邵氏“五針法”對哮喘模型大鼠血清α-SMA及FN表達的影響

李真，邵素菊

(1.許昌市中醫院，河南 許昌 461000；2.河南中醫藥大學，河南 鄭州 450008)

支氣管哮喘是一種由多種炎癥細胞、結構細胞和細胞組分共同參與的氣道慢性過敏性炎癥疾病[1]。其特點是可逆的氣道阻塞性反應、間歇性氣道炎癥、氣道重塑和氣道高反應性。中醫治療哮喘具有安全經濟、療效確切等特點。

導師邵素菊教授繼承和發揚了其父邵經明教授在長期臨床基礎中總結出來的治療哮喘的獨特療法—邵氏“五針法”,療效顯著。在前期進行了多項實驗研究，但大多集中在哮喘的炎癥機制方面。氣道重塑是全氣道復雜改變的復合體，是哮喘慢性化、持續化、嚴重化的重要病理基礎。α-SMA和FN可調節氣道平滑肌收縮、遷移及生長，對細胞外基質沉積和上皮下纖維化具有重要作用，二者在哮喘氣道重塑過程中起著十分重要的作用。本研究通過對比針刺前后哮喘模型大鼠血清中α-SMA及FN表達的變化，觀察邵氏“五針法”改善哮喘氣道重塑的機制，為針刺治療哮喘提供更加科學的理論依據。

1 材料與方法

1.1 動物

河南省實驗動物中心提供40只清潔級健康雄性SD大鼠，體質量(140±20)g，在河南中醫藥大學動物實驗室進行飼養。

1.2 藥物及試劑

卵蛋白(OVA，美國Sigma公司，批號20140107)；地塞米松磷酸鈉注射液(規格1 mL：5 mg，江蘇連水制藥有限公司，批號1410112)；0.9%氯化鈉注射液(250 mL/瓶，山東魯抗辰新有限公司，批號1311144208)；氫氧化鋁干粉(白銀化學試劑廠，批號20130916)。α-SMA、FN的ELISA檢測試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司提供，批號20140120B)；4%多聚甲醛(北京鼎國生物技術有限責任公司，批號20131213)。

1.3 儀器設備

0.5寸30號一次性毫針(0.30 mm×15 mm,環球牌)；超低溫冰箱(SANYO公司)；超聲霧化器(上海福林醫療設備有限公司)；電子天平(廣州天平儀器廠)；生物顯微鏡BX41-32P0(日本奧林巴斯)。

1.4 實驗方法

先將大鼠適應性喂養1周，依據隨機數字表將大鼠分為每組10只，即針刺治療組、藥物治療組、空白對照組和模型對照組。依據文獻《肺臟免疫學及免疫相關性疾病》[2]方法建立大鼠哮喘模型。在實驗進行到第8天的時候開始對大鼠進行致敏，除了空白對照組采用生理鹽水腹腔注射外，其他各組均選取1 mL的10%復合OVA抗原溶液致敏。從致敏當天開始計算，第15天時進行哮喘激發，將大鼠放于封閉的霧化箱內，每日1次，用霧化器持續噴入1% OVA溶液(空白對照組用生理鹽水取代)20 min激發哮喘，共7次。藥物治療組：從致敏后第15天起，每日在激發實驗完成后，大鼠腹腔注射0.05%地塞米松磷酸鈉溶液，每日1次，共10次(在7次激發實驗完成后，繼續注射給藥3天)。針刺治療組：從致敏后第15天起，選取大鼠“肺俞(雙)”“大椎”“風門(雙)”穴，每日于激發實驗后針刺1次。采用平補平瀉法，留針30 min，每隔10 min行針1次，每日1次，共治療10次(7次激發實驗完成后，繼續針刺3天)。模型對照組適應性喂養1周后，按照上述造模方法進行造模。空白組用生理鹽水代替卵蛋白按照上述方法進行。

1.5 標本取材

最后一次治療后立即用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(0.35 mL/100 g)，脫頸椎處死大鼠后取眼球血，離心血清備用。取大鼠肺組織進行石蠟包埋，切片待用。

1.6 標本處理

切片組織進行HE染色，血清進行ELISA檢測。

1.7 統計學方法

2 結果

2.1 大鼠各組肺組織HE染色形態學觀察

結果見圖1～4。空白對照組：大鼠肺組織結構完整，氣道上皮完整、光滑，支氣管管腔規則，肺間質未見炎癥細胞，肺泡、肺泡間隔形態結構正常。模型對照組：氣道上皮水腫、脫落，支氣管管腔狹窄、變形，管腔內炎癥滲出物增多，黏膜下層和平滑肌層增生，肺間質大量炎癥細胞浸潤，肺泡間隔明顯增寬。藥物治療組：氣道上皮少量脫落，支氣管管腔形態基本正常，黏膜下層和平滑肌層輕度增生，肺間質少量炎癥細胞浸潤，肺泡間隔輕度增寬。針刺治療組：氣道上皮結構基本完整，支氣管管腔基本規則，黏膜下層和平滑肌層增生不顯著，肺間質炎癥細胞浸潤較少，肺泡及肺泡間隔結構基本正常。

圖1 空白對照組HE染色圖(10×20)

圖2 模型對照組HE染色圖(10×20)

圖3 藥物治療組HE染色圖(10×20)

圖4 針刺治療組HE染色圖(10×20)

2.2 血清結果α-SMA含量的表達

結果見表1。針刺治療組、模型對照組與空白對照組比較，大鼠血清中α-SMA濃度可見增高，差異具有統計學意義(P<0.01)；藥物治療組、針刺治療組與模型對照組比較，α-SMA濃度顯著降低，差異具有統計學意義(P<0.01)，但仍然高于空白對照組；針刺治療組與藥物治療組比較，α-SMA濃度有所下降，差異具有統計學意義(P=0.000<0.01)；四組對比，F=121.431，P=0.000<0.01。

2.3 血清FN含量的表達

結果見表2。針刺治療組、模型對照組與空白對照組比較，大鼠血清中FN濃度可見增高，差異具有統計學意義(P<0.01)；藥物治療組、針刺治療組與模型對照組比較，FN濃度顯著降低，差異具有統計學意義(P<0.01)，但仍然高于空白對照組；針刺治療組與藥物治療組比較，FN濃度有所下降，差異具有統計學意義(P=0.000<0.01)；四組對比，F=97.357，P=0.000<0.01。

表1 大鼠各組血清中α-SMA含量的比較

注：與空白對照組比較，☆P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.01；與藥物治療組比較，▲P<0.01。

表2 大鼠各組血清中FN含量的比較

注：與空白對照組比較，☆P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.01；與藥物治療組比較，▲P<0.01。

3 討論

哮喘是一種氣道慢性過敏性炎癥疾病，多種炎癥細胞、結構細胞和細胞組分參與其中。既往研究認為，炎癥細胞浸潤、炎癥介質的釋放是哮喘發生、發展的中心環節，但近年來研究發現，氣道重塑作為哮喘慢性化、持續化、嚴重化的重要病理基礎，對哮喘的發生、發展具有不可忽視的重要作用[3-4]。氣道重塑可以導致呼氣期為主的通氣功能障礙加重，氣流阻塞的可逆性減小，肺內殘氣量增加，從而激發和加重哮喘的癥狀[5-6]。

哮喘氣道重塑包括全氣道所有復雜的結構改變，其主要病理改變不僅只有氣道平滑肌的增生和肥大，還包括上皮下纖維化，管腔狹窄，氣道壁增厚，黏膜肥厚，細胞外基質沉積，肌成纖維細胞增生，炎癥的細胞浸潤等[7-8]。這種復雜的氣道結構重塑會進一步加重氣流受限及氣道高反應性和氣道炎癥，而且還會加速肺功能的損害。

α-SMA是平滑肌細胞的特征性標記物，同時也是氣道最主要的結構及收縮蛋白，可以調節氣道平滑肌細胞的收縮、遷移和生長[9]。FN可調節細胞生長、遷移、分化和細胞外基質沉積及上皮下纖維化[10]，參與了哮喘氣道炎癥損傷的修復和應激反應。二者均在哮喘的氣道結構重塑過程中起重大作用。本研究通過觀察針刺前后哮喘模型大鼠肺組織形態學改變及血清中α-SMA和FN表達的變化，探討邵氏“五針法”對哮喘氣道重塑的作用途徑，以及針刺治療哮喘的作用機制。結果藥物治療組及針刺治療組大鼠肺組織結構基本完整，支氣管管腔及氣道基本規則，肺泡及肺泡間隔結構基本正常，肺間質炎癥浸潤細胞較少。說明藥物或針刺治療均能有效改善哮喘大鼠肺組織的炎癥浸潤及其對肺組織結構的破壞，但與空白對照組對比，仍存在炎癥及氣道和肺間質結構破壞的病理表現，兩種治療方法治療哮喘療效肯定，但均未達到治愈的水平。邵氏“五針法”能明顯降低哮喘模型血清中α-SMA及FN的陽性表達，改善氣道重塑及氣道炎癥，這可能是邵氏“五針法”治療哮喘的作用機制之一。