HPV檢測技術的研究進展

林平

摘要：宮頸癌是常見的女性生殖系統惡性腫瘤。嚴重危害女性的生命健康。據不完全統計，我國每年死于宮頸癌的人數近5萬之多。宮頸癌及宮頸癌前病變（宮頸CIN）的發展需要很長的時間。所以，宮頸癌及癌前病變篩查是預防宮頸癌的有效措施。高危型人乳頭瘤病毒感染及持續性人乳頭瘤病毒感染是導致宮頸癌的主要原因，因此，HPV檢測是臨床上篩查宮頸癌及癌前病變的主要手段之一。現就，近些年HPV檢測方法及研究情況進行整理概括作一綜述。

人乳頭瘤病毒（HPV）是一種嗜上皮性病毒，在人類皮膚角質形成細胞粘膜鱗狀上皮細胞是其天然宿主，主要通過性傳播感染，長期以來，已知HPV感染可引起人類良性腫瘤和疣。目前已發現超過200種不同的HPV亞型，根據其致病性分為高危型和低危型。與宮頸癌有關的高危型HPV有16，18，31，33，35，39，45，52，56，58，59，68。低危型有6，11，42，43，44。還有HPV6，11，42型與生殖道疣有關。

近些年來，我國對宮頸癌越來越重視，其防治方法也在不斷更新發展，HPV疫苗迅速崛起，只是我國還沒有廣泛普及。目前，宮頸癌的篩查仍是主要預防，控制宮頸癌的手段，根據美國婦產科醫師學會（American College of Obstetricians and Gynecologisists，ACOG）最新的宮頸癌篩查和預防實踐指南，強調以下幾點：

1、宮頸癌篩查應從 21 歲開始。HIV 感染女性除外。年輕女性感染 HPV 后幾乎均可通過免疫系統在 1-2 年內清除病毒而不發生病變。過早的篩查可能會增添患者的焦慮及花費，導致過度隨診。

2、21-29 歲女應單獨行細胞學檢查，每 3 年篩查 1 次。30-65 歲女性建議每 5 年行細胞學和 HPV 聯合篩查。

3、以前篩查結果陰性且無 HSIL 及更高級別病變的女性，65 歲以后停止宮頸癌前篩查。

4、已行子宮全切且以前沒有 HSIL 及更高級別病變的女性應停止宮頸癌篩查。

5、有 HIV 感染、免疫缺陷、子宮內己烯雌酚暴露及既往 HSIL或更高級別病變的女性，可能比常規篩查指南推薦的需要更頻繁的篩查。

6、對于細胞學 ASCUS、HPV 陰性的女性，建議 3 年內復查 TCT檢查及 HPV 篩查。

7、30 歲及以上的細胞學陰性，HPV 陽性的女性，12 個月內復查 TCT 檢查及 HPV 檢測。如果復查的細胞學結果為 ASCUS 及更高級別病變，或 HPV 檢測結果仍陽性，建議行陰道鏡檢查。或者直接進行 HPV 基因分型，若 16 型或 18 型陽性，應直接進行陰道鏡檢查，若 16 型或者 18 型陰性，應在 12 個月后再次進行聯合篩查。

目前HPV的主要檢測方法有：病理學檢測，分子生物學檢測，免疫組化法，血清學檢測，其中病理學檢測為確診宮頸癌的金標準。現就HPV檢測的發展情況作以綜述。

1.人乳頭瘤病毒感染宮頸的病理學改變。

鱗狀細胞浸潤癌：占宮頸癌的75%-80%。

微小浸潤癌肉眼觀察無明顯異常，或類似子宮頸柱狀上皮異位，隨病變發展，可形成4種類型，即外生型（最常見，常累及陰道），內生型，潰瘍型，頸管型。通過顯微鏡檢測根據病灶大小又分為微小浸潤癌和浸潤癌（根據癌細胞的分化程度又分為I級II級III級）。

腺癌：占宮頸癌的20%-25%。巨檢發現腺癌通常來自子宮頸管內，浸潤管壁，或自子宮頸管內向子宮頸外口突出生長，常可侵犯宮旁組織，病灶向子宮頸管內生長時子宮頸外觀正常，但因子宮頸管膨大，形如桶狀。顯微鏡觀察主要有2種組織學類型。黏液腺癌和惡性腺瘤。

腺鱗癌：占宮頸癌的3%-5%。癌組織中含有腺癌和鱗癌兩種成分。

2.分子生物學技術檢測人乳頭瘤病毒技術。

2.1 檢測樣本及檢測項目

一般為宮頸上皮組織，如用于細胞學檢測的宮頸刮片或者刷取宮頸上皮細胞的拭子。還有在陰道鏡下取的活檢組織。近些年來有研究證實，宮頸口處的上皮細胞會進入尿液，因此，尿液也可用作檢測生殖道HPV感染的樣本。檢測前處理工作繁雜，樣本的量必須足夠多。目前的分子生物學技術可以檢測（1）HPV的不同亞型，不同亞型致病性不同，而且高危型HPV病毒感染需要進行陰道鏡進一步診斷，低危型則不需要，HPV分型檢測是很有必要的可以避免醫療資源的過度浪費。（2） HPV DNA檢測，目前還沒有普及應用，可能原因是其檢測的特異性相對較低，假陽性相對較高，另外有些患者感染HPV后，病毒活性沒有引起惡變，而是一段時間后自行消失了。（3）HPV的mRNA檢測，主要是指檢測HPV病毒中E6和E7蛋白的表達，HPV E6/E7蛋白是惡化的宮頸上皮細胞的主要分子，有研究顯示E6、E7mRNA的水平越高，疾病的惡化程度也越高。因此HPV mRNA的檢測結果是早期診斷宮頸癌的有力參考。（4）HPV病毒含量檢測，即檢測出HPV病毒的含量，這項檢測在清除病毒的治療起著重要作用，可以幫助我們直觀的觀察治療預后效果。

2.2臨床上常用的檢測方法。

2.2.1分子雜交技術，包括原位核酸雜交法和雜交捕獲法。其中原位核酸雜交法有定位準確的優點，可以在細胞水平上探討HPV感染。但該方法敏感度低，需要大量純化樣本。區分不了HPV的型別。捕獲雜交法利用化學發光放大抗體捕獲的信號，可以檢測高危型HPV病毒和低危型HPV病毒。但是無法區分單獨的HPV亞型。

2.2.2 PCR檢測方法，這種方法特異性，敏感性較好。包括實時定量PCR法，特異性PCR法，通用引物PCR法，DNA基因芯片技術，導流雜交基因芯片技術等。PCR檢測方法是目前最好的HPV檢測方法，簡單易行，樣本來源不受限，還可有效的進行HPV分型。但會發生樣品間的交叉反應，導致假陽性。

3.免疫組化法檢測人乳頭瘤病毒

免疫組化方法，通過病變部位的病毒抗原與抗HPV病毒的抗體結合。此方法特異性很高，還可以明確病變部分，在篩查宮頸癌及癌前病變中有一定的參考價值。但是檢出率低，不能區分HPV的型別，敏感度較差。

4.血清抗體法檢測人乳頭瘤病毒

HPV血清抗體檢測法，雖然感染HPV后血清中會有反映，但這種檢測方法發展緩慢，因此準確性不高，無法知道具體感染時間，也無法區分HPV型別。隨著不斷研究，發現HPV血清檢測在宮頸癌的治療和預后隨訪中有一定的參考價值。

近些年，關于HPV檢測研究迅速，在篩查宮頸癌及宮頸癌前病變中占有越來越重要的位置，但其也存在一定的弊端，高危型HPV感染及持續性HPV感染是宮頸癌及癌前病變的誘因，但并不是絕對條件，并且還有很多人對HPV感染和宮頸癌的關系了解不深，沒有定期篩查的意識，使得HPV檢測無法大規模開展，此外，HPV檢測技術的改進方向應該是提高靈敏度和特異性，可以分型檢測，成為宮頸癌篩查中不可缺少的手段。

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