急性胰腺炎患者血清lncR-MEG3的表達水平及臨床意義

張云　陳文曉　張艷

[摘要] 目的 探討急性胰腺炎患者血清長鏈非編碼RNA-MEG3（lncR-MEG3）的表達水平及其臨床意義。 方法 收集2015年3月～2018年1月臺州市第一人民醫院（以下簡稱“我院”）收治的97例急性胰腺炎患者為病例組，并將其分為輕癥急性胰腺炎患者（MAP組，n = 62）和重癥急性胰腺炎患者（SAP組，n = 35），并隨機選取我院同期30例健康體檢者為對照組，采用實時熒光定量PCR法測定各組血清lncR-MEG3表達水平，并分析其與臨床特征的關系及對急性胰腺炎病情嚴重程度的診斷價值。 結果 MAP組、SAP組患者血清lncR-MEG3表達水平低于對照組，且SAP組低于MAP組（P < 0.05）。改良的CT嚴重指數（MCTSI）評分≥4分、急性胰腺炎嚴重程度床邊指數（BISAP）評分≥3分、Ranson評分≥3分，急性胰腺炎患者血清lncR-MEG3表達水平低于MCTSI評分<4分、BISAP評分<3分、Ranson評分<3分。ROC曲線下面積AUC評價血清lncR-MEG3對急性胰腺炎病情嚴重程度的診斷價值，結果顯示，AUC為0.805，95%CI（0.720，0.891），lncR-MEG3最佳截斷值為3.67，此時靈敏度、特異性分別為0.79，0.85，準確性為0.82。 結論 血清lncR-MEG3通過表達下調參與急性胰腺炎發病過程，其與病情嚴重程度密切相關，早期檢測可作為評估急性胰腺炎病情嚴重程度的重要標志物。

[關鍵詞] 輕癥急性胰腺炎;重癥急性胰腺炎;長鏈非編碼RNA-MEG3;診斷價值

[中圖分類號] R567? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）06（b）-0113-05

Expression level and clinical significance of serum lncR-MEG3 in patients with acute pancreatitis

ZHANG Yun? ?CHEN Wenxiao? ?ZHANG Yan

Department of Gastroenterology， Taizhou First People′s Hospital， Zhejiang Province， Taizhou? ?318020， China

[Abstract] Objective To investigate the expression level and clinical significance of long non-coding RNA-MEG3 （lncR-MEG3） in serum of patients with acute pancreatitis. Methods Form March 2015 to January 2018， 97 cases of patients in Taizhou First People′s Hospital （"our hospital" for short） with acute pancreatitis were sollected as treated group， and it can be divided into patients with mild acute pancreatitis （MAP group， n = 62） and patients with severe acute pancreatitis （SAP group， n = 35）， and from the same period were randomly selected 30 cases of healthy check-up for a control， using real-time fluorescent quantitative PCR method established groups of serum lncR-MEG3 expression level， and analyze its relationship with the clinical features and diagnostic value of illness severity of acute pancreatitis. Results The expression levels of lncR-MEG3 in serum of patients in MAP group and SAP group were lower than those in the control group， and those in SAP group were lower than those in MAP group （P < 0.05）. The improved CT severity index （MCTSI） score ≥4 points， bedside Acute pancreatitis severity bedside index （BISAP） score ≥3 points， Ranson score ≥3 points， and serum lncR-MEG3 expression levels in patients with acute pancreatitis were lower than MCTSI score< 4 points， BISAP score < 3 points， and Ranson score< 3 points. The curve area （AUC） under ROC curve was used to evaluate the diagnostic value of serum lncR-MEG3 for the severity of acute pancreatitis. The results showed that the AUC was 0.805， 95%CI （0.720， 0.891）， and the optimal cut-off value of lncR-MEG3 was 3.67， and the sensitivity and specificity were 0.79， 0.85， and accuracy was 0.82， respectively. Conclusion Serum lncR-MEG3 is involved in the pathogenesis of acute pancreatitis through down-regulation of its expression， which is closely related to the severity of acute pancreatitis. Early detection can be used as an important marker to evaluate the severity of acute pancreatitis.

[Key words] Mild acute pancreatitis; Severe acute pancreatitis; Long non-coding RNA MEG3; Prognostic value

急性胰腺炎是臨床常見的內科急腹癥，是指由多種病因引起胰腺內胰酶被激活而致胰腺的局部炎性反應，常伴有不同程度其他器官功能改變，主要包括輕癥急性胰腺炎（MAP）和重癥急性胰腺炎（SAP）[1-2]。研究[3]表明，輕癥急性胰腺炎多為自限性，預后較好，但如果治療不及時，有20%～25%可進展為重癥急性胰腺炎，病情兇險，病死率可高達30%～50%。目前臨床常結合臨床癥狀和體征、影像學檢查診斷急性胰腺炎，但是缺乏特異性，可能會造成誤診和漏診，延誤治療時機。尋找靈敏度高、特異性好的分子標志物輔助臨床診斷急性胰腺炎并評估病情嚴重程度，對及時制訂針對性干預措施具有重要意義。長鏈非編碼RNA（lncRNA）是一類非編碼蛋白質的RNA分子，長度為200～100 000個核苷酸，可調控細胞生長、發育等生理活動，以及參與多種疾病的發生、發展過程[4]。母系表達基因（MEG3）是具有腫瘤抑制功能的lncRNA，研究顯示[5-7]，MEG3表達下調參與了乳腺癌、前列腺癌、肝癌等惡性腫瘤的發生發展過程。本研究通過檢測血清lncR-MEG3表達水平，旨在探討其在急性胰腺炎發病過程中的作用。現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年3月～2018年1月浙江省臺州市第一人民醫院（以下簡稱“我院”）收治的97例急性胰腺炎患者為病例組，納入標準：（1）符合《中國急性胰腺炎診治指南》中急性胰腺炎診斷標準[8]，符合以下至少2項特征：①急性、突發、持續且劇烈的上腹部疼痛，且疼痛向背部放射;②血清淀粉酶、脂肪酶活性兩者至少有1項較正常值上限的3倍高;③腹部超聲，或者增強CT/MRI檢查結果提示急性胰腺炎。排除標準：①妊娠期以及哺乳期婦女;②心臟功能不全者;③肝、腎功能障礙者;④急、慢性炎癥性反應患者;⑤自身免疫性疾病患者;⑥惡性腫瘤患者;⑦合并其他可能影響本研究結果的疾病。根據《2012版急性胰腺炎分類：亞特蘭大國際共識的基線胰腺炎分類和定義的修訂》[9]，將患者分為輕癥急性胰腺炎患者（SAP組）和重癥急性胰腺炎患者（MAP組）。SAP組62例，男37例，女25例;年齡37～69歲，平均（44.7±11.2）歲。MAP組35例，男22例，女13例;年齡35～71歲，平均（42.6±12.0）歲。于同期隨機選取我院30名健康體檢者為對照組，男19名，女11名;年齡37～66歲，平均（43.0±11.6）歲。三組性別構成、年齡比較，差異均無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。本研究經我院醫學倫理委員會的審批通過，研究對象及家屬在知情同意書上簽字。

1.2 方法

1.2.1 lncR-MEG3檢測? 抽取各組研究對象清晨空腹外周靜脈血5 mL，采用EDTA抗凝，以2000 r/min的速度離心10 min，離心半徑為8 cm，收集上清液，置于無菌凍存管中，保存于液氮中，備用。采用Trizol試劑盒（Invitrogen公司提供，生產批號：20141009）提出血清中RNA，嚴格按照RT反轉錄試劑盒（美國GeneCopoeia公司提供，生產批號：20132207）的說明將RNA反轉錄為cDNA。lncR-MEG3上游引物序列為：5′-TCGCTCTTCTCCATCGAACCG-3′，下游引物序列為：5′-GTAGGGCGACGACTTTGAGT-3′，引物由廣州銳博生物技術有限公司提供，引物長度為22 bp;內參基因上游引物序列為：5′-ATGGTGAAGGTCGGTGTGA-3′，下游引物序列為：5′-CCATGTAGTTGAGGTCAATGAG-3′，引物長度18 bp。反轉錄反應體系為20 μL，分別4 μL的5×PrimeScript Buffer，1 μL的PrimeScript RT Enzyme Mix，1 μL濃度為50 μmol/L的Oligo dT Primer，1 μL濃度為100 μmol/L的Random 6mers，1 μg總RNA，加H2O至20 μL，反轉錄條件：16℃ 20 min，42℃ 30 min，85℃ 5 min。采用實時熒光定量PCR法測定血清lncR-MEG3表達水平，嚴格按照PCR試劑盒（美國GeneCopoeia公司提供，生產批號：20141618）進行擴增，擴增反應體系為20 μL，分別為10 μL的2×All-in-one qPCR Mix，0.4 μL的50×ROX Reference Dye，5.6 μL的ddH2O，1 μL的GAPDH引物Mix，1 μL的lncR-MEG3引物Mix，2 μL的cDNA template，反應條件：95℃預變性10 min，95℃ 10 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，共進行45個循環。lncR-MEG3的相對表達量采用2-△△Ct表示。

1.2.2 急性胰腺炎病情嚴重程度評估? ①改良的CT嚴重指數（MCTSI）評分[10]，包括胰腺炎性反應和胰腺壞死兩部分;胰腺炎性反應中正常胰腺記為0分，胰腺和/或胰周炎性改變記為2分，單發或多個積液區或胰周脂肪壞死記為4分;胰腺壞死中無胰腺壞死記為0分，壞死范圍≤30%記為2分，壞死范圍>30%記為4分，胰外并發癥如胸腔積液、腹水、胃腸道或血管受累記為2分。胰腺炎性反應與壞死評分之和即為MCTSI評分。MCTSI評分<4分記為輕癥急性胰腺炎，MCTSI評分≥4分記為重癥急性胰腺炎。②急性胰腺炎嚴重程度床邊指數（BISAP）評分[11]，包括血尿素氮、受損的精神狀態、全身炎癥反應綜合征、年齡以及胸腔積液共5項內容：血尿素氮≤25 mg/dL記為0分，>25 mg/dL記為1分;受損的精神狀態=15分記為0分， <15分記為1分;全身炎癥反應綜合征內容1項及以下記為0分，超過1項記為1分;年齡≤60歲記為0分，>60分記為1分;無胸腔積液記為0分，有胸腔積液記為1分，總分<3分記為輕癥急性胰腺炎，總分≥分記為重癥急性胰腺炎。③Ranson評分[12]：包括入院時5項臨床指標以及48 h時6項指標，每項指標均記為1分，總分<3分記為輕癥急性胰腺炎，總分 ≥3分記為重癥急性胰腺炎。

1.3 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件錄入及統計分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，多組獨立樣本的比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗;計數資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用ROC曲線下面積（AUC）評價lncR-MEG3對急性胰腺炎病情的診斷價值。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組血清lncR-MEG3表達水平比較

三組血清lncR-MEG3表達水平比較，差異有統計學意義（P < 0.05），MAP組、SAP組患者血清lncR-MEG3表達水平低于對照組，且SAP組患者血清lncR-MEG3表達水平低于MAP組，差異均有統計學意義（P < 0.05）。見表1、圖1。

MAP：輕癥急性胰腺炎;SAP：重癥急性胰腺炎

2.2 急性胰腺炎患者臨床特征與血清lncR-MEG3表達的關系

不同MCTSI評分、BISAP評分、Ranson評分急性胰腺炎患者血清lncR-MEG3表達水平比較，差異有統計學意義（P < 0.05），MCTSI評分≥4分、BISAP評分≥3分、Ranson評分≥3分急性胰腺炎患者血清lncR-MEG3表達水平低于MCTSI評分<4分、BISAP評分<3分、Ranson評分<3分患者。見表2。

2.3 血清lncR-MEG3對急性胰腺炎病情的診斷價值

采用ROC曲線下面積AUC評價血清lncR-MEG3對急性胰腺炎病情嚴重程度的診斷價值，結果顯示，AUC為0.805，95%CI（0.720，0.891），lncR-MEG3的最佳截斷值為3.67，此時的靈敏度、特異性分別為0.79、0.85，準確性為0.82。見圖1。

3 討論

急性胰腺炎病情危重，治療不及時可導致代謝性酸中毒、多器官功能衰竭、休克等，病死率較高，嚴重威脅患者的健康和生命質量[13-15]。目前臨床主要根據急性胰腺炎臨床表現包括麻痹性腸梗阻、腹膜炎體征等，結合B超或者CT顯示胰腺腫大，以及血液學指標如淀粉酶、酯酶升高等進行診斷。但是報道[2，16]顯示，腸梗阻、急性闌尾炎患者也存在淀粉酶及酯酶升高現象，因此血液學指標用于診斷急性胰腺炎的特異性差。尋找靈敏度高、特異性好的生物標志物輔助臨床早期診斷急性胰腺炎，并評估病情嚴重程度，對改善患者預后有重要價值。lncRNA是一類長度超過200 nt的無編碼蛋白質功能的RNA，研究[17]表明，lncRNA與神經退行性疾病、風濕免疫性疾病、惡性腫瘤等多種疾病密切相關，MEG3是在卵巢、腦、垂體等正常組織中高表達的lncRNA，MEG3表達異常與多種疾病的發生、發展密切相關。Su等[18]研究顯示，lncR-MEG3表達下調通過介導血管生成而參與骨關節炎的發生發展過程。Xu等[19]研究顯示，將糖尿病小鼠模型視網膜中lncR-MEG3基因敲除，可加重毛細血管退變，增加微血管通透性和炎性反應。研究[20-21]顯示，MEG3表達下調能促進結直腸癌、胃癌等惡性腫瘤細胞的增殖、生長，并抑制其凋亡。關于lncR-MEG3在急性胰腺炎中的發病作用，目前相關的研究相對較少。

本研究結果顯示，急性胰腺炎患者血清lncR-MEG3表達水平低于健康體檢者，并且SAP患者血清lncR-MEG3表達水平低于MAP患者，提示lncR-MEG3表達下調參與了急性胰腺炎的發病過程，并且與病情嚴重程度密切相關。研究[22]發現，lncR-MEG3參與惡性腫瘤發病的機制為：lncR-MEG3使機體內P53蛋白含量增加，并與GDF15啟動子結合而增加GDF15的表達，以影響癌細胞的增殖、分化能力來調節疾病的發生、發展，lncR-MEG3在急性胰腺炎發病中的機制是否與此有關，仍需進一步的研究。MCTSI、BISAP、Ranson評分是臨床評價急性胰腺炎病情嚴重程度的重要指標，評分越高，病情越危重。本研究中，較MCTSI評分<4分、BISAP評分<3分、Ranson評分<3分急性胰腺炎患者而言，MCTSI評分≥4分、BISAP評分≥3分、Ranson評分≥3分的患者血清lncR-MEG3表達水平更高，提示lncR-MEG3可作為潛在區分急性胰腺炎病情嚴重程度的生物學指標，評分越高的患者，lncR-MEG3表達水平越低。采用ROC曲線下面積（AUC）評價血清lncR-MEG3對MAP和SAP的診斷價值，結果顯示，AUC為0.805，lncR-MEG3最佳截斷值為3.67，此時的靈敏度和特異性分別為0.79和0.85，準確性為0.82。提示lncR-MEG3可作為臨床輔助診斷急性胰腺炎病情嚴重程度的指標，臨床有重要參考價值。

綜上所述，lncR-MEG3通過低表達而參與急性胰腺炎的發病過程，并與病情嚴重程度密切相關，早期檢測可作為臨床輔助診斷急性胰腺炎病情嚴重程度的重要標志物。

[參考文獻]

[1]? 孫昀.重癥急性胰腺炎早期液體治療策略[J].肝膽外科雜志，2017，25（6）：475-476.

[2]? 王春全，陳景祥，楊進軍，等.miR-216a在急性胰腺炎患者外周血的表達及臨床意義[J].免疫學雜志，2013，29（1）：47-49.

[3]? 張旭，付強，秦濤，等.急性胰腺炎患者血清長鏈非編碼RNA-MEG3表達及意義[J].中華實用診斷與治療雜志，2018，32（1）：28-30.

[4]? 魯艷明，黃翠艷，王月，等.長鏈非編碼RNA在婦科惡性腫瘤中研究進展[J].中華腫瘤防治雜志，2017，24（24）：1751-1756.

[5]? 陳銳沛，吳靈飛.長鏈非編碼RNA母系表達基因3與腫瘤發生的研究進展[J].汕頭大學醫學院學報，2016，29（1）：59-61，64.

[6]? 胡強，許斌，陳明.長鏈非編碼RNA母系表達基因3在腫瘤中表達的研究現狀[J].東南大學學報，2017，36（3）：482-485.

[7]? 李劍琦.長鏈非編碼RNA MEG3對上皮性卵巢癌細胞增殖的影響及其作用機制的研究[D].廣州：廣州醫科大學，2014.

[8]? 中華醫學會消化病學分會胰腺疾病學組，中華胰腺病雜志編輯委員會，中華消化雜志編輯委員會.中國急性胰腺炎診治指南（2013，上海）[J].中華胰腺病雜志，2013， 3（2）：217-222.

[9]? 李能平.《2012版急性胰腺炎分類：亞特蘭大國際共識的分類和定義的修訂》解讀[J].中華胰腺病雜志，2013， 13（3）：148-151.

[10]? Sahu B，Abbey P，Anand R，et al. Severity assessment of acute pancreatitis using CT severity index and modified CT severity index：Correlation with clinical outcomes and severity grading as per the Revised Atlanta Classification [J]. Indian J Radiol Imaging，2017，27（2）：152-160.

[11]? Ye JF，Zhao YX，Ju J，et al. Building and verifying a severity prediction model of acute pancreatitis （AP） based on BISAP，MEWS and routine test indexes [J]. Clin Res Hepatol Gastroenterol，2017，41（5）：585-591.

[12]? Ustunda GY，Sarξ U. C-Reactive Protein Levels Together with the Ranson Scoring System to Differentiate the Mild and Severe Forms of Acute Pancreatitis [J]. Turk J Gastroenterol，2017，28（3）：157-158.

[13]? 冀鳳霞.觀察急性胰腺炎的循證護理的臨床療效[J].世界最新醫學信息文摘，2016，16（61）：370，372.

[14]? 李非.急性胰腺炎外科干預的時機及技術探討[J].臨床肝膽病雜志，2017，33（1）：32-35.

[15]? 朱美冬，羅運權.中西醫治療重癥急性胰腺炎的研究進展[J].臨床肝膽病雜志，2017，33（1）：188-193.

[16]? 牛凱，成宇晶.淀粉酶升高的非胰腺炎腹痛36例臨床分析[J].山西醫藥雜志，2011，40（4）;380-381.

[17]? 孟菲菲，司君利，解祥軍，等.長鏈非編碼RNAs MEG3和GAS5在胃癌組織中的表達及其與預后的關系[J].中國臨床研究，2016，29（11）：1449-1452，1457.

[18]? Su W，Xie W，Shang Q. The long non-coding RNA MEG3 is down-regulated and inversely associated with VEGF levels in osteoarthritis [J]. Biomed Res Int，2015：356893.

[19]? Xu Z，Yan Y，Qian L，et al. Long non-coding RNAs act as regulators of cell autophagy in diseases（Review）[J]. Oncol Rep，2017，37（3）：1359-1366.

[20]? 趙月鳴，鄒玉鳳，董瑩，等.母系印跡表達基因3在結直腸癌組織中表達及其與血管生成的關系[J].中國普通外科雜志，2016，25（10）：1450-1454.

[21]? 張麒，艾良，代佑果.長鏈非編碼RNA母系表達基因3多態性與胃癌關系的研究[J].中國普外基礎與臨床雜志，2018（11）：1323-1326.

[22]? 陳銳沛，吳靈飛.長鏈非編碼RNA母系表達基因3與腫瘤發生的研究進展[J].汕頭大學醫學院學報，2016， 29（1）：59-61，64.