ApoE基因多態性與高脂血癥患者降脂療效的相關性

姚瓊 鄭炎焱 吳曙智 林一均 吳森翔 戴顯寧 張旭

隨著我國經濟的發展和人民生活水平的提高，高脂血癥患者逐年增加，據《中國成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）》報道，2012年我國高膽固醇血癥的患病率為4.9%，高甘油三酯血癥的患病率為13.1%，低高密度脂蛋白膽固醇血癥的患病率為33.9%，血脂異常總患病率高達40.4%[1]。高脂血癥可引起動脈粥樣硬化、斑塊形成、血管狹窄，增加冠心病、腦梗死等心腦血管意外的發生，給人們的生命健康和經濟帶來嚴重的危害[2]。高脂血癥患者常用他汀類藥物治療。載脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）基因位于19號染色體，有E2、E3、E4 3種主要的異構體，分別由3個等位基因ε2、ε3、ε4編碼而成，組成 6種基因型：E2型（E2/2、E2/3）、E3型（E2/4、E3/3）、E4 型（E3/4、E4/4）[3-4]。目前發現 ApoE基因與阿爾茨海默病、冠心病、腦梗死等疾病有關。近年研究發現ApoE基因多態性與高脂血癥患者的血脂水平和他汀類降低膽固醇有關[5-7]。本研究旨在探討ApoE基因多態性與高脂血癥患者降脂療效的相關性，以指導臨床合理用藥。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2016年7月至2017年12月在溫州市人民醫院神經內科和心內科門診診斷為高脂血癥的患者 100例，其中男66例，女 34例；年齡 32～89（66.62±12.82）歲。高脂血癥診斷標準參照《中國成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）》[1]：（1）TC≥6.2mmol/L；（2）TG≥2.3mmol/L；（3）LDL-C≥4.1mmol/L；以上 3 項中符合一項即可。排除標準：（1）嚴重肝腎功能不全患者；（2）心腦血管疾病患者；（3）腫瘤患者；（4）糖尿病血糖控制欠佳者；（5）阿托伐他汀過敏的患者；（6）精神病患者。本研究經溫州市人民醫院醫學倫理委員會批準通過。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 患者每晚睡前口服阿托伐他汀（美國輝瑞制藥有限公司，20mg×7片）20mg降脂治療，治療 4周，服藥期間囑咐患者采用低脂飲食。

1.2.2 血液標本采集 治療前后分別于清晨空腹抽取患者外周靜脈血3ml用于血脂檢測；治療后同時再抽取外周靜脈血3ml，置于EDTA-K2抗凝管中，放入-20℃冰箱中冷凍保存，用于ApoE基因檢測。

1.2.3 血脂檢測 阿托伐他汀治療前后檢測患者血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平，計算LDL-C下降率，下降率＝（治療后－治療前）/治療前×100%。以LDL-C在治療前后下降率40%為界，分為他汀治療高療效組56例和他汀治療低療效組44例。他汀治療高療效組男38例，女 18 例；年齡 46～89（68.26±11.42）歲；其中合并高血壓10例，糖尿病15例，高血壓伴糖尿病5例。他汀治療低療效組男 28例，女 16例；年齡 32～84（64.78±12.96）歲；其中合并高血壓8例，糖尿病11例，高血壓伴糖尿病4例。兩組患者性別、年齡、合并高血壓、糖尿病比例等比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

1.2.4 ApoE基因檢測 采用實時熒光定量PCR法。樣本采用全血基因組提取試劑盒（批號：20180803，蘇州天隆生物科技有限公司）提取全基因組DNA，提取過程嚴格按照試劑盒操作說明書進行。提取DNA后用SMA-4000核酸濃度分析儀（美國Merinton公司）測定其濃度和純度（DNA 推薦濃度為 5～15ng/μl，吸光度 A260/280為 1.8～2.0），待測 DNA-20℃保存。取待測 DNA 2μl加至熒光定量PCR反應體系中，至7500熒光定量PCR儀（美國ABI公司）進行擴增，反應條件：37℃ 10min，95℃ 5min，95℃ 15s，62℃ 60s，采集熒光信號，40 個循環。根據FAM、VIC不同熒光通道采集不同ApoE基因型熒光信號，進行結果判讀。ApoE基因分型試劑盒購自武漢友芝友有限公司（批號：18092808）。

1.3 統計學處理 采用SPSS 23.0統計軟件。計量資料以表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數資料組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 高脂血癥患者ApoE基因分布 100例高脂血癥患者共檢出 E2/3、E2/4、E3/3、E3/4 4 種基因型，E2/2、E4/4 2種基因型未檢出。其中E3/3基因型66例（66.0%），E3/4基因型20例（20.0%），E2/3基因型 9例（9.0%），E2/4基因型 5例（5.0%）。ε2、ε3、ε4 3種等位基因檢出率：ε3 為 80.5%（161/200），ε4 為 12.5%（25/200），ε2 為7.0%（14/200）。

2.2 不同基因型高脂血癥患者血脂比較 將4種檢出的基因型分為 E2型（E2/3）9例、E3型（E2/4、E3/3）71例和E4型（E3/4）20例。因E3型樣本量最多，屬于大眾基因型，故E2型基因組、E4型基因組TC、TG、HDL-C、LDL-C均與E3型基因組進行比較。結果顯示，E2型基因組、E4型基因組TC、HDL-C、LDL-C水平與E3型基因組比較差異均有統計學意義（均P＜0.05），其中E4型基因組TC、LDL-C水平最高，而E2型基因組TC、LDL-C水平最低。E2型基因組、E4型基因組TG水平與E3型基因組比較差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表1。

表1 不同基因型高脂血癥患者血脂比較（mmol/L）

2.3 兩組患者ApoE基因型分布情況比較 他汀治療低療效組E3/3基因型檢出率低于他汀治療高療效組，E3/4基因型檢出率高于他汀治療高療效組，兩組比較差異均有統計學意義（均P＜0.05）；但兩組患者E2/3基因型和E2/4基因型比較差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表 2。

表2 兩組患者ApoE基因型分布情況比較[例（%）]

2.4 兩組患者ApoE等位基因分布情況比較 他汀治療低療效組ε3等位基因檢出率低于他汀治療高療效組，ε4等位基因檢出率高于他汀治療高療效組，兩組比較差異均有統計學意義（均P＜0.05）；但兩組患者ε2等位基因檢出率比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 兩組患者ApoE等位基因分布情況比較[例（%）]

3 討論

ApoE早在1973年被Shore等從極低密度脂蛋白（VLDL）中分離出來[8]，是由299個氨基酸組成的多肽鏈，其分子量為34 145。ApoE作為配體與LDL受體、ApoE受體結合，3種異構體的受體結合能力不同，ε4等位基因的ApoE與LDL受體親和力明顯高于ε2、ε3。肝臟攝入較多含ε4等位基因的ApoE，使乳糜微粒（CM）和VLDL殘粒代謝加速，提高肝細胞內游離膽固醇含量，通過負反饋調節降低肝細胞表面LDL-C受體數量，減緩LDL分解代謝，最終使血中CM、VLDL下降，TC、LDL-C升高，從而導致脂代謝紊亂[9-11]。

文獻表明ApoE基因頻率具有特征性分布，E3/3基因型檢出率最高，ε3等位基因在3種等位基因中分布最高[12]。本研究發現100例高脂血癥患者共檢出E2/3、E2/4、E3/3、E3/4 4種基因型，其中E3/3基因型檢出率為66.0%，E3/4基因型為20.0%，E2/3基因型為9.0%，E2/4基因型為 5.0%。ε2、ε3、ε4 3 種等位基因檢出率：ε3為80.5%，ε4為12.5%，ε2為7.0%，與國內大部分文獻報道的3個基因型分布比例大致相同[13-14]，細微差異可能與不同地區人群民族構成、飲食結構不同等因素有關。E2型基因組、E4型基因組與E3型基因組TC、HDL-C、LDL-C水平比較差異均有統計學意義，其中E4型基因組TC、LDL-C水平最高，而E2型基因組TC、LDL-C水平最低，結果與既往文獻報道[15]相符。本研究還發現不同ApoE基因型人群對他汀藥物的敏感性不同，E3/3基因型他汀治療效果好，E3/4基因型他汀治療效果差，且ε4等位基因在他汀治療低療效組檢出率高，擁有這個基因型的人群為了血脂達標，可能需要他汀加量或加用其他降脂類藥物比貝特類、煙酸類。

高脂血癥是引起動脈粥樣硬化的高危因素，而動脈粥樣硬化是導致冠心病、腦梗死等心腦血管意外發生的主要原因。ApoE基因是目前較熱門的研究對象，參與機體脂蛋白代謝，其多態性與高脂血癥密切相關。通過本研究進一步證實ApoE基因分布具有特異性，ApoE基因多態性與高脂血癥患者降脂療效相關性較大，同時還發現ε4等位基因影響阿托伐他汀降低血脂的效果，E3/4基因型他汀治療效果差。故臨床治療高脂血癥患者時需密切注意ApoE不同位點突變情況，對于他汀治療效果差的患者進行基因檢測明確基因型，E3/4基因型如果使用他汀類藥物降脂需要加量使用，治療期間需注意不良反應[16-17]，指導臨床合理用藥。