造成石蠟制片污染的可能因素

劉天民 童玲玲

制作一張高質量的石蠟切片是一個多步驟，多因素的過程。造成石蠟制片污染的因素主要分為兩大類：組織的污染和試劑的污染，以及人為的因素。本文主要根據石蠟制片的步驟，總結歸納可能出現污染的情況。

1.取材

活體新鮮組織離體后，應立即放人10%中性福爾馬林中固定，送至病理科。組織送到后，專門人員應將組織標本與送檢單一一對應，核對病人的基本信息，送檢組織，若有不符，病理科有權拒收，待J臨床科室更正后再次接受，并將每日接受的標本進行登記。病理科標本的接收核對是活檢組織處理的第一步，也是關鍵之一，如果一旦核對有誤，將出現嚴重而不可挽回的后果。

對于某些較小或者較碎的組織，如診刮的子宮內膜組織、門診活檢的破碎宮頸組織等，取材時應將組織包在擦鏡紙里，以免掉出包埋盒。對于某些體積過大的組織，如胎盤組織等，需固定至第二天才取材，待標本核對結束后，一定要重新粘貼標本袋上的標簽，以免因福爾馬林水溶液將標本簽打濕，造成字跡不清楚，無法確認標本的來源。

每次完成一個標本的取材后，一定要對取材用的工具，如刀，鑷子，剪刀，取材板，直尺等用流水沖洗，保證不會將第一次取材的組織帶人第二次取材。取材的大小以1.5cm×1.5cm×（0.2-0.3）cm為宜，過大過厚脫水較軟，切片易破碎，過小組織脫水較硬，切片易出現橫紋。取材的合格與否直接影響后續組織的固定、脫水、透明、浸蠟及制片。

2.脫水機處理

取材完成后，組織放人全自動脫水機中處理，主要包括組織的固定、脫水、透明。取材結束，須確保每個包埋盒的蓋子已蓋緊，以免組織在脫水機處理過程中掉出。脫水機中的甲醛，二甲苯，梯度酒精，液體石蠟，清洗試劑需及時更換，一方面保證脫水機每日的正常運行，另一方面確保不因試劑的污染而造成組織的污染。

3.包埋

包埋的原則需遵循打開一個脫水盒，包埋一個組織，杜絕一次性打開多個脫水盒的現象，以免組織掉落或不慎掉人下一個包埋盒中。包埋過程的污染主要來源于組織的污染，在相鄰組織塊之間，完成一次包埋后需要將鑷子擦拭干凈，或者直接將鑷子插入包埋機的專屬鑷子加熱孔中，多把鑷子交替使用，以免上一個組織被人為帶入下一個組織中。如包埋診刮的子宮內膜組織，由于是破碎組織，一方面鑷子上很容易粘連，另一方面組織易懸浮于底蠟中，需要及時將組織靠壓在一起。對于管狀結構的組織，如輸卵管、臍帶等，管狀面與包埋面垂直，按“品”型包埋;對于皮紙組織，如外陰等，包埋面必須與表明垂直，這樣才能包埋皮膚的各層結構都能被看觀察。

4.凍塊

石蠟組織完成包埋，制作成組織塊后，需放入一4℃冷凍一段時間，易于切片。在凍塊過程中，將一個病理號的每個組織按取材小號依次放置，方便后續切片。

5.切片

切片時，先核對玻片上的病理號與蠟塊組織上的病理號是否一致，保證相同無誤的前體下，再行切片。切片時，首先要保證毛筆刷、鑷子干凈，無污染物，尤其是一些含血凝塊較多的組織，在切片時容易產生大量細小的碎屑，進而影響下一個蠟塊的切片。此外，在分片時，一定要注意鑷子上污染物不能掉入切片上。

展片時，需用硬紙將水面上漂浮的多余組織打撈干凈，尤其對于脂肪組織等這類在水中極易散開的切片，以防污染。若相鄰的蠟塊是同一類型的組織，可能就會無法識別。每日完成切片工作后，需將水浴缸清洗。

6.HE染色

HE染色污染主要是試劑的污染，如常見的蘇木精沉查。蘇木精被氧化后在染液表面會形成氧化膜以及在媒染劑的作用下形成的氧化鋁結晶，在進行蘇木素上色時，容易黏附在切片上，尤其是含黏液較多的組織。所以，除了定時更換或過濾蘇木素，每日染色前需將蘇木素表層的氧化膜打撈干凈，再行染色。此外，若出現某些切片烤片不當，組織掉落在染色試劑中，也可能會造成污染。

7.裱片

裱片時采用的中性樹膠的濃度要實驗，太濃膠水不易散開，太淡容易出現氣泡且溢出。此外，裱片時一定要使膠水全部覆蓋組織，尤其是某些鈣化或含有顆粒體的組織時，由于該類組織表面不平整，易出現大氣泡，膠水擴散不均勻。

8.核對

在日常工作中，核對會花耗大量的時間，核對是制片的最后一步，也是關鍵步驟。處理上述在切片時核對蠟塊跟玻片的一致性，染色完成后需核對切片與取材記錄時的數目是否一致。

9.保存

門診標本需保存15年，住院標本需保存30年，所以每日的石蠟塊切片完畢后，需要及時的進行封塊，以免組織暴露在空氣中被氧化。封塊時一定要注意時間，尤其是一些極小的組織，動作要快，避免蠟塊融化組織掉出。

綜上，從組織送檢至病理科開始，就應該嚴格的按照規范流程操作，重視每一個操作步驟。在實際工作中，每日的切片量較大時，在保證制片質量的前體下，需合理分配時間，秉承認真負責的態度，稍有一個環節出現差錯，就會影響整體效果造成污染，影響最終的病理診斷。

通訊作者：童玲玲。