2017—2018年張家界市手足口病病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

田曉輝 劉晶晶 龔育平 張淳軼

[摘要] 目的 分析張家界市手足口病病原體構(gòu)成特征的變遷，為手足口病防控提供科學(xué)依據(jù)。方法 收集2017—2018年張家界市手足口病臨床診斷患者的咽拭子樣本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)手足口病毒核酸。結(jié)果 321份咽拭子標(biāo)本中，腸道病毒核酸總陽(yáng)性檢出率為34.89%（112/321），其中EV71檢出率為3.12%，CoxA16檢出率為10.90%，未分型腸道病毒檢出率為20.87%。2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高。病毒核酸陽(yáng)性標(biāo)本以<5歲兒童居多，占97.33%，男童陽(yáng)性檢出率高于女童（P<0.05）。結(jié)論 2017—2018年張家界市<5歲兒童為手足口病高發(fā)人群。各型別病毒感染同時(shí)存在，但引起流行的主要腸道病原體為未分型腸道病毒，應(yīng)加強(qiáng)手足口病的病原學(xué)檢測(cè)。

[關(guān)鍵詞] 手足口病;病原學(xué);腸道病毒核酸;實(shí)時(shí)熒光定量PCR

[中圖分類號(hào)] R725.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2019）05（c）-0160-03

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，主要通過消化道、呼吸道和密切接觸者等途徑傳播，好發(fā)于5歲以下兒童[1]。可引起手、足及口腔等部位的皰疹和發(fā)熱[2]，多數(shù)患兒一周自愈，少數(shù)可引起肺水腫、心肌炎和無(wú)菌性腦炎等并發(fā)癥[3]，重癥患者病情快易致死亡。引起手足口病的病毒有20多種，均屬微小核糖核酸病毒科，其中以CoxA16和EV71最為常見[4]。

為了了解張家界市手足口病患者的病原體特征，制定防控策略，該次對(duì)2017—2018年321例臨床診斷病人的咽拭子樣本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行EV71、CoxA16和腸道病毒的核酸檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析，有利于提出更好的預(yù)防控制措施。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1? 材料與方法

1.1? 研究材料

采集哨點(diǎn)醫(yī)院手足口病患者咽拭子標(biāo)本321份，采集后放入病毒采樣管內(nèi)，4℃保存并在12 h內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。

1.2? 儀器與試劑

ABI7300熒光定量PCR儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司），AUI001核酸提取儀（百泰克科技有限公司）。試劑：碩世生物科技股份有限公司的病毒核酸提取試劑盒（貨號(hào)：SDK60102），柯薩奇病毒A16型（CoxA16）、腸道病毒71型和腸道病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：JC20302）。

1.3? 方法

①參照試劑盒使用說(shuō)明書，使用自動(dòng)核酸提取儀提取病毒RNA。

②采用腸道病毒通用型、EV71和CoxA16核酸檢測(cè)試劑盒，使用熒光定量PCR法進(jìn)行核酸檢測(cè)，同時(shí)設(shè)置陰性、陽(yáng)性和空白對(duì)照。反應(yīng)條件為：50℃、30 min;95℃、5min;按照95℃ 10 s;55℃、40 s。

③結(jié)果以Ct值≤35為陽(yáng)性。EV71、CoxA16核酸測(cè)定分別陽(yáng)性時(shí)則分別判為EV71陽(yáng)性、Cox16陽(yáng)性;當(dāng)腸道病毒通用性核酸測(cè)定陽(yáng)性，而EV71和CoxA16核酸測(cè)定分別為陰性時(shí)則判為未分型腸道病毒陽(yáng)性。

④數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述和數(shù)據(jù)處理分析，組間計(jì)數(shù)資料的比較使用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2017—2018年采集手足口病患者咽拭子標(biāo)本321份，檢出陽(yáng)性樣本112份，檢出率為34.89%.其中EV71陽(yáng)性檢出率為3.12%，CoxA16陽(yáng)性檢出率為10.90%。見表1。

腸道病毒2018年總檢出率（38.61%）高于2017年總檢出率（31.29%）（P<0.05）;2018年未分型腸道病毒陽(yáng)性率（21.52%）高于2017年（20.25%）（P>0.05）;2018年CoxA16型腸道病毒陽(yáng)性率（13.29%）高于2017年（8.59%）（P>0.05）;2018年EV71型腸道病毒陽(yáng)性率（3.80%）高于2017年（2.45%）（P>0.05）;2018年未分型腸道病毒檢出率遠(yuǎn)高于EV71和CoxA16（P<0.05）;2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高。

2.2? 性別分布

321例病例中男童為172例，女童為149例，男女比例為1.15：1，病毒核酸陽(yáng)性數(shù)之比為1.38：1.男童總腸道病毒檢出率（37.79%）顯著高于女童（31.54%）（P<0.05），而EV71、CoxA16及未分型腸道病毒檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3? 年齡分布

實(shí)驗(yàn)室確診手足口病病例中，年齡最小的3個(gè)月，最大的11歲。實(shí)驗(yàn)室確診病例以1～3歲居多，陽(yáng)性構(gòu)成比為79.47%（表3）。

3? 討論

實(shí)時(shí)熒光定量PCR利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) PCR進(jìn)程中產(chǎn)物總量的方法，具有特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可用于感染性疾病的初篩，也可用于相關(guān)醫(yī)療機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)工作中的輔助手段[5]。

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)病毒快速、敏感的特點(diǎn)[6]，對(duì)張家界市321份手足口病病原標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示：2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高，由此可見引起張家界市手足口病流行的主要腸道病原體為未分型腸道病毒。結(jié)果顯示，所有報(bào)告病例中男性比例高于女性，與類似研究報(bào)道一致[7]。女童病例低于男童，可能與男童與人群接觸的機(jī)會(huì)多、不注重衛(wèi)生習(xí)慣和更為好動(dòng)等因素有關(guān)，因此需要幫助他們養(yǎng)成好的衛(wèi)生習(xí)慣和大力開展衛(wèi)生知識(shí)宣傳，從而切斷手足口病的發(fā)生和流行[8]。另外臨床診斷病例主要集于5歲以下兒童，需加強(qiáng)此類兒童病原學(xué)的檢測(cè)。

此次檢測(cè)，321份手足口病臨床確診病例咽拭子標(biāo)本EV陽(yáng)性檢出率僅為3.12%，比報(bào)道的陽(yáng)性檢出率偏低[9]，可能與標(biāo)本類型、試劑和采用方法等存在差異有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，糞便標(biāo)本與咽拭子標(biāo)本陽(yáng)性檢出率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[10，表現(xiàn)為咽拭子陽(yáng)性檢出率低。若條件允許，則采集糞便或肛拭子標(biāo)本，助于提高檢出率。

[參考文獻(xiàn)]

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[2]? 謝運(yùn)清，吳修鳳.2010-2013年棗莊市手足口病核酸檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015，25（5）：731-734.

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[10]? 于秋麗，申悅霞，韓彩芝，等.河北省年2009年手足口病病原學(xué)研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39（8）：2026-2031.

（收稿日期：2019-02-21）

[作者簡(jiǎn)介] 田曉輝（1971-），男，土家族，湖南張家界人，本科，副主任技師，主要從事實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理工作。