shRNA干擾BAMBI對(duì)非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)、侵襲和遷移的調(diào)控作用①

王學(xué)中 劉志廣 劉 平

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院胸瘤一科，新鄉(xiāng)453003)

原發(fā)性肺癌是常見的惡性腫瘤之一，是發(fā)病率和死亡率最高的癌癥。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年新增肺癌病例約為180萬(wàn)，死亡人數(shù)約為1.5萬(wàn)。肺癌可以分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，其中非小細(xì)胞肺癌約占肺癌的80%～85%[1]。非小細(xì)胞肺癌病情發(fā)展迅速，轉(zhuǎn)移速度快，大部分患者在確診時(shí)已發(fā)展至中晚期，導(dǎo)致患者手術(shù)治療機(jī)會(huì)減少且術(shù)后復(fù)發(fā)率高[2,3]。由于非小細(xì)胞肺癌對(duì)放療和化療不敏感，使患者5年生存率低，處于Ⅲ期和Ⅳ期的患者5年生存率低于10%。為提高治療效果，增加患者生存時(shí)間，研究有效的治療手段有著重要的臨床意義。小發(fā)夾RNA(small hairpin RNA,shRNA)是序列特異性誘導(dǎo)細(xì)胞基因表達(dá)沉默的RNA干擾技術(shù)，具有抑制效率高、作用時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)，廣泛用于基因功能、腫瘤治療的研究當(dāng)中[4]。骨形成蛋白和激活素的穿膜抑制劑(Bone morphogenetic protein and activin membrane-bound inhibitor,BAMBI)是與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β家族1型受體相關(guān)的跨膜糖蛋白，參與多種與細(xì)胞發(fā)育和疾病相關(guān)的過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)BAMBI能促進(jìn)乳腺癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種腫瘤的發(fā)展[5-7]，但BAMBI在非小細(xì)胞肺癌中的功能和作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本文研究shRNA干擾BAMBI細(xì)胞后對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲和遷移的影響及其調(diào)控機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞株購(gòu)自美國(guó)ATCC公司；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清和0.25%胰酶均購(gòu)自Hyclone公司；BAMBI-shRNA載體和shRNA Scramble購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)公司；RNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技；TurboFect Transfection Regent脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自Thermo Fisher Scientific；CCK-8購(gòu)自日本同仁化學(xué)產(chǎn)品；Ki67、Bax、VEGF、MMP-9、TGF-β、cl-caspase-3、Smad2和p-Smad2抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；Transwell小室和人工基底膜購(gòu)自美國(guó)BD公司產(chǎn)品。BALB/c裸鼠，4～6周，(18±2)g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、Annexin V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒、TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒、免疫組化試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；引物使用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 非小細(xì)胞肺癌A549的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染 取A549細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為37℃、5%CO2。當(dāng)單層細(xì)胞覆蓋率達(dá)90%左右時(shí)傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)50%左右時(shí)，shRNA和Lipofectamin2000按照比例充分混勻，滴加到細(xì)胞培養(yǎng)液中，混合均勻后繼續(xù)培養(yǎng)，利用相應(yīng)抗生素篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 qRT-PCR 根據(jù)RNA提取試劑盒說(shuō)明書提取各組細(xì)胞中的總RNA，使用Nanodrop2000檢測(cè)RNA的濃度，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。取1 μg RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，反轉(zhuǎn)錄完成后取20 ng產(chǎn)物進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。程序設(shè)置如下：94℃反應(yīng)4 min，隨后94℃ 30 s、60℃ 30 s、72℃ 30 s共40個(gè)循環(huán)。檢測(cè)DNA濃度，使用SDS1.3分析相對(duì)表達(dá)水平。BAMBI正向引物為：5′-CTAGAGAAGCAGGCGCT-GAG-3′；反向引物為：5′-ATCGCCACTCCAGCTA-CATC-3′。

1.2.3 蛋白質(zhì)印跡 收集細(xì)胞，PBS洗3次后，使用含蛋白酶抑制劑的細(xì)胞裂解液冰上充分裂解，4℃離心機(jī)中以15 000 r/min離心15 min，上清即為總蛋白。BCA法測(cè)蛋白濃度后，加蛋白上樣緩沖液制作蛋白樣品。每孔加30 μg蛋白樣品使用12%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，隨后轉(zhuǎn)至PVDF膜。用5%脫脂牛奶的TBST室溫下封閉2 h。4℃孵育一抗過(guò)夜，TBST洗膜3次，每次10 min；加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫下孵育1 h，TBST洗膜3次，每次10 min；使用Bio-Rad成像系統(tǒng)檢測(cè)成像并分析蛋白條帶灰度值，以GAPDH作為內(nèi)參。

1.2.4 CCK-8 用胰酶將細(xì)胞消化為單細(xì)胞懸液，離心收集，將細(xì)胞的濃度調(diào)整為5×104個(gè)/ml，取100 μl細(xì)胞懸液至培養(yǎng)孔中，設(shè)置空白對(duì)照組，每組細(xì)胞設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，預(yù)培養(yǎng)24、48、72、96 h后，向每孔中加10 μl的CCK-8溶液，培養(yǎng)箱中孵育2 h，酶標(biāo)儀下檢測(cè)490 nm處的吸光度。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù) 收集細(xì)胞，以1 000 r/min離心5 min，棄培養(yǎng)基后用PBS洗3次，用1×Binding 緩沖液制成1×107個(gè)/ml細(xì)胞懸液。取100 μl細(xì)胞懸液，加2 μl Annexin-V-FITC，輕輕搖勻，冰上避光放置15 min；轉(zhuǎn)移至流式檢測(cè)管，加入400 μl PBS，每個(gè)樣品上機(jī)前加1 μl PI(50 μg/ml)。以不加Annexin-V-FITC及PI的樣本作為陰性對(duì)照。

1.2.6 劃痕實(shí)驗(yàn) 取轉(zhuǎn)染后24 h的A549細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106個(gè)/ml，每孔中加2 ml細(xì)胞懸液，培養(yǎng)箱中過(guò)夜待細(xì)胞貼壁。當(dāng)單層細(xì)胞覆蓋率達(dá)90%左右時(shí)，用10 μl槍尖垂直于培養(yǎng)板平行劃5道直線，PBS洗3次以清除細(xì)胞碎片。加無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h。倒置顯微鏡下觀察0 h和24 h時(shí)劃痕閉合情況并拍照，使用Image J分析計(jì)算劃痕閉合率。劃痕閉合率%=[(0 h劃痕面積-24 h劃痕面積)/(0 h 劃痕面積)]×100%。

1.2.7 體外侵襲實(shí)驗(yàn) 將shRNA BAMBI和shRNA scramble轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，24 h后收集細(xì)胞做體外侵襲實(shí)驗(yàn)。無(wú)血清培養(yǎng)基與Matrigel按照6∶1混勻，取100 μl至上室，37℃孵育至基質(zhì)膠變?yōu)楣虘B(tài)。胰酶消化細(xì)胞，用PBS洗2次，無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋至細(xì)胞濃度為1×105個(gè)/ml，取200 μl細(xì)胞懸液至上室，下室中加500 μl含10%胎牛血清的培養(yǎng)基。正常條件下培養(yǎng)24 h后，用棉簽擦取上層細(xì)胞，染色后隨機(jī)選擇5個(gè)視野觀察并計(jì)數(shù)。

1.2.8 荷瘤裸鼠的分組和處理 將30只雄性裸鼠分為A549組、Scramble組和BAMBI shRNA組，每組10只。取各組細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至2×107個(gè)/ml，接種于各組裸鼠背部。每隔5 d測(cè)腫瘤體積，接種后20 d處死裸鼠。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中A549 組有4只裸鼠死亡，Scramble組出現(xiàn)3只死亡，BAMBI shRNA組有1只出現(xiàn)死亡。

1.2.9 TUNEL染色 取腫瘤組織，制作石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水；切片浸入0.1 mol/L pH6.0檸檬酸緩沖液中，微波爐中處理5 min，PBS洗2次；加反應(yīng)液至濕盒中37℃暗反應(yīng)1 h，PBS洗3次；玻片干后加POD至切片上，濕盒中37℃反應(yīng)30 min，PBS洗3次；加DAB室溫下反應(yīng)10 min后，復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。光學(xué)顯微鏡下觀察并隨機(jī)選擇5個(gè)視野拍照，使用Image J分析。

1.2.10 免疫組化 取部分腫瘤組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。3%過(guò)氧化氫于室溫下孵育10 min；切片置于枸櫞酸鹽緩沖液中，95℃左右持續(xù)10 min后室溫冷卻；PBS洗3次，5%BSA封閉液37℃孵育30 min；滴加一抗，37℃孵育1 h；PBS洗3次；加生物素標(biāo)記的抗體，37℃孵育30 min；PBS洗3 次，加SABC，37℃孵育30 min；PBS洗3次，顯微鏡下顯色并控制反應(yīng)時(shí)間，蘇木素復(fù)染后脫水透明，中性樹膠封片。使用軟件Image J分析陽(yáng)性細(xì)胞占比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析。以P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 shRNA對(duì)BAMBI mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響 將shRNA載體轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞后，qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中BAMBI mRNA的表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Scramble組BAMBI的mRNA水平與A549組相比，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；shRNA BAMBI組BAMBI的mRNA表達(dá)水平明顯低于Scramble組(圖1A，P<0.01)。Western blot結(jié)果也顯示，Scramble組BAMBI蛋白表達(dá)水平與A549組相比，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；shRNA BAMBI組的BAMBI蛋白表達(dá)明顯低于Scramble組(圖1B，P<0.01)。說(shuō)明shRNA空載不影響B(tài)AMBI的mRNA和蛋白表達(dá)；shRNA BAMBI成功干擾A549細(xì)胞中BAMBI的mRNA和蛋白的表達(dá)。

2.2 干擾BAMBI抑制A549細(xì)胞的增殖 CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染4 d后shRNA BAMIBI組細(xì)胞增殖倍數(shù)明顯低于Scramble組(圖2，P<0.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明shRNA干擾BAMBI能降低非小細(xì)胞肺癌A549的增殖能力。

2.3 干擾BAMBI誘導(dǎo)A549細(xì)胞的凋亡 在轉(zhuǎn)染BAMBI-shRNA后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，shRNA BAMBI組細(xì)胞凋亡的比率明顯高于Scramble組(圖3，P<0.01)，結(jié)果表明shRNA干擾BAMBI可誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞凋亡。

2.4 干擾BAMBI抑制A549細(xì)胞遷移 劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，shRNA BAMBI組劃痕愈合率明顯低于Scramble組(圖4，P<0.01)，表明shRNA干擾BAMBI抑制非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的遷移。

圖1 shRNA干擾后A549細(xì)胞中BAMBI mRNA和蛋白的表達(dá)水平Fig.1 mRNA and protein expression level of BAMBI in A549 cells after shRNA interferenceNote: A.qRT-PCR detection result；B.Western blot detection result；**.P<0.01 versus scramble group；n=3.

圖2 CCK-8檢測(cè)shRNA干擾BAMBI對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響Fig.2 Effect of shRNA interfering BAMBI on proliferat-ion of A549 cells was detected by CCK-8Note: **.P<0.01 versus scramble group；n=3.

2.5 干擾BAMBI抑制A549細(xì)胞侵襲 體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的侵襲能力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，shRNA BAMBI組平均每個(gè)視野下發(fā)生侵襲的細(xì)胞數(shù)目明顯少于Scramble組(圖5，P<0.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明shRNA干擾BAMBI可抑制非小細(xì)胞肺癌A549的侵襲能力。

2.6 干擾BAMBI對(duì)增殖、凋亡、遷移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中增殖、凋亡和遷移相關(guān)蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，shRNA BAMBI組與Scramble組相比，細(xì)胞中Ki67、VEGF和MMP-9的表達(dá)水平顯著降低，而Bax和cl-caspase-3的表達(dá)水平顯著升高(圖6，P<0.01)。

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)shRNA干擾BAMBI對(duì)A549細(xì)胞凋亡的影響

Fig.3 Effect of shRNA interfering BAMBI on apoptosis of A549 cells was detected by flow cytometry

Note: **.P<0.01 versus scramble group；n=3.

圖4 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)shRNA干擾BAMBI對(duì)A549細(xì)胞遷移的影響

Fig.4 Effect of shRNA interfering BAMBI on migration of A549 cells was examined by wound healing

Note: **.P<0.01 versus scramble group；n=3.

2.7 干擾BAMBI激活TGF-β通路 實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究shRNA干擾BAMBI后非小細(xì)胞肺癌A549生物學(xué)特性發(fā)生改變的潛在分子機(jī)制，Western blot檢測(cè)TGF-β通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，shRNA BAMBI組細(xì)胞中TGF-β和p-Smad2的表達(dá)水平顯著高于Scramble組，且細(xì)胞中p-Smad2/Smad2的比值明顯升高(圖7，P<0.01)。可見shRNA干擾BAMBI后增強(qiáng)TGF-β的表達(dá)，提高Smad2的磷酸化水平，進(jìn)而激活TGF-β信號(hào)通路。

2.8 shRNA干擾BAMBI對(duì)A549移植瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響 結(jié)果顯示，與Scramble組相比，shRNA BAMBI組移植瘤體積明顯降低，腫瘤組織中BAMBI mRNA表達(dá)水平降低，凋亡細(xì)胞明顯增加，VEGF的表達(dá)水平顯著降低(圖8，P<0.01)。

圖5 體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)shRNA干擾BAMBI對(duì)A549細(xì)胞侵襲的影響

Fig.5 Effect of shRNA interfering BAMBI on invasion of A549 cells was measured by transwell

Note: **.P<0.01 versus scramble group；n=3.

圖6 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)增殖、凋亡和遷移相關(guān)蛋白的表達(dá)水平Fig.6 Expression of proliferation,apoptosis and migrat-ion related proteins were detected by Western blotNote: **.P<0.01 versus scramble group；n=3.

圖7 shRNA干擾BAMBI對(duì)TGF-β通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Fig.7 Effect of shRNA interfering BAMBI on expression of TGF-β pathway related proteinsNote: **.P<0.01 versus scramble group；n=3.

圖8 shRNA干擾BAMBI后對(duì)A549移植瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響Fig.8 Effect of shRNA interference with BAMBI on growth and metastasis of A549 transplanted tumorNote: A.Tumor volume；B.Relative mRNA level of BAMBI；C.TUNEL staining(×400)；D.Immunological histological chemistry(×400)；**.P<0.01 versus scramble group；n=6.

3 討論

BAMBI與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子受體胞外結(jié)合區(qū)的結(jié)構(gòu)相似，能同TGF-β受體(TβR)-Ⅰ競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合TβR-Ⅱ，由于BAMBI缺乏胞內(nèi)的絲氨酸/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，無(wú)法磷酸化胞內(nèi)的Smad蛋白，使TGF-β通路受阻。在卵巢癌細(xì)胞中高表達(dá)BAMBI可顯著增加細(xì)胞的增殖和遷移能力，抑制細(xì)胞的凋亡[8]。研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、胰腺癌等腫瘤組織中BAMBI呈現(xiàn)高表達(dá)[9,10]。苗參等[11]檢測(cè)臨床非小細(xì)胞肺癌腫瘤組織樣本，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中BAMBI的mRNA水平和蛋白水平均顯著高于周圍正常組織，提示BAMBI的過(guò)表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生相關(guān)。

shRNA抑制非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移已有大量報(bào)道，如shRNA干擾Cyclin D1和Bcl-2抑制非小細(xì)胞肺癌增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]；組蛋白去乙酰化酶1(Histone deacetylase 1，HDAC1)經(jīng)shRNA干擾后，抑制非小細(xì)胞肺癌的侵襲[13]。A549細(xì)胞在轉(zhuǎn)染shRNA BAMBI后，細(xì)胞中BAMBI的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低，提示shRNA BAMBI轉(zhuǎn)染成功，并且具有較高的干擾效果。接下來(lái)探討B(tài)AMBI經(jīng)shRNA干擾后對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549生物學(xué)特性的影響。

腫瘤的發(fā)生是多階段、多基因協(xié)同作用的復(fù)雜過(guò)程，細(xì)胞增殖和凋亡異常使腫瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖的能力。miRNA使BAMBI下調(diào)后,黑色素瘤小鼠腫瘤組織中細(xì)胞增殖能力降低，而細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯增加[14]。本文研究結(jié)果顯示，shRNA干擾BAMBI后，A549細(xì)胞增殖倍數(shù)顯著降低，而凋亡細(xì)胞的比率顯著升高。腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)受細(xì)胞增殖和凋亡的共同影響。Ki67是存在于增殖細(xì)胞的核抗原，常用于檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖能力。Bax是Bcl-2家族中重要的促凋亡蛋白，在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中Bax低表達(dá)，而且Bax的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后密切相關(guān)[15]。Western blot結(jié)果顯示shRNA干擾BAMBI后，細(xì)胞中Ki67的表達(dá)水平顯著降低，而Bax的表達(dá)水平顯著升高，該結(jié)果與前面研究結(jié)果一致，表明shRNA干擾BAMBI后抑制非小細(xì)胞肺癌A549的生長(zhǎng)。

非小細(xì)胞肺癌難以治愈的重要原因是其具有較強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，易發(fā)生轉(zhuǎn)移的部位有骨組織、淋巴、腦等。出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者，由于身體虛弱，不宜進(jìn)行損傷大的手術(shù)治療和放化療治療。shRNA干擾BAMBI后，A549細(xì)胞的侵襲能力和遷移能力均明顯減弱。Zhou等[16]使用siRNA技術(shù)抑制BAMBI的水平后，人骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力明顯降低。Zhang等[17]研究也發(fā)現(xiàn)，BAMBI在胃癌細(xì)胞中高表達(dá)，與Smad相互作用后促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與腫瘤的血管生成密切相關(guān)，在腫瘤的細(xì)胞外基質(zhì)變性和遷移等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[18]。MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的重要一員，能降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分Ⅳ型膠原蛋白，破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲[19]。Western blot結(jié)果顯示shRNA干擾BAMBI后，細(xì)胞中VEGF和MMP-9的表達(dá)水平顯著降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，shRNA BAMBI抑制非小細(xì)胞肺癌的侵襲和遷移。

TGF-β參與調(diào)控多種細(xì)胞生物學(xué)行為，如細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡和免疫防御。在腫瘤發(fā)展的早期TGF-β作為腫瘤抑制基因，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[20,21]。shRNA干擾BAMBI后，TGF-β的表達(dá)水平顯著升高，磷酸化Smad2的表達(dá)水平也顯著增加，提示TGF-β/Smad2通路被激活。BAMBI是TGF-β的假受體，抑制TGF-β通路的激活和信號(hào)傳遞。shRNA干擾BAMBI后，BAMBI蛋白表達(dá)水平顯著降低，進(jìn)而解除對(duì)TGF-β通路的抑制，提示shRNA干擾BAMBI對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549生物學(xué)特性產(chǎn)生影響的作用機(jī)制可能與TGF-β/Smad2通路激活相關(guān)。最新研究發(fā)現(xiàn)，BAMBI參與Wnt/β-catenin通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。細(xì)胞的調(diào)節(jié)往往涉及多種信號(hào)通路的參與，shRNA干擾BAMBI后是否僅通過(guò)影響TGF-β通路而發(fā)揮作用仍需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)去驗(yàn)證。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞和動(dòng)物水平上闡述了shRNA干擾BAMBI后，對(duì)非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)、侵襲和遷移能力的抑制作用，以及其潛在的作用機(jī)制；為非小細(xì)胞肺癌的臨床治療提供一定的理論基礎(chǔ)。