胃復(fù)方對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞移植瘤裸鼠作用及其對(duì)c-Myc、人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因表達(dá)的影響

張順榮 李東芳 何寄琴

摘要 目的：觀察胃復(fù)方對(duì)人胃癌BGC-823裸鼠的抑瘤作用及c-Myc、人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）基因表達(dá)的影響，評(píng)估胃復(fù)方作用及其可能的作用機(jī)制。方法：建立人胃癌BGC-823裸鼠模型;將成功建立的裸鼠胃癌皮下移植瘤模型的40只荷瘤鼠隨機(jī)分為5組（n=8）：模型對(duì)照組、胃復(fù)方低劑量組、胃復(fù)方高劑量組、氟尿嘧啶組、氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組，連續(xù)給藥4周。每7天記錄腫瘤長(zhǎng)徑、短徑，計(jì)算瘤體體積并繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線圖;給藥4周后處死所有荷瘤鼠，剝離皮下移植瘤，稱瘤重、計(jì)算抑瘤率;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)瘤體組織c-Myc、hTERT蛋白表達(dá)。結(jié)果：1）胃復(fù)方對(duì)人胃癌BGC-823裸鼠移植瘤具有明顯抑制作用，各劑量間有量效關(guān)系。其中胃復(fù)方低劑量組、胃復(fù)方高劑量組、氟尿嘧啶組、氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組的抑瘤率分別為21.06%、45.89%、30.65%、59.42%。氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組效果最好。2）瘤重顯示與模型組比較，各藥物組瘤重均有不同程度的減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;其中氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組降低明顯。3）腫瘤生長(zhǎng)曲線圖顯示與模型組比較，各藥物組瘤體積均有一定程度縮小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。4）與模型組比較，藥物組均能下調(diào)c-Myc、hTERT蛋白表達(dá)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組下降最明顯。結(jié)論：胃復(fù)方能夠抑制人胃癌BGC-823細(xì)胞BALB/c-nu裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)，可能與下調(diào)c-Myc、hTERT蛋白表達(dá)有關(guān)，并且與氟尿嘧啶聯(lián)合用藥有增效作用。

關(guān)鍵詞 胃復(fù)方;胃癌BGC-823細(xì)胞;移植瘤;c-Myc基因;人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因

Abstract Objective：To observe tumor inhibiting effect of Weifu Formula in nude mice with human gastric cancer BGC-823 and its effects on gene expression of C-Myc and hTERT，and to evaluate the effects of Weifu Formula and its possible mechanism of action.Methods：The nude mouse model with human gastric cancer BGC-823 was established.A total of 40 tumor-bearing mice were performed successful modeling for nude mice with subcutaneous xenograft tumor of gastric cancer.They were randomly divided into 5 groups（n=8）：model group，low dose Weifu Formula group，high dose Weifu Formula group，5-Fu group，and 5-Fu combined with Chinese materia medica group，with continuous administration for 4 weeks.Long diameter and short diameter of tumor were recorded every 7 d，tumor volume was calculated and tumor growth curve chart was drawn.All the tumor-bearing mice were killed after 4 weeks of administration，and the subcutaneous xenograft tumor was resected.The tumor was weighed and tumor inhibition rate was calculated.Protein expression of C-Myc and hTERT in tumor tissue was detected by immunohistochemistry.Results：1）Weifu Formula had obvious inhibiting effect on xenograft tumor in nude mice with human gastric cancer BGC-823 and there was dose-effect relationship between different doses.The tumor inhibition rates in the low dose Weifu Formula group，the high dose Weifu Formula group，the 5-Fu group and the 5-Fu combined with Chinese materia medica group were 21.06%，45.89%，30.65% and 59.42%，respectively.Efficacy in the 5-Fu combined with Chinese materia medica group was the best.2）In terms of tumor weight compared with the model group，the tumor weight in each medicine group showed different degrees of decrease（P<0.05）.Among them，the decrease in the 5-Fu combined with Chinese materia medica group was significant.3）The tumor growth curve chart showed that the tumor volume in each medicine group was decreased to some extent compared with the model group（P<0.05）.4）In comparison with the model group，the immunohistochemical results showed that the expression levels of C-Myc and hTERT proteins were decreased in each medicine group（P<0.05），among which the decrease in the 5-Fu combined with Chinese materia medica group was the most obvious.Conclusion：Weifu Formula can inhibit the growth of subcutaneous xenograft tumor in BALB/c-nu nude mice with human gastric cancer BGC-823 cell，which may be related to the down-regulation of C-Myc and hTERT protein expression.And it has synergistic effect when combining with 5-Fu for medication，indicating that Weifu Formula has certain efficacy in human gastric cancer.

Key Words Weifu Formula; BGC-823 cell of gastric cancer; Xenograft tumor; C-Myc; hTERT

中圖分類號(hào)：R242;R735.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.10.016

據(jù)最新流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示，2015年我國(guó)胃癌估計(jì)發(fā)病率為679.1/10萬，估計(jì)死亡率為498.0/10萬，高居惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率的第2位[1]。鑒于胃癌早期癥狀隱匿，診斷較困難，導(dǎo)致國(guó)內(nèi)胃癌的早期確診率低于10%[2]，就診時(shí)超過8O%的胃癌患者為進(jìn)展期胃癌[3]。常規(guī)化療不良反應(yīng)大，長(zhǎng)期治療會(huì)導(dǎo)致患者耐受性下降，影響臨床療效[4]。近年來國(guó)內(nèi)外研究者一直致力于靶向及中草藥治療胃癌途徑的探索，為臨床治療胃癌開辟新的思路。胃復(fù)方作為湖南省腫瘤醫(yī)院中醫(yī)科經(jīng)驗(yàn)方，臨床運(yùn)用治療胃癌患者取得較好療效，故探討其作用機(jī)制具有重要臨床指導(dǎo)意義。我們課題組在一前期體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)胃復(fù)方有抑制胃癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)凋亡作用[5]，本研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探討胃復(fù)方的抑瘤作用及可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物與細(xì)胞株 BALB/c-nu裸鼠50只，4～6周齡，體質(zhì)量（18±2）g，雄性，SPF級(jí)，購自湖南省腫瘤醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心[使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2014-0016、生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2011-0003）]，飼養(yǎng)于恒溫（22～24 ℃）、恒濕（40% ～60%）、足量光照（12 h）的IVC籠具中，自由攝入標(biāo)準(zhǔn)的裸鼠飼料及蒸餾水，通過檢疫期1周后開始實(shí)驗(yàn)。人胃癌BGC-823細(xì)胞株（武漢博士德公司）。

1.1.2 藥物 胃復(fù)方主要組成有黃芪、黨參、白術(shù)、茯苓、香附、郁金、蘇木、莪術(shù)、蚤休、半枝蓮、女貞子、菟絲子、白花蛇舌草等。所有生藥購自湖南省腫瘤醫(yī)院中藥房，并經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院教研室鑒定并制成含生藥濃度為1.3 g/mL的湯劑，灌裝滅菌后置于4 ℃冰箱中備用。

1.1.3 試劑與儀器 尿嘧啶注射液（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)H31020593），RPMI-1640培養(yǎng)基、FBS、胰蛋白酶（Hyclone公司）;二步法試劑盒、DAB試劑盒（中衫金橋）、中性樹膠（Sigma）;蘇木素、磷酸緩沖鹽溶液（Phosphate Buffer Saline，PBS）、枸櫞酸鹽緩沖液（Wellbio）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 1）分組：篩選瘤體積均一的成瘤裸鼠40只，按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為模型對(duì)照組、胃復(fù)方低、高劑量組、氟尿嘧啶組、氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組，每組8只。2）細(xì)胞培養(yǎng)：將人胃癌BGC-823細(xì)胞復(fù)蘇后，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，于飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（37 ℃，5%CO2）。2～3 d更換培養(yǎng)液，按1：2進(jìn)行傳代培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（2×107/L濃度細(xì)胞懸液）用于實(shí)驗(yàn)。3）肺癌皮下移植瘤模型建立：裸鼠皮下接種在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，將配置好的濃度為2×107個(gè)/mL的人胃癌BGC-823單細(xì)胞懸液以0.2 mL/只接種于4只裸鼠右側(cè)腋窩皮下。裸鼠接種后每天觀察，取2只皮下游標(biāo)卡尺可測(cè)長(zhǎng)徑約1.5 cm且腫瘤生長(zhǎng)良好的荷瘤鼠。予以10%水合氯醛麻醉后斷髓安樂死，剝離瘤塊，制備成1 mm3左右小塊，作鼠間傳代至第3代（2只/代）。然后用套針將腫瘤組織接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下，建立移植瘤模型。接種后觀察腫瘤生長(zhǎng)情況，約7 d，再按荷瘤鼠精神狀態(tài)及瘤體積大小進(jìn)行篩選，精神狀態(tài)差、瘤體積過大及未成瘤者不予入選。

1.2.2 給藥方法 根據(jù)人與小鼠體表面積換算法，小鼠生藥劑量為0.52 g（臨床劑量）作為高劑量組，低劑量組為0.26 g。模型組予以生理鹽水灌胃，0.2 mL/次，2次/d，5次/周，并與生理鹽水腹腔注射，0.2 mL/次，2次/周，連續(xù)4周。低、高劑量組分別以胃復(fù)方0.26 g/20 g、0.52 g/20 g灌胃，并與生理鹽水腹腔注射;氟尿嘧啶組腸以生理鹽水灌胃，并給予氟尿嘧啶20 mg/kg腹腔注射;氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組予以胃復(fù)方0.52 g/20 g灌胃，并予以氟尿嘧啶20 mg/kg腹腔注射，以上給藥方法及時(shí)間均同前。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 荷瘤鼠的一般情況觀察：每日上午9點(diǎn)和下午4點(diǎn)觀察荷瘤鼠的飲食、精神狀態(tài)、活動(dòng)度、反應(yīng)度、皮膚及二便情況。同時(shí)每隔7 d稱量荷瘤鼠體質(zhì)量觀察體質(zhì)量變化。

荷瘤鼠瘤體積的測(cè)定：實(shí)驗(yàn)過程中，每隔7 d測(cè)一次裸鼠瘤體的長(zhǎng)徑（a）、短徑（b），計(jì)算腫瘤體積（V），繪制腫瘤生長(zhǎng)變化曲線圖。腫瘤體積具體計(jì)算公式：V=1/2ab2。

測(cè)量瘤體質(zhì)量及計(jì)算抑瘤率：末次用藥24 h后對(duì)荷瘤鼠實(shí)施安樂死，無菌環(huán)境剝離瘤體，稱量瘤質(zhì)量。計(jì)算抑瘤率IRTW，計(jì)算公式為IRTW=（W生理鹽水組-W給藥組）/W生理鹽水組×100%。

免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)各組荷瘤鼠C-Myc、人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）基因的表達(dá)，具體步驟按試劑盒說明進(jìn)行，樣本用10%中性甲醛固定過夜，石蠟包埋、切片，切片常規(guī)脫蠟和水化，滴加山羊血清封閉，室溫孵育20 min，傾去。滴加一抗，稀釋c-Myc或 hTERT單克隆抗體，4 ℃過夜。滴加生物素化二抗，37 ℃孵育30 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片鏡檢。判定標(biāo)準(zhǔn)：鏡下觀察細(xì)胞核（或胞質(zhì)）內(nèi)出現(xiàn)深淺不一的棕色顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞。普通電腦采像;采用IPP（Image-Pro-Plus）軟件分析，目標(biāo)觀測(cè)值為平均IOD[視野下的陽性表達(dá)部位的累積吸光度和視野下樣品面積的比值（針對(duì)400倍視野的圖）]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 荷瘤鼠一般情況觀察 干預(yù)前，選取接種7 d后體質(zhì)量及瘤體體積比較無明顯差異的荷瘤鼠隨機(jī)分組，保證各組基線水平一致，具有可比性。干預(yù)后觀察荷瘤鼠，模型組荷瘤鼠精神稍差、皮膚褶皺、活動(dòng)欠佳，明顯消瘦。用藥組荷瘤鼠，精神狀態(tài)、飲食、飲水、二便、皮膚及活動(dòng)均良好，體質(zhì)量雖有不同程度下降，但較模型組維持較好。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程未出現(xiàn)荷瘤鼠死亡，后期各組均有1只或者2只荷瘤鼠瘤體輕度破潰，但不影響瘤體體積。

2.2 藥物干預(yù)對(duì)荷瘤鼠瘤體積變化的影響 依據(jù)腫瘤生長(zhǎng)曲線可看出，藥物干預(yù)2周內(nèi)，腫瘤生長(zhǎng)速度相當(dāng)，之后腫瘤生長(zhǎng)出現(xiàn)不同趨勢(shì)，其中模型對(duì)照組瘤體體積增長(zhǎng)速度最快，其次是胃復(fù)方低劑量組、氟尿嘧啶組、高劑量組、氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組。見圖1;接種35 d（灌胃28 d）與模型組比較，各藥物組瘤體積均有不同程度縮小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），氟尿嘧啶組與氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3 藥物干預(yù)對(duì)荷瘤鼠瘤體質(zhì)量及抑制率的影響 ?各藥物組與模型組比較，平均瘤重有一定程度減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），氟尿嘧啶組與氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中瘤重大小按順序排列：模型組>胃復(fù)方低劑量組>氟尿嘧啶組>胃復(fù)方高劑量組>氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組;抑瘤率方面，氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組>胃復(fù)方高劑量組>氟尿嘧啶組>胃復(fù)方低劑量組。見表2，圖2。

2.4 藥物干預(yù)后各組荷瘤鼠C-Myc、hTERT蛋白的表達(dá) 鏡下觀察c-Myc蛋白表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色或者淡黃色顆粒定位于細(xì)胞質(zhì)中;hTERT蛋白呈棕黃色或淡黃色顆粒定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中。見圖3。與模型對(duì)照組比較，胃復(fù)方低劑量組、胃復(fù)方高劑量組、氟尿嘧啶組、氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組c-Myc、hTERT蛋白表達(dá)的IOD值均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組與氟尿嘧啶組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;按IOD值得大小排列順序?yàn)槟Ｐ蛯?duì)照組>胃復(fù)方低劑量組>氟尿嘧啶組>胃復(fù)方高劑量組>氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組。藥物組能下調(diào)C-Myc、hTERT蛋白表達(dá)，以氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組降低最明顯。見表3。

3 討論

胃癌是常見惡性消化道腫瘤之一，其早期診斷率低，大部分錯(cuò)失最佳手術(shù)時(shí)機(jī)，加之Ⅱ期以上術(shù)后患者復(fù)發(fā)率高，總生存率未有明顯突破[6]，需要尋找新的臨床解決思路。而中藥在改善患者臨床癥狀、延長(zhǎng)生存期、提高生命質(zhì)量等方面具有獨(dú)到優(yōu)勢(shì)[7]。胃復(fù)方為湖南省腫瘤醫(yī)院中醫(yī)科經(jīng)驗(yàn)方，經(jīng)過30余年的臨床實(shí)踐，其對(duì)胃癌患者具有較好的臨床療效[8-9]，本課題組前期也研究證實(shí)胃復(fù)方含藥血漿能抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)凋亡。對(duì)其抗癌機(jī)制進(jìn)一步探索，為臨床提供理論依據(jù)具有重大意義。

本研究建立人胃癌BGC-823細(xì)胞BALB/c-nu裸鼠移植瘤模型，通過藥物干預(yù)后觀察荷瘤鼠一般情況及瘤體體積的變化，結(jié)合免疫組織化學(xué)檢測(cè)瘤體組織c-Myc、hTERT基因表達(dá)水平，探索胃復(fù)方對(duì)人胃癌抑制作用的可能機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，瘤重方面，與模型對(duì)照組比較，藥物組荷瘤鼠的瘤重均有不同程度降低，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;抑瘤率按大小順序排列：氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組>胃復(fù)方高劑量組>氟尿嘧啶組>胃復(fù)方低劑量組;依據(jù)腫瘤生長(zhǎng)曲線圖，我們發(fā)現(xiàn)胃復(fù)方組的瘤體體積小于模型對(duì)照組，并隨著濃度的增加，腫瘤抑瘤率也隨之提高，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，胃復(fù)方高劑量組與氟尿嘧啶組及聯(lián)合組的瘤體體積比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組的瘤體積明顯減小，說明胃復(fù)方在體內(nèi)能夠抑制人胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，且呈劑量依賴性。免疫組織化學(xué)結(jié)果表明與模型對(duì)照組比較，藥物組均能夠下調(diào)c-Myc、hTERT基因表達(dá)，以氟尿嘧啶聯(lián)合中藥組下調(diào)最明顯，說明胃復(fù)方的抑瘤作用可能與下調(diào)c-Myc、hTERT基因表達(dá)有關(guān)，胃復(fù)方對(duì)氟尿嘧啶有增效作用。

c-Myc是由原癌基因myc編碼的一種轉(zhuǎn)錄因子，既能促進(jìn)細(xì)胞增殖，又能促進(jìn)細(xì)胞凋亡，是多個(gè)細(xì)胞信號(hào)通路的靶基因。在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，下調(diào)c-Myc蛋白表達(dá)可抑制胃癌增殖，誘導(dǎo)凋亡[10-14]。c-Myc還可調(diào)控端粒酶活性，其水平升高將誘導(dǎo)端粒酶的活化進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[15]，而hTERT是端粒酶催化亞單位，其表達(dá)與端粒酶活性相平行，是端粒酶活性的決定因素。研究發(fā)現(xiàn)，hTERT的異常表達(dá)與多種腫瘤密切相關(guān)[16]。研究發(fā)現(xiàn)，hTERT mRNA及蛋白在胃癌組織及癌旁組織中高表達(dá)[17-19]，說明其與胃癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，hTERT可能通過提高FOXO3a泛素化和上調(diào)ITGB1即hTERT/MDM2-FOXO3a-ITGB1細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)控抑制胃癌細(xì)胞增殖及侵襲[20]。說明c-Myc及hTERT基因表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)治療胃癌的療效及預(yù)后指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，胃復(fù)方干預(yù)后有抑瘤作用，呈劑量依賴性，聯(lián)合氟尿嘧啶后，其抑制作用明顯得到增強(qiáng)，與模型對(duì)照組比較下調(diào)C-Myc、hTERT基因表達(dá)，推測(cè)機(jī)制可能與其下調(diào)c-Myc、hTERT基因表達(dá)，調(diào)控相關(guān)腫瘤細(xì)胞通路有關(guān)，有待進(jìn)一步探索。

參考文獻(xiàn)

[1]Feng RM，Zong YN，Cao SM，et al.Current cancer situation in China：good or bad news from the 2018 Global Cancer Statistics？[J].Cancer Commun（Lond），2019，39（1）：22.

[2]廖專，孫濤，吳浩，等.中國(guó)早期胃癌篩查及內(nèi)鏡診治共識(shí)意見（2014年4月·長(zhǎng)沙）[J].胃腸病學(xué)，2014，19（7）：408-427.

[3]余佩武，羅華星.腹腔鏡胃癌根治術(shù)：未來治療胃癌的標(biāo)準(zhǔn)手術(shù)[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35（18）：1889-1892.

[4]王保小.參苓白術(shù)散在化療治療中晚期胃癌患者中運(yùn)用效果觀察[J].中國(guó)藥物與臨床，2019，19（7）：1106-1107.

[5]胡亞，李東芳.胃復(fù)方含藥血漿對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞株增殖及PPARγ基因活性的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2016，24（3）：178-181.

[6]Khne CH，Bedenne L，Carrato A，et al.A randomised phase III intergroup trial comparing high-dose infusional 5-fluorouracil with or without folinic acid with standard bolus 5-fluorouracil/folinic acid in the adjuvant treatment of stage III colon cancer：the Pan-European Trial in Adjuvant Colon Cancer 2 study[J].Eur J Cancer，2013，49（8）：1868-1875.

[7]劉沈林.中醫(yī)藥治療胃癌臨床述評(píng)[J].江蘇中醫(yī)藥，2019，51（4）：1-5.

[8]樊江麗，李東芳，焦蕉，等.胃復(fù)方聯(lián)合化療對(duì)中晚期脾虛瘀毒型胃癌患者生活質(zhì)量的影響[J].中醫(yī)雜志，2015，56（2）：120-123.

[9]付艷，杜楠，孫君重，等.香菇多糖聯(lián)合化學(xué)療法治療胃癌的療效觀察[J].中國(guó)醫(yī)藥，2012，7（10）：1248-1250.

[10]Choi JS，Seo J，Jung EJ，et al.c-MYC amplification in mucinous gastric carcinoma：a possible genetic alteration leading to deeply invasive tumors[J].Anticancer Res，2012，32（11）：5031-5037.

[11]Luo J，Li YN，Wang F，et al.S-adenosylmethionine inhibits the growth of cancer cells by reversing the hypomethylation status of c-myc and H-ras in human gastric cancer and colon cancer[J].Int J Biol Sci，2010，6（7）：784-795.

[12]林雅靜，李天捷，王華，等.GREM1對(duì)胃癌細(xì)胞增殖遷移的作用[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2019，37（6）：418-422.

[13]宋魏，崔云，張建波，等.黃芪解毒方對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖、凋亡及C-myc基因表達(dá)的影響[J].世界中醫(yī)藥，2018，13（3）：711-714.

[14]鄧海霞，陳更新，周奧強(qiáng)，等.養(yǎng)正散結(jié)湯對(duì)裸鼠胃癌移植瘤生長(zhǎng)及l(fā)et-7a/c-Myc表達(dá)的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2017，25（10）：738-741，746.

[15]Dasgupta P，Sengupta SB.Role of diallyl disulfide-mediated cleavage of c-Myc and Sp-1 in the regulation of telomerase activity in human lymphoma cell line U937[J].Nutrition，2015，31（7-8）：1031-1037.

[16]Killedar A，Stutz MD，Sobinoff AP，et al.A Common Cancer Risk-Associated Allele in the hTERT Locus Encodes a Dominant Negative Inhibitor of Telomerase[J].PLoS Genet，2015，11（6）：e1005286.

[17]Liu Z，Li Q，Li K，et al.Telomerase reverse transcriptase promotes epithelial mesenchymal transition and stem cell-like treits in cancer cell[J].Oncogene，2013，32（36）：4203-4213.

[18]劉麗，覃宇周，葛蓮英.端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)癌癥防治雜志，2015，7（6）：398-402.

[19]戚紅霞，潘曉燕.CD133、β-catenin和hTERT在胃癌及癌前病變中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2017，26（9）：981-985.

[20]Hu C，Ni Z，Li B，et al.hTERT promotes the invasion of gastric cancer cells by enhancing FOXO3a ubiquitination and subsequent ITGB1 upregulation[J].Gut，2017，66（1）：31-42.

（2018-10-16收稿 責(zé)任編輯：楊覺雄）