(xì)胞經(jīng)以下不同方法處理分三大組:①Control組為空白對照；②加入不同濃度PD干預(yù)分為:PD(2 μmol/L)組、PD(5 μmol/L)組、PD(10 μmol/L)組；③PD(10 μmol/L)+SB203580組,PD(10 μmol/L)+SP600125組。處理步驟:經(jīng)過或未經(jīng)SB203580及SP600125轉(zhuǎn)染抑制劑預(yù)處理后，應(yīng)用各濃度的PD處理細(xì)胞24 h后進(jìn)行以下各項實驗研究。

1.2.4MTT法檢測細(xì)胞活性 將1.2.2及1.2.3中各組細(xì)胞中加入5 mg/ml的MTT溶液，處理4 h后終止。用移液槍棄去板孔中培養(yǎng)液，并翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)板倒扣于厚濾紙上使培養(yǎng)液去除干凈。然后在板孔中加入二甲基亞砜低速震蕩10 min使結(jié)晶物充分溶解。最后利用酶聯(lián)免疫檢測儀在OD490 nm處測量各組細(xì)胞的吸光值。

1.2.5Hoechst染色檢測細(xì)胞凋亡 將1.2.3中各組細(xì)胞中加入固定液進(jìn)行固定，然后利用Hoechst染色試劑盒進(jìn)行染色，最后用熒光顯微鏡進(jìn)行檢測。激發(fā)波長為350 nm，發(fā)射波長為460 nm。細(xì)胞核呈藍(lán)色。

1.2.6Transwell檢測細(xì)胞侵襲 先將Matrigel放于4℃融化，然后取少量Matrigel到Transwell小室中進(jìn)行預(yù)包被。將1.2.3中各組細(xì)胞接種于上室，利用無血清1640培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h。最后用棉簽拭去濾膜上層未轉(zhuǎn)移細(xì)胞，利用HE染色液對下層轉(zhuǎn)移細(xì)胞進(jìn)行染色并計數(shù)。

1.2.7劃痕實驗檢測細(xì)胞遷移 先在細(xì)胞培養(yǎng)板孔背面畫橫線，每孔至少畫5條橫線穿過板孔，各橫線需間隔0.5～1 cm。然后在板中培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞，并用1.2.3中所述方法培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞鋪滿板孔后，用中槍頭盡量垂直于板孔背面橫線進(jìn)行劃痕。劃痕后用PBS清除板孔細(xì)胞殘余，再加入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。同時取0和24 h進(jìn)行拍照用于計算劃痕閉合率。劃痕閉合率 =(0 h劃痕寬度-24 h劃痕寬度)/0 h劃痕寬度×100%。

1.2.8免疫印跡檢測蛋白表達(dá) 先用RIPA裂解1.2.3中各組細(xì)胞，提取細(xì)胞蛋白后，用BCA試劑盒對蛋白濃度進(jìn)行定量并調(diào)平各組蛋白濃度。然后取各組蛋白30 μg，用10%SDS-PAGE將蛋白分離。通過半干轉(zhuǎn)膜法將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，一抗4℃過夜，二抗37℃孵育1 h，最后曝光顯色，以β-actin為內(nèi)參。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析 利用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，先對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布分析和方差齊性分析，符合條件的數(shù)據(jù)用單因素方差分析或t檢驗，不符合條件的用秩和檢驗。

2 結(jié)果

2.1PD降低卵巢癌SKOV3細(xì)胞生存能力 本文首先利用不同濃度的PD對SKOV3細(xì)胞進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn)當(dāng)其濃度達(dá)到20 μmol/L時，SKOV3細(xì)胞存活率不足80%，故將PD用藥濃度分別設(shè)為2、5、10 μmol/L(圖1A)。與Control組比較，PD(2 μmol/L)組中SKOV3細(xì)胞的增殖速率顯著降低(P<0.05，圖1B)，細(xì)胞核形態(tài)發(fā)生變異，細(xì)胞凋亡百分比顯著升高(P<0.01，圖1C)，細(xì)胞中Ki67表達(dá)無顯著差異，Bcl-2表達(dá)顯著減少(P<0.05，圖1D)，Bax和cleaved caspase-3表達(dá)顯著增加(P<0.05，P<0.01，圖1D)。PD(5 μmol/L)組和PD(10 μmol/L)組中細(xì)胞增殖速率顯著降低(P<0.01，P<0.001，圖1B)，細(xì)胞核發(fā)生破碎、濃縮和降解，細(xì)胞凋亡百分比顯著升高(P<0.001，圖1C)，Ki67和Bcl-2表達(dá)顯著減少(P<0.05，P<0.01，圖1D)，Bax及cleaved caspase-3的表達(dá)顯著增加(P<0.01，P<0.001，圖1D)。實驗結(jié)果說明PD可顯著抑制SKOV3細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提示PD可降低卵巢癌SKOV3細(xì)胞的生存能力。

圖1 PD對卵巢癌SKOV3細(xì)胞生存能力的影響Fig.1 Effect of protodioscin on survival of ovarian cancer cell SKOV3Note: n=6,*.P<0.05,**.P<0.01,***.P<0.001 versus control group.

2.2PD降低卵巢癌SKOV3細(xì)胞運動能力 與Control組比較，PD(2 μmol/L)組中SKOV3的侵襲細(xì)胞數(shù)無顯著差異(圖2A)，細(xì)胞劃痕閉合率顯著降低(P<0.05，圖2B)，VEGF、MMP-2和MMP-9表達(dá)無顯著差異(圖2C)。PD(5 μmol/L)組和PD(10 μmol/L)組中侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.01，圖2A)，細(xì)胞劃痕閉合率顯著降低(P<0.05，P<0.01，圖2B)，侵襲遷移相關(guān)蛋白VEGF、MMP-2和MMP-9的表達(dá)顯著減少(P<0.01，圖2C)。實驗結(jié)果說明PD可顯著抑制SKOV3細(xì)胞侵襲和遷移，提示PD可降低SKOV3細(xì)胞的運動能力。

2.3PD激活卵巢癌SKOV3細(xì)胞JNK/P38 MAPK亞通路 與Control組比較，PD(2 μmol/L)組、PD(5 μmol/L)組和PD(10 μmol/L)組SKOV3細(xì)胞中p-ERK1/2/ERK1/2的比值無顯著差異，p-p38/p38和p-JNK1/2/JNK1/2的比值顯著升高(P<0.05，P<0.01，P<0.001，圖3)。實驗結(jié)果說明，PD可顯著激活SKOV3細(xì)胞MAPK信號通路中的JNK和P38亞通路，提示PD可能通過激活卵巢癌細(xì)胞SKOV3中JNK/P38 MAPK信號通路發(fā)揮抗癌作用。

圖2 PD對卵巢癌SKOV3細(xì)胞運動能力的影響Fig.2 Effect of protodioscin on motility of ovarian cancer cell SKOV3Note: n=6,*.P<0.05,**.P<0.01,versus control group.

2.4SP600125及SB203580抑制SKOV3細(xì)胞JNK/P38 MAPK信號通路激活 與Control組比較，PD(10 μmol/L)組SKOV3細(xì)胞中p-p38/p38和p-JNK1/2/JNK1/2比值顯著升高(P<0.001，圖4)。PD+SB203580組細(xì)胞中p-p38/p38值顯著降低(P<0.001，圖4)，PD+SP600125組細(xì)胞中p-JNK1/2/JNK1/2比值顯著降低(P<0.001，圖4)。與PD(10 μmol/L)組比較，PD(10 μmol/L)+SB203580組細(xì)胞中p-JNK1/2/JNK1/2比值無顯著差異，PD(10 μmol/L)+SP600125組細(xì)胞中p-p38/p38比值無顯著差異(圖4)。實驗結(jié)果說明，SB203580可顯著降低p-p38/p38比值，SP600125可顯著降低p-JNK1/2/JNK1/2比值，提示SB203580可抑制SKOV3細(xì)胞MAPK信號通路中P38亞通路的激活，SP600125可抑制SKOV3細(xì)胞MAPK信號通路中JNK亞通路的激活。

2.5抑制JNK/P38 MAPK信號通路可減弱PD對SKOV3細(xì)胞生存能力的影響 與Control組比較，PD(10 μmol/L)組SKOV3細(xì)胞增殖速率顯著降低，凋亡細(xì)胞百分比顯著升高(P<0.001，圖5)。與PD(10 μmol/L)組比較，PD(10 μmol/L)+SB203580及PD(10 μmol/L)+SP600125組細(xì)胞增殖速率顯著升高，凋亡細(xì)胞百分比顯著降低(P<0.01，圖5)。此外，與Control組比較，PD(10 μmol/L)組中Ki67表達(dá)顯著減少，cleaved caspase-3表達(dá)顯著增加(P<0.001，圖6)。與PD(10 μmol/L)組比較，PD(10 μmol/L)+SB203580及PD(10 μmol/L)+SP600125組中Ki67表達(dá)顯著增加，cleaved caspase-3表達(dá)顯著減少(P<0.01，圖6)。實驗結(jié)果說明，抑制JNK/P38 MAPK信號通路顯著減弱PD對SKOV3細(xì)胞的促凋亡抑增殖作用，提示抑制JNK/P38 MAPK信號通路顯著減弱PD對SKOV3細(xì)胞生存能力的影響。

圖3 PD對卵巢癌SKOV3細(xì)胞中JNK/P38 MAPK信號通路的影響Fig.3 Effect of protodioscin on JNK/P38 MAPK signal pathway in ovarian cancer cell SKOV3Note: n=6,*.P<0.05,**.P<0.01,***.P<0.001 versus control group.

圖4 SP600125及SB203580對SKOV3細(xì)胞JNK/P38 MAPK信號通路的影響Fig.4 Effect of SP600125 and SB203580 on JNK/P38 MAPK signal pathway in SKOV3 cellsNote: n=6,***.P<0.001 versus control group.

圖5 抑制JNK/P38 MAPK信號通路減弱PD對SKOV3細(xì)胞生存能力的影響Fig.5 Effect of protodioscin on survival of SKOV3 cell was weakened by inhibiting JNK/P38 MAPK signal pathwayNote: n=6,***.P<0.001 versus control group；##.P<0.01 versus PD(10 μmol/L) group.

圖6 抑制JNK/P38 MAPK信號通路干擾PD對SKOV3細(xì)胞中Ki67、cleaved Caspase-3和MMP-9的調(diào)節(jié)作用Fig.6 Regulating effect of PD on Ki67,cleaved Caspase-3 and MMP-9 in SKOV3 cell were obstructed by inhibiting JNK/P38 MAPK signal pathwayNote: n=6,***.P<0.001 versus control group；##.P<0.01 versus PD(10 μmol/L) group.

圖7 抑制JNK/P38 MAPK信號通路降低PD對SKOV3細(xì)胞運動能力的作用Fig.7 Effect of protodioscin on motility of SKOV3 cell was lowered by inhibiting JNK/P38 MAPK signal pathwayNote: n=6,**.P<0.01,***.P<0.001 versus control group；#.P<0.05,##.P<0.01 versus PD(10 μmol/L) group.

2.6抑制JNK/P38 MAPK信號通路可降低PD對SKOV3運動能力的作用 與Control組比較，PD(10 μmol/L)組SKOV3侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.001，圖7)，細(xì)胞劃痕閉合率顯著降低(P<0.01，圖7)。與PD(10 μmol/L)組比較，PD(10 μmol/L)+SB203580及PD(10 μmol/L)+SP600125組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著增加(P<0.01，P<0.05，圖7)，細(xì)胞劃痕閉合率顯著升高(P<0.01，圖7)。此外，與Control組比較，PD(10 μmol/L)組中MMP-9表達(dá)顯著減少(P<0.001，圖6)。與PD(10 μmol/L)組比較，PD(10 μmol/L)+SB203580及PD(10 μmol/L)+SP600125組中MMP-9表達(dá)顯著增加(P<0.01，圖6)。實驗結(jié)果說明，抑制JNK/P38 MAPK信號通路顯著降低PD對SKOV3細(xì)胞的抗侵襲遷移作用，提示抑制JNK/P38 MAPK信號通路顯著降低PD對SKOV3運動能力的作用。

3 討論

近年來，一些天然化合物被用來預(yù)防或治療人卵巢癌[7,8]，這類新型抗腫瘤藥物治療不同于常規(guī)放療化療，引起醫(yī)學(xué)研究者們的極大關(guān)注。PD是一類提取于多種植物根莖的呋甾醇皂苷天然化合物，有報道表明，PD具有抗氧化、抗發(fā)炎及抗癌的藥物學(xué)功能，可以引起多種癌細(xì)胞發(fā)生凋亡[4，9，10]。目前關(guān)于PD在卵巢癌細(xì)胞中的影響及其作用機制需要進(jìn)一步的探索。本文為研究PD在卵巢癌細(xì)胞中的影響，首先對PD對卵巢癌細(xì)胞SKOV3的用藥濃度進(jìn)行摸索，發(fā)現(xiàn)當(dāng)PD濃度達(dá)到20 μmol/L時，細(xì)胞存活率不足80%，故將PD用藥梯度濃度分別設(shè)為2、5、10 μmol/L。通過利用不同濃度PD對SKOV3細(xì)胞進(jìn)行處理，檢測PD對細(xì)胞生存能力及運動能力的影響。

細(xì)胞增殖速率與細(xì)胞凋亡水平是評價癌細(xì)胞生存能力的重要指標(biāo)。研究表明，PD可降低癌細(xì)胞增殖速率并提高細(xì)胞凋亡水平。如在人肺癌細(xì)胞A549和肝癌細(xì)胞HepG2中，PD引起G2/M細(xì)胞周期停滯，降低細(xì)胞增殖速率，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生[11,12]。在胰腺癌細(xì)胞MIA PaCa-2和PANC-1中，PD降低細(xì)胞增殖速率并抑制細(xì)胞糖酵解。在本文中，PD可降低卵巢癌細(xì)胞SKOV3增殖速率，提高凋亡細(xì)胞百分比，且隨著PD濃度由2 μmol/L增加至10 μmol/L，PD對SKOV3細(xì)胞的抑制增殖促凋亡作用越顯著。同時，PD可減少蛋白Ki67和Bcl-2表達(dá)，增加Bax和cleaved caspase-3表達(dá)。Ki67是一類DNA結(jié)合蛋白，Ki67表達(dá)水平越高說明處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞越多，細(xì)胞增殖活性越高，腫瘤生長越快[13]。Bcl-2是一類抗凋亡蛋白，在多種癌癥中表達(dá)上調(diào)[14,15]，可作為癌癥發(fā)生的標(biāo)志蛋白[16]。Bax是一類促凋亡蛋白，它可誘導(dǎo)細(xì)胞色素c的釋放，進(jìn)而激活caspase-9和caspase-3前體[17]。據(jù)報道，升高Bax的表達(dá)水平可以誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡[18]。cleaved caspase-3是凋亡過程中的關(guān)鍵執(zhí)行蛋白，可作為評判細(xì)胞凋亡水平的檢測指標(biāo)[19]。綜合實驗結(jié)果說明，PD可顯著抑制SKOV3細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提示PD可降低卵巢癌SKOV3細(xì)胞的生存能力。

侵襲和遷移是癌癥轉(zhuǎn)移的重要過程，細(xì)胞侵襲能力和遷移能力越強表示癌細(xì)胞運動能力越強，癌癥越容易轉(zhuǎn)移。作為抗癌藥物，目前并沒有報道證明PD抑制癌細(xì)胞侵襲和遷移。但在經(jīng)皮冠狀動脈血管中，PD可顯著抑制血管平滑肌細(xì)胞的過度增殖和遷移，同時下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的表達(dá)。MMP-2及MMP-9是侵襲遷移相關(guān)蛋白，可加速細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)腫瘤組織浸潤轉(zhuǎn)移[20]。本文研究發(fā)現(xiàn)，PD可降低卵巢癌細(xì)胞SKOV3劃痕閉合率，減少侵襲細(xì)胞數(shù)，并且伴隨著PD濃度的升高，PD對SKOV3細(xì)胞侵襲遷移的抑制效果越明顯。此外，PD還可降低蛋白VEGF、MMP-2和MMP-9的表達(dá)。血管內(nèi)皮生長因子VEGF是促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲和遷移的關(guān)鍵蛋白，它可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞過度增殖和血管形成，為腫瘤轉(zhuǎn)移提供條件[21]。綜合實驗結(jié)果說明，PD可顯著抑制SKOV3細(xì)胞侵襲和遷移，提示PD可降低卵巢癌細(xì)胞SKOV3的運動能力。

大量研究顯示JNK/p38 MAPK信號通路與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。如在肝臟星狀細(xì)胞中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過激活JNK/p38 MAPK信號通路促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生[22]。在慢性淋巴細(xì)胞白血病中，抑制劑通過激活JNK/p38 MAPK信號通路誘導(dǎo)淋巴B細(xì)胞凋亡[23]。最近研究報道表明，在口腔癌和宮頸癌細(xì)胞中，PD可激活JNK/p38 MAPK信號通路并促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生[5,24]。在本文中，PD可顯著促進(jìn)SKOV3細(xì)胞發(fā)生凋亡，于是本文對細(xì)胞中MAPK信號通路的活化程度進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)隨著濃度升高，PD可顯著升高SKOV3細(xì)胞MAPK信號通路中p-p38/p38和p-JNK1/2/JNK1/2比值，而對p-ERK1/2/ERK1/2的比值沒有影響。MAPK信號通路是將細(xì)胞外刺激信號傳遞至細(xì)胞及其核內(nèi)的感應(yīng)器之一，它包括3條亞通路，其中p38亞通路和JNK亞通路的主要功能是誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，而ERK亞通路通常與細(xì)胞增殖分化有關(guān)，短暫激活的ERK亞通路可促進(jìn)細(xì)胞增殖，持續(xù)激活的ERK亞通路可誘導(dǎo)細(xì)胞分化[25]。PD可顯著激活SKOV3細(xì)胞MAPK信號通路中的JNK和p38亞通路激活JNK/p38 MAPK信號通路誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，抑制癌癥的發(fā)生發(fā)展[25]。在胃癌細(xì)胞中，五味子提取物通過激活JNK/p38 MAPK信號通路促進(jìn)細(xì)胞死亡，從而發(fā)揮抗癌作用[26]。為證明PD通過激活JNK/p38 MAPK信號通路發(fā)揮抗癌作用，說明抑制JNK/p38 MAPK信號通路顯著降低PD對SKOV3細(xì)胞的抗侵襲遷移作用，提示抑制JNK/p38 MAPK信號通路顯著降低PD對SKOV3細(xì)胞運動能力的作用。綜合實驗結(jié)果說明，抑制JNK/p38 MAPK信號通路干擾了PD對SKOV3細(xì)胞的調(diào)控作用。提示PD可能通過激活JNK/p38 MAPK信號通路發(fā)揮對SKOV3細(xì)胞的調(diào)控作用。

綜上所述，PD可顯著降低SKOV3細(xì)胞的生存能力和運動能力，激活JNK/p38 MAPK信號通路。而抑制JNK/p38 MAPK信號通路顯著減弱PD對SKOV3細(xì)胞生存能力的影響，降低PD對SKOV3細(xì)胞運動能力的作用。提示PD通過激活JNK/p38 MAPK信號通路降低卵巢癌細(xì)胞SKOV3的生存能力和運動能力，為PD臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)，為卵巢癌靶向治療提供新的思路。