人干擾素誘導蛋白10及趨化因子受體3在兒童難治性支原體肺炎患者中的表達及意義

張中興

（河南省舞陽縣人民醫院 兒科，河南 舞陽 462400）

肺炎支原體被認為是年輕人和兒童社區獲得性肺炎中最重要的病原體之一。肺炎支原體引起支原體肺炎，也稱為非典型肺炎，已被許多醫生證實有不同的臨床特征［1］，占社區獲得性肺炎（community acquired pneumonia, CAP）的7%～20%。5 歲以下的兒童通常伴有輕度上呼吸道癥狀，而年齡較大的患有支氣管肺炎兒童和青少年則需要住院［2］。肺炎支原體肺炎（mycoplasmal pneumoniae pneumonia,MPP）的癥狀與促炎細胞因子的誘導有關。促炎性細胞因子介導的組織損傷包括細胞內定位、直接細胞毒性和炎癥反應激活，并在肺炎的發病機制中發揮重要作用［3］。可以說肺炎支原體誘導的過度炎癥反應在CAP 的發病機制中發揮重要作用，包括難治性肺炎支原體肺炎。人干擾素誘導蛋白10（interferon-inducibleprotein 10,IP-10）是一種經典的γ-干擾素（interferon-γ, IFN-γ）誘導型趨化因子受體3（CXC-chemokine receptor 3,CXCR3）配體，是一種多功能趨化因子。其生理活性表現為受體CXCR3 通過從脾臟或骨髓中募集嗜中性粒細胞或T 細胞來調節組織炎癥，以啟動獲得性免疫應答［4］。然而，關于難治性支原體肺炎誘導IP-10、CXCR3 表達的報道很少。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇對象為2015年1月至2019年1月在本院接受治療的支原體肺炎患兒，所有患兒均符合支原體肺炎的診斷標準，其中難治性支原體肺炎患兒臨床表現以及胸部影像學加重，大環內酯類抗生素應用1 周以上無好轉。排除慢性肺疾病、呼吸道感染以及心肝腎疾病的患者，排除臨床資料不全的患者。依據診斷標準將患兒分為兩組，支原體肺炎（mycoplasmal pneumoniae pneumonia,MPP）組患兒120 例，男80 例，女40 例；年齡6～12 歲，平均（9.12±1.53）歲；難治性支原體肺炎（refractory mycoplasmal pneumoniae pneumonia,RMPP）組40 例，男26 例，女14 例；年齡6～12 歲，平均（9.15±1.48）歲；兩組患兒性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究前均經患兒家屬知情同意，并經院倫理委員會批準。

1.2 治療方法

所有患兒均接受大環內酯類抗生素、阿奇霉素序貫治療，RMPP 組加用糖皮質激素、丙種球蛋白，治療前、治療7 d 后抽取患兒空腹血5 ml，Perocll 非連續密度梯度離心法分離中性粒細胞。

1.3 實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測IP-10 及CXCR3 水平

實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）檢測IP-10 及CXCR3 水平，采用Trizol 提取中性粒細胞RNA，測定純度，并逆轉錄生成cDNA。PCR采用20 μl 的反應體系，其中2×SYBR?Premix Ex-Taq II 10 μl，上游（10 μmol）和下游（10 μmol）各0.5 μl，cDNA 1 μl，PCR 級高純水8 μl。采用ABI7500 型實時熒光定量PCR 儀（美國Applied Biosystems 公司）進行基因擴增，引物序列由上海英駿公司提供。IP-10（BM955683.1）上游序列：5'-GAATTTGGGCCCCTTGGGAG-3'，下游序列：5'-AGTGGATGTTCTGACCCTGC， 產物 199 bp；CXCR3（NM_001504.2） 上 游 序 列 ： 5'-TACATGCACTGCTGCCTCAA-3'，下游序列：5'-AGTCAGACTGTGGGCGAAAG-3'， 產物225 bp；β -actin（NM_001101.5） 上 游 序 列 ： 5'-CTTCGCGGGCGACGAT-3'， 下游序列： 5'-CCACATAGGAATCCTTCTGACC-3'，產物104 bp。采用相對定量2-△△Ct法比較目的基因水平。

1.4 肺功能指標

應用德國耶格公司肺功能檢測儀檢測用力肺活量（forced vital capacity,FVC）、第1 秒用力呼氣容積（forced expiratory volume in one second,FEV1）及最大呼氣流量（peak expiratory flow,PEF）。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0 統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料以百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Pearson 進行相關性分析。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般臨床資料比較

兩組患者的性別、年齡、肺部啰音及咳嗽等一般資料差異無統計學意義（P＞0.05）；RMPP 組患兒的高熱人數明顯高于MPP 組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組肺功能指標比較

RMPP 組患兒的FVC、FEV1 及PEF 水平明顯低于MPP 組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 兩組IP-10 及CXCR3 水平比較

RMPP 組患兒的IP-10 及CXCR3 mRNA 水平明顯高于MPP 組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 RMPP 組患兒治療前后肺功能以及IP-10 和CXCR3 mRNA 水平比較

治療后，患兒的FVC、FEV1、PEF 水平明顯升高，而IP-10 及CXCR3 mRNA 水平明顯降低，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

2.5 IP-10 和CXCR3 與肺功能相關性

IP-10 與FVC、FEV1、PEF 水平呈現負相關（r=-0.512、-0.473、-0.439）；CXCR3 與FVC、FEV1、PEF 水平呈現負相關（r=-0.409、-0.398、-0.432）。

表2 兩組肺功能指標比較（±s,L）

表2 兩組肺功能指標比較（±s,L）

組別MPP組RMPP組t值P值例數120 40 FVC 87.12±4.68 75.12±5.89 13.130 0.000 FEV1 89.35±4.86 76.35±5.26 14.351 0.000 PEF 81.22±4.37 65.27±3.82 20.600 0.000

表3 兩組IP-10 及CXCR3 水平比較（±s）

表3 兩組IP-10 及CXCR3 水平比較（±s）

組別MPP組RMPP組t值P值例數120 40 IP-10 1.52±0.35 2.44±0.45 15.050 0.000 CXCR3 2.07±0.52 2.98±0.74 8.865 0.000

表4 RMPP 組患兒治療前后肺功能及IP-10 和CXCR3 mRNA 水平比較（±s）

表4 RMPP 組患兒治療前后肺功能及IP-10 和CXCR3 mRNA 水平比較（±s）

組別治療前治療后t值P值例數40 40肺功能FVC/L 75.12±5.89 90.38±6.24 11.248 0.000 FEV1/L 76.35±5.26 91.57±6.88 11.289 0.000 PEF/L 65.27±3.82 90.25±6.17 13.269 0.000 IP-10 2.44±0.45 2.11±0.38 3.544 0.001 CXCR3 2.98±0.74 2.15±0.65 5.330 0.000

3 討論

近年來，越來越多的難治性或嚴重甚至致命的肺炎支原體感染病例被報道。在現有的研究中，患有RMPP 的兒童的住院時間和發熱持續時間較長［5］。最近的一項研究表明，大環內酯類抗藥性肺炎支原體可導致臨床難治性肺炎，并進一步發展為嚴重和復雜的肺炎。加用糖皮質激素治療嚴重的RMPP 通常具有顯著的有益效果［6］。因此，為了有效預防疾病的進展，早期診斷和篩查兒童嚴重的RMPP 對兒科醫生來說非常重要，并可以及時治療，包括選擇抗生素和使用糖皮質激素。

一些臨床指標有助于診斷嚴重的RMPP。一般而言，嚴重RMPP 可能伴有胸腔積液，而且發熱持續時間延長，并出現不應性［7］。據報道，與沒有胸腔積液的患者相比，胸腔積液的MPP 患者可能具有更嚴重的MPP 形式［8］。其機制尚不清楚，一個可能的原因是由免疫異常引起的炎癥反應［9］。實驗室檢查結果顯示，嚴重MPP 患者的C-反應蛋白和乳酸脫氫酶水平升高。然而，這些指標對于嚴重的MPP 是非特異性的［10］。盡管早期診斷對于避免延遲有效治療非常重要，但基于這些，在兒童疾病早期仍然很難區分MPP 和難治性的MPP。許多研究表明，過度炎癥反應在RMPP 中起重要作用。IP-10 是一種經典的IFN-γ 誘導型CXCR3配體，是一種多功能趨化因子［11］。而CXCR3 屬于G 蛋白偶聯受體家族，為常見的趨化因子受體，能與趨化因子IP-10 特異性結合，介導趨化因子效應［12］。本研究中，RMPP 組患兒的IP-10 及CXCR3 mRNA 水平明顯高于MPP 組，這可能與患兒的免疫異常有關，尤其RMPP 組患兒的免疫異常更加嚴重，并導致IP-10 及CXCR3 mRNA 水平異常增加。

本研究中，RMPP 組患兒的FVC、FEV1 及PEF 水平明顯低于MPP 組，這也證實RMPP 組患兒的肺功能更差。而RMPP 組患兒接受糖皮質激素、丙種球蛋白治療后，FVC、FEV1 及PEF 水平明顯增加，這也說明RMPP 患兒經過糖皮質激素、大環內酯類抗生素治療后，體內的炎癥可以得到較好的控制，并進一步改善患兒的肺功能。通過相關性分析顯示，RMPP 組患兒的IP-10 及CXCR3 水平分別與FVC、FEV1、PEF 水平顯示負相關，這說明IP-10 及CXCR3 水平在一定程度上能反映患兒的炎癥程度，并進一步展現肺功能，可以將其作為反映患兒炎癥嚴重程度的重要指標。