包蟲病基因篩查

李有義

[摘要]包蟲病屬于人畜共患性寄生蟲疾病，具有一定的自然疫源性和地方流行性特征，嚴(yán)重威脅羞牧區(qū)人們的身體健康，同時(shí)也阻礙了牧區(qū)經(jīng)濟(jì)的健康穩(wěn)定發(fā)展，我國可以說是包蟲病嚴(yán)重流行的國家，嚴(yán)重程度居世界首位。按我國各省包蟲病的流行程度劃分，依次是：新疆、青海、西藏、寧夏、甘肅、四川、內(nèi)蒙古等七省區(qū)的牧區(qū)或半農(nóng)半牧區(qū)，覆蓋國土面積達(dá)44%，流行區(qū)入口數(shù)約6600萬，其中未經(jīng)治療的包蟲病患者十年病死率高達(dá)94%，就如此高的致死率來看，包蟲病已經(jīng)成為直接侵害到人們健康、生命的罪魁禍?zhǔn)祝粌H如此，也是影響到地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的一大感染性病癥。20082013年全州六個(gè)縣，對(duì)由B超所篩查出來的包蟲病相關(guān)流行情況做統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)：主要有囊型、泡型和混合型這三型的包蟲病廣泛分布。而其分布范圍主要涉及到44個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，患病率平均達(dá)到了5.12%，甚至于由2012年開展的局部地區(qū)（班瑪縣、達(dá)日縣特合土鄉(xiāng)）調(diào)查結(jié)果顯示，平均染病率超過了10.00%，達(dá)到了11.20%，在犬類當(dāng)中的感染率已經(jīng)達(dá)到47.62%，在嚙齒類動(dòng)物當(dāng)中的感染發(fā)生率則是4.72%，另外于牛、羊類動(dòng)物當(dāng)中的感染率達(dá)到了13.37%。位于果洛州的班瑪縣則為世界上流行最嚴(yán)重的地區(qū)之一，目前已經(jīng)成為包蟲病的重災(zāi)區(qū)。本文主要對(duì)包蟲病基因的相關(guān)問題進(jìn)行了研究。

[關(guān)鍵詞]包蟲病;基因;篩查

[中圖分類號(hào)]R532.32 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2096-5249（2019）18-0191-02

包蟲病一般是棘球?qū)俳{蟲幼蟲所引起，目前已分布全球，屬于全世界范圍內(nèi)最具致命性的疾病之一。關(guān)于包蟲病的治療，國家雖然頒布和提出相關(guān)措施，但受到宗教信仰、民族、文化等因素的影響，這些預(yù)防措施的實(shí)施難度通常較大。近年來，為了能夠更好的預(yù)防和控制包蟲病，在疾病基因研制方面也做了大量工作，且也取得了顯著成果。在棘球蚴基因方面研究中，僅Cucher報(bào)道有38個(gè)與細(xì)粒棘球蚴發(fā)育階段密切相關(guān)基因，其中細(xì)粒棘球蚴屬特有的序列。與細(xì)粒棘球蚴不同，形成包蟲病的多房棘球蚴以出芽或浸潤式增殖，直接破壞和取代肝實(shí)質(zhì)，當(dāng)囊液發(fā)生滲漏并且接觸到了肝組織之后，便會(huì)造成局部肝組織的病變、增生以及纖維化?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，這種變化與病毒性肝炎引發(fā)的肝癌極為相似。蟲體通過改變肝細(xì)胞的miRNA，使肝細(xì)胞的代謝、生長、分化發(fā)生變化以適應(yīng)蟲體生長及逃避人體的免疫系統(tǒng)。這些結(jié)果表明，泡球蚴感染引起的肝組織miRNA變化是特異及有規(guī)律的，掌握了這一變化，即找到特異的基因作為檢測標(biāo)志就能對(duì)包蟲病感染的程度及預(yù)防等工作作出貢獻(xiàn)?；蚬こ讨饕墙柚飳W(xué)技術(shù)和基因重組技術(shù)，修復(fù)和改造病原微生物基因，具有著十分廣闊的發(fā)展前景。

1.棘球?qū)俳{蟲基因篩查

由棘球?qū)俳{蟲所引起的包蟲病目前在全國范圍內(nèi)發(fā)病率極高，棘球?qū)俳{蟲幼蟲可寄生在動(dòng)物和人體的任何部位，不僅生命力頑強(qiáng)，且體積龐大，同時(shí)還會(huì)形成繼發(fā)性感染，如果棘球?qū)俳{蟲包囊破裂，后果不堪設(shè)想，可能會(huì)引起腹腔種植，引起患者過敏性休克。目前，關(guān)于棘球?qū)俳{蟲的治療一般以外科手術(shù)為主，藥物屬于輔助治療措施，但手術(shù)經(jīng)常會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害，且術(shù)后復(fù)發(fā)概率較高。例如，通過阿苯達(dá)挫類藥物的應(yīng)用，生物利用度很差，效果不確定，缺乏有效的藥物，且可產(chǎn)生很多的不良反應(yīng)，基因研究為包蟲病的預(yù)防和控制帶來了希望的曙光。

為了研究基因和包蟲病之間的關(guān)系，實(shí)驗(yàn)中，可通過基因探針的方式，從患者生體上直接選擇包蟲病灶標(biāo)本，之后將切取的標(biāo)本基因檢測結(jié)果和正常肝組織相比，如果檢測出高表達(dá)或低表達(dá)的基因，意味著可能與包蟲感染有關(guān)系，能不能從這方面入手，研究疫苗預(yù)防包蟲病。

1.1.BCG-EG95基因重組 EG95在棘球?qū)俳{蟲的成蟲、六鉤蚴階段，可對(duì)EG95基因進(jìn)行重組，因此可見，在包蟲病的生長和發(fā)育過程中，EG95基因發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。據(jù)相關(guān)調(diào)查研究顯示，通過對(duì)EG95基因進(jìn)行重組，可有效避免牛、羊等牲畜發(fā)生感染，為包蟲病的預(yù)防和控制提供機(jī)會(huì)。

1.2.BCG-EgGlYl62基因重組 對(duì)BCG-EgGlYl62基因進(jìn)行重組，同時(shí)具有抗原性和免疫原性，BCG-EgGlY 162基因重組可誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)。為對(duì)BCG-EgGlYl62基因作用進(jìn)行觀察，一些研究人員開展了實(shí)驗(yàn)，將3組感染患者作為研究對(duì)象，年齡30～50歲，將包蟲病灶組織和正常肝臟組織進(jìn)行基因探針測序。測序的結(jié)果BCG-EgGlYl62基因存在重組，結(jié)果表明，BCG-EgGlYl62基因可能與包蟲免疫有關(guān)，由此可見，BCG-EgGlYl62基因可從抑制囊腫生長和減少囊腫數(shù)量等方面入手，來抵抗囊性包蟲感染，以起到良好的保護(hù)作用，不管是牲畜還是入類，均能起到良好的免疫保護(hù)效應(yīng)。

1.3.Eg.myophilin基因重組據(jù)相關(guān)調(diào)查研究表明，Eg.myophilin基因具有良好的免疫原性和抗原性，可將其作為包蟲病的首選，為對(duì)Eg.myophilin的保護(hù)性進(jìn)行探究，在測序研究中。結(jié)果表明，在免疫的患者血清中l(wèi)gG2a、lgGl、lgE等抗體水平也有所提升，這些抗體能溝通通過中和作用、調(diào)理作用等，對(duì)棘球?qū)俳{蟲原頭節(jié)進(jìn)行殺傷，由此也突出了Eg.myophilin的抗棘球?qū)俳{蟲效果。lgE通過嗜酸性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，直達(dá)活化細(xì)胞和感染病灶，殺死包蟲。有研究顯示，重組質(zhì)粒pET28a-Egl23當(dāng)經(jīng)過轉(zhuǎn)化、變成大腸埃希菌BL21后，使用IPTG（劑量為經(jīng)0.4mmol/L）進(jìn)行誘導(dǎo)、持續(xù)培養(yǎng)3個(gè)小時(shí)，之后加以超聲破碎處理，以每分鐘12000轉(zhuǎn)的速度（離心半徑設(shè)置為0.4cm）進(jìn)行離心處理，10分鐘后，采用SDS-PAGE電泳進(jìn)行對(duì)上清液與沉淀的鑒定，對(duì)所表達(dá)出的蛋白分子質(zhì)量單位進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，約有29ku，這一結(jié)果和預(yù)測值（包括7kuHis標(biāo)簽）是一致的。同時(shí)應(yīng)注意，目的蛋白大都是存在在細(xì)菌沉淀當(dāng)中的，由此來看，重組蛋白主要表達(dá)形式是包涵體。經(jīng)過初步的篩選，我們得到：EgM家族蛋是能夠起到很好的免疫保護(hù)效果的，并獲得了EgMl23-GST重組蛋白。但是受到GST標(biāo)簽蛋白比較大的因素影響，所以可能會(huì)對(duì)表達(dá)蛋白結(jié)構(gòu)造成一定程度的影響。Pet-28a具有強(qiáng)啟動(dòng)子T7及1ae調(diào)控子，若是于啟動(dòng)子以及多克隆位點(diǎn)之間帶有6個(gè)His標(biāo)簽，那么可以得到分子質(zhì)量單位較小的結(jié)果，這樣也更有益于支持對(duì)目的蛋白的純化與鑒定。

結(jié)語：

在我國的北部和西部牧區(qū)中，包蟲病的發(fā)病概率極高，由此也對(duì)牧區(qū)經(jīng)濟(jì)的健康穩(wěn)定發(fā)展產(chǎn)生了影響和阻礙。目前，關(guān)于包蟲病的治療和控制，國內(nèi)已經(jīng)取得了很多研究成果，為了使該疾病的治療更加完善，還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究。例如，在基因重組和免疫保護(hù)方面，整體的效果還不夠理想，還需要對(duì)最佳免疫時(shí)間和免疫劑量進(jìn)行確定，從而最大限度提升治療效果?；驒z測屬于一種實(shí)用性較強(qiáng)、簡便便捷的方法，在包蟲病的控制和預(yù)防工作中應(yīng)用十分廣泛。在當(dāng)前的包蟲病基因檢測領(lǐng)域中，基因工程優(yōu)勢顯著，隨著免疫學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，也會(huì)研制出更多的基因工程，實(shí)現(xiàn)對(duì)包蟲病的有效防治。