催產素受體在腸易激綜合征患者中的表達研究*

陳俊杰，楊長青，張曉俊，柯少雄，盛淑婷，宋亮，王春蘭，魏子白

（1.長治醫學院附屬和平醫院 消化內科，山西 長治 046000；2.長治衛生學校附屬醫院病理科，山西 長治 046099）

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome,IBS），是常見的功能性腸道疾病，IBS患者占消化科門診的30%～50%。該病癥狀為腹痛、腹部不適伴排便或排便習慣改變等，腹痛是IBS患者最突出的癥狀，影響患者的生活質量和工作效率。多數研究認為內臟高敏感在IBS的發病中起重要作用。最近有研究發現，催產素（Oxytocin,OT）/催產素受體（oxytocin receptor,OTR）信號在內臟高敏感中起重要作用[1-2]，但其機制未明確。本實驗對IBS患者腸道黏膜OTR的表達進行檢測，以探討OTR與IBS的相關性。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2017年7～11月長治醫學院附屬和平醫院消化內科門診IBS患者27例為實驗組，另選取同期體檢健康者14例作為對照組。IBS患者符合羅馬Ⅳ診斷標準[3]，實驗組納入標準：①年齡18～65歲；②血尿便常規檢查無明顯異常；③腹部超聲、結腸鏡檢查無異常。排除標準：①合并有其他疾??；②腹部手術史；③近1個月內連續使用抗生素超過3 d；④近2周內連續服用益生菌、通便藥、止瀉藥、促動力藥超過3 d；⑤月經期、妊娠或哺乳期婦女。對照組排除標準：①有IBS腹部手術史；②近1個月內曾連續使用抗生素超過3 d；③近2周內連續服用益生菌、通便藥、止瀉藥、促動力藥超過3 d；④月經期、妊娠或哺乳期婦女。對照組性別、年齡、生活環境等基本情況均與實驗組相匹配。研究經本院醫學倫理委員會審核批準，所有研究對象在參加本實驗之前均知情并簽署知情同意書。

1.2 標本的收集

結腸鏡下活檢距肛門口20～25 cm處鉗取結腸組織1塊，置于90%乙醇固定，石蠟包埋，保存。

1.3 IBS分型、癥狀嚴重度、伴隨心理異常評估

根據IBS患者糞便性狀將實驗組分為IBS腹瀉型（irritable bowel syndrome with diarrhea）組（IBS-D 組）、IBS 不 定 型（irritable bowel syndrome unclassified） 組（IBS-U組）。所有IBS患者填寫IBS病情嚴重程度調查表（IBS-SSS表）和醫院焦慮/抑郁情緒測定表（HAD量表），HAD量表得分＞8分為伴隨心理異常。

1.4 免疫組織化學染色和結果判定

免疫組織化學染色：①脫蠟、水化；②PBS洗3次各5 min；③用蒸餾水配制新鮮的3%過氧化氫H2O2，37℃封閉 10 min，用蒸餾水洗 3 次各 5 min ；④高壓法抗原修復；⑤PBS洗3次各5 min；⑥滴加正常胎牛清封閉液，37℃封閉20 min，甩去多余液體；⑦滴加稀釋Ⅰ抗（艾博抗AB87312 1∶250）50 μl，4℃過夜；⑧37℃復溫30 min，PBS洗3次各5 min；⑨滴加生物素化Ⅱ抗（1∶250），37℃孵育20 min；⑩PBS洗3次各5 min。DAB顯色：①滴加顯色液，室溫顯色，反應至顯微鏡下可見棕褐色顆粒為止，蒸餾水終止反應；②蘇木精-伊紅復染8 min，流水沖洗；③脫水、透明、封片、鏡檢。光學顯微鏡下，OTR在細胞質中呈棕黃色顆粒狀染色，無背景著色。細胞著棕黃色顆?；蚓€網狀為陽性細胞。每張切片選取視野清晰的5個不重復的高倍物鏡視野（×400），運用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件進行分析，計算光密度值并取均值進行定量分析。

1.5 統計學方法

數據分析采用SPSS 17.0統計軟件。計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組比較采用獨立樣本t檢驗，3組比較采用方差分析；計數資料以例表示，比較采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基本情況

實驗組27例。其中，男性12例，女性15例；IBS-D組15例，IBS-U組12例；平均年齡（47±11）歲。對照組14例。其中，男性7例，女性7例；平均年齡（47±12）歲。IBS-D組、IBS-U組、對照組3組年齡與性別構成比較，差異無統計學意義（F=-0.239，P=0.813；χ2=0.114，P=0.754）。IBS-D 組與 IBS-U 組兩組年齡、性別、病情嚴重度調查表（IBS-SSS）評分、合并精神癥狀比例比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 結腸黏膜OTR表達情況

所有活檢結腸標本中均可見OTR免疫反應陽性著色細胞（見圖1）。對照組結腸黏膜平均光密度值為（0.110±0.026），IBS-D結腸黏膜平均光密度值為（0.158±0.034），IBS-U組結腸黏膜平均光密度值為（0.163±0.035），3組比較，差異有統計學意義（F=10.996，P =0.000），IBS-U 組和 IBS-U 高于對照組（t=-4.201 和 -4.400，均P =0.000），IBS-D 組與IBS-U組兩組比較，差異無統計學意義（t=-0.337，P=0.739）。見圖1、2。

表1 IBS-D組與IBS-U組基本情況比較

2.3 OTR表達與IBS-SSS、精神癥狀的相關性

實驗組結腸黏膜OTR表達與IBS-SSS無相關性（r=0.160，P＞0.05）；與精神癥狀無相關性（r=-0.038，P＞0.05）。

圖1 OTR在各組結腸黏膜中的表達 （×400）

圖2 各組OTR蛋白含量的比較 （±s）

3 討論

目前認為IBS發病機制涉及內臟高敏感、腸道菌群紊亂，腦-腸軸功能失調等多個環節。研究發現內臟高敏感性是IBS的特征性病理生理機制[4]。

OT是由9個氨基酸構成肽的類激素，在分娩和哺乳期作用眾所周知，在中樞和外周的廣泛作用如性、母性行為、社交、信任和炎癥調節已被公認[5]。OTR的編碼屬于G蛋白耦聯受體家族，通過激活磷脂酶c發揮作用。OTR分布廣泛，除中樞神經系統，在外周OTR存在于乳腺、子宮肌層內的子宮內膜和子宮內膜。OTR也被發現腎臟、心臟、脂肪細胞、胰腺和胸腺。此外，近來研究發現，OTR在腸內神經細胞、黏膜下神經細胞、上皮細胞和腸黏膜下層均有表達[6-7]。

目前發現OT/OTR信號在胃腸運動、感覺、腸道炎癥、腸黏膜通透性的維護方面均有生理意義[7-8]。研究顯示，外周注射OT可降低動物模型的內臟高敏感，應用OT可減少應激誘導的膀胱過敏[9]和三硝基苯磺酸（TNBS）誘導的結腸高敏感[10]。OT類似物對慢性腹痛小鼠具有鎮痛特性[11]?？傊?，OT可以調節人或動物的內臟高敏感。

ARAUJO等[11]研究表明，OTR在慢性內臟痛大鼠模型背根神經節表達明顯高于對照組大鼠，GONG等[10]發現在人和大鼠腸道黏膜的肥大細胞都有OTR表達，并且在內臟高敏感中起重要作用。此外有研究表明，應用阿托西班（OTR受體拮抗劑）可以增強對母嬰分離大鼠模型內臟高敏感性恢復，且發現OTR在母嬰分離的大鼠結腸表達上調[11]。

本研究結果發現，OTR在IBS患者的結腸黏膜表達上調，證實OTR可能參與IBS內臟高敏感的形成，與IBS存在聯系。進一步分析發現，OTR在結腸黏膜表達在IBS亞型之間無差異，OTR表達上調與IBS-SSS無相關。這可能是由于IBS發病機制的多元性，從而導致本研究結果中OTR的表達與IBS-SSS無相關。有研究表明僅中樞釋放的OT具有抗焦慮和抗應激作用，外周OT并無此作用[12]，本研究發現IBS患者結腸黏膜OTR表達上調與IBS患者合并心理癥狀無關，該結果進一步驗證此結論。但目前許多研究發現外周OTR可以降低內臟高敏感，GONG等[10]發現OT可作用于肥大細胞OTR抑制Ca2+-NOS通路、抑制肥大細胞的活化和脫顆粒、減輕內臟高敏感。XU等[13]研究發現，外源性OT可作用于神經膠質細胞OTR調節TLR4/MyD88/NF-κB信號通路抑制母嬰分離大鼠的內臟高敏感。還有研究發現催產素通過作用于OTR激活腸神經中氮能神經元中的nNOS促進NO釋放，NO擴散到脊髓腸系膜神經纖維打開KATP通道，下調大鼠腸系膜傳入神經的敏感性，從而降低內臟高感[14]。總之本研究證實OTR與IBS有一定關聯，但OTR與IBS之間存在怎樣關系仍有待進一步研究。