LAMP技術在林蛙油摻假檢測中的應用

陳麗晶 范怡婷 徐銘昆 陳宇飛

◆摘 要：林蛙具有重要經濟意義和醫療保健價值，干制的雌蛙輸卵管入藥后稱林蛙油。具有極高的營養保健功能，近年來已經以不同的產品形式走進了人們的日常生活。但隨著其營養價值的發掘，林蛙油摻假造假行為泛濫，本文通過對林蛙、黑斑蛙、中華蟾蜍、青蛙和牛蛙的DNA分子進行提取，研究林蛙油摻假LAMP檢測技術，旨在提供準確快捷的林蛙油檢測方法，為基層、商檢、食品檢驗、檢疫單位、生化企業、科研院所、海關出入境檢疫局等機構進行林蛙油摻假檢測提供幫助。

◆關鍵詞：林蛙油；摻假；LAMP技術

1 前言

林蛙為名貴的動物藥材，林蛙油本身也具有延緩衰老、抗疲勞、滋陰養顏、提高機體免疫力功能和抗應激能力，是一種滋補養生品。而LAMP分子生物學檢測方法在食源性致病菌檢測、動物源性食品安全檢測、病毒檢測等方面都作出了重大貢獻，研究林蛙油摻假LAMP檢測技術，希望提供準確快捷的林蛙油檢測方法。

2 林蛙油摻假現狀

林蛙油因其重要的醫療保健價值，在國際市場上價格昂貴，有“軟黃金”之稱。這也導致了市場上出現很多假冒偽劣產品，其中主要以中華蟾蜍輸卵管、紅肚蛤蟆輸卵管、牛蛙油、青蛙油、魚類精巢為主。因此，建立一種新型快速、簡便、靈敏而高通量的檢測方法，進行林蛙油摻假檢測刻不容緩。

3 傳統林蛙油檢測

傳統的林蛙油檢測方法有很多，包括：外觀鑒定、膨脹度鑒定和質地鑒定等這些傳統林蛙油檢測主要以形態學為基礎從林蛙油的來源，性狀，理化等方面來進行鑒別。但是這些鑒別方法容易受到遺傳、環境、人類活動、以及林蛙的生長發育過程等因素的影響。使得最終鑒定結果不穩定，可靠性更低。而分子生物學檢測方法則不容易受周圍環境因素、器官組織差異及生物體發育階段的影響，應用性更強。

4 LAMP技術

4.1 LAMP技術簡介

LAMP技術是一種新的體外擴增特異DNA片段分子生物技術。是一種“簡便、快速、精確、低價”的基因擴增方法。該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優于PCR技術，不依賴任何專門的儀器設備實現現場高通量快速檢測，檢測成本遠低于熒光定量PCR。

4.2 LAMP技術在摻雜摻假食品檢測中的應用

近年來LAMP技術在摻假食品的檢測研究多為肉類真偽鑒別，也有一些研究了動植物成分摻雜。真偽鑒別常以線粒體細胞色素b基因、D-Loop區、125rRNA、165rRNA等為靶基因。這是由于線粒體DNA具有廣泛種內、種間多態性和高度的物種特異性的特點，并且具有拷貝數多，加熱時不容易被徹底破壞，存活機率大，更容易被擴增，不會發生基因重組的優勢。因此在選擇靶基因時往往選擇線粒體DNA而非核DNA。

4.3 LAMP技術在摻假林蛙油檢測中的應用

LAMP技術對摻假林蛙油的檢測是通過在Gaaebznk上找到林蛙、中華蟾蜍、牛蛙、青蛙的保守序列，采用在線LAMP引物設計軟件對每種樣品分別設計5組特異引物；進行最佳引物篩選，選出反應時間短、擴增效率高的引物；將篩選出的最佳引物進行特異性驗證，初步建立林蛙、中華蟾蜍、牛蛙、青蛙快速檢測體系，便可分別制作出單一品種摻假檢測試劑盒。

4.4 LAMP檢測技術的意義

環介導等溫擴增技術自2000年開發至今已有18年，該技術逐漸被越來越多的學者所接受，尤其適合在實驗條件簡陋和技術比較落后的地區推廣和應用。隨著對LAMP技術研究的不斷深入，我們將不斷完善、發展這種新型的技術，使它在食品安全檢測方面發揮更大地優勢，得到更全面的應用。實驗證明，LAMP法檢測肉類食品切實可行，在食品安全快速檢測方面將具有極大的應用前景。

5 總結

LAMP技術作為一種核酸擴增技術，在食品安全檢測領域已逐漸成為一種可靠的分子生物學檢測手段。目前，LAMP技術的研究方向主要是研究領域的廣度和深度兩方面。廣度研究增加了LAMP技術的應用范圍，LAMP技術原本是用于醫學領域，逐漸發展到食品學、動物科學、農學等領域，建立了相關一系列的LAMP檢測體系，食品摻雜摻假、食品過敏原、轉基因食品等方向研究較多；深度研究主要探討了LAMP技術的原理分析、技術優化。將LAMP與其他技術相結合，往往能起到優勢互補的作用?？傊?，在食品檢測領域.未來LAMP技術的發展方向依然是增加應用范圍和技術優化并行.LAMP技術依然有很大發展空間。

參考文獻

[1]方妍，賈雪巍，翁麗麗，董金香等.林蛙油的營養保健功能及其產品研究進展[J].亞太傳統醫藥，2018（09）：1.

[2]何曉華，頓玉慧，盧力等.環介導等溫擴增技術在腸桿菌科致病菌檢測中的研究進展[J].食品科學，2014，35（19）：312-317.

[3]任君安.羊肉及其制品中摻假動物源性成分數字PCR技術精準定量研究[D].北京：中國農業大學，2017.

[4]王衛芳，樓前，陳宇飛等.林蛙油摻假分子生物學檢測方法的研究[J].吉林農業，2018（09）：20.

[5]楊柳，張一，邊忠博，陳宇飛.LAMP技術在食源性致病菌檢測中的應用現狀，2016（12）：066.

作者簡介

陳麗晶（1997—），女，在讀本科生，研究方向：食品質量與安全專業。

通訊作者：陳宇飛，本科學歷，教授，研究方向：食品微生物及安全檢測。

資助項目：吉林工商學院大學生創新創業訓練計劃資助項目《林蛙油摻假LAMP檢測方法的建立》（201811261021）。