五種中藥材乙醇提取物對(duì)植物病原真菌的抑制作用分析

李德成 劉慶燕

摘 要：【目的】探究五種中藥材乙醇提取物對(duì)植物病原真菌的抑制作用分析。【方法】在本次探究中，我們選取了山豆根、白頭翁、紫花地丁、穿心蓮以及青皮五種中藥材，制備其乙醇提取物，研究提取物對(duì)于馬鈴薯干腐病、甘藍(lán)枯萎病、棉花枯萎病以及蘋果輪紋病等多種植物真菌病的抑制作用。【結(jié)果】在本次探究中，通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，所選取的中藥材提取液對(duì)于植物病原真菌都有不同效果的抑制作用，有的中藥材乙醇提取液對(duì)某些植物病原真菌表現(xiàn)出了非常強(qiáng)烈的抑制作用。【結(jié)論】所選取的五種中藥材乙醇提取液對(duì)所研究的植物病原真菌具有抑制作用，且有的中藥提取液對(duì)某種植物病原真菌表現(xiàn)出了強(qiáng)烈的抑制作用，可以抑制植物真菌病的發(fā)展，有利于果蔬的生長(zhǎng)與收獲。

關(guān)鍵詞：中藥材提取物;植物病原真菌;抑制作用

植物病原真菌可以引起植物真菌病的發(fā)生，一種植物上甚至?xí)l(fā)生幾種到十幾種的植物真菌病。據(jù)調(diào)查顯示，植物真菌病占植物病害的比例已經(jīng)達(dá)到了百分之七十到百分之八十，無(wú)論對(duì)植物本身還是對(duì)于農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收益都帶來(lái)了嚴(yán)重的傷害。一直以來(lái)，化學(xué)農(nóng)藥都是控制植物病害的首選手段，并且取得了良好的效果。但是近年來(lái)，隨著植物病原真菌抗藥性的不斷增加，化學(xué)農(nóng)藥的有效率有了一定的下降，開發(fā)安全有效的新型抑制病原真菌的藥物成為了亟待解決的問(wèn)題。在之前的研究中，我們可以發(fā)現(xiàn)某些中藥乙醇提取物對(duì)于抑制細(xì)菌有很好的作用，且毒性低安全性高，所以大家開始關(guān)注中藥材乙醇提取物對(duì)于植物病原真菌的抑制作用與效果[1]。

在本次研究中，我們選擇了山豆根、白頭翁、紫花地丁、穿心蓮以及青皮五種中藥材進(jìn)行了研究，通過(guò)查閱資料，可以知道上述五種中藥材在抗炎、抗菌以及抗腫瘤等方面都有很好的療效。在本次研究中，我們研究了上述五種中藥材對(duì)于某些植物病原真菌的抑制作用，現(xiàn)將研究?jī)?nèi)容報(bào)告如下。

一、資料與方法

1 一般資料

本次探究中，選取的藥物為：山豆根、白頭翁、紫花地丁、穿心蓮以及青皮。選取的植物病原真菌為馬鈴薯干腐病菌、桃褐腐病菌、甘藍(lán)枯萎病菌、棉花枯萎病菌、蘋果輪紋病菌、番茄灰霉病菌以及小麥赤霉病菌。

2 方法

2.1中藥材乙醇提取液的制備

首先將山豆根、白頭翁、紫花地丁、穿心蓮以及青皮五種藥物進(jìn)行清洗，40℃進(jìn)行烘干，然后粉碎、過(guò)篩。分別選取每種藥物粉末各250克，然后分別加入1500ml75%的乙醇，進(jìn)行40℃超聲30分鐘，80℃加熱回流共1小時(shí)，將上述內(nèi)容重復(fù)兩次。最后經(jīng)過(guò)抽濾、減壓蒸餾以及定容等步驟后制成儲(chǔ)備液[2]。

2.2測(cè)定中藥材乙醇提取物對(duì)于植物病原真菌的敏感度

在本次探究中，我們采用菌絲生長(zhǎng)速率法對(duì)中藥提取液對(duì)于植物病原真菌的抑制作用進(jìn)行檢測(cè)。首先，分別取5ml的儲(chǔ)備液與蒸餾水加到培養(yǎng)基中，搖勻，分別制成加藥培養(yǎng)基與空白培養(yǎng)基，進(jìn)行對(duì)照。然后取菌病接種到先前制備的培養(yǎng)基中，置于28℃中進(jìn)行培養(yǎng)。番茄灰霉病菌、甘藍(lán)枯萎病菌、蘋果綸紋病菌以及小麥赤霉病菌四種真菌在12小時(shí)候后每12小時(shí)進(jìn)行菌落直徑的測(cè)量，剩余三種植物病原真菌在36小時(shí)后每12小時(shí)進(jìn)行菌落直徑的測(cè)量。采用計(jì)算抑制率的公式進(jìn)行抑制作用的比較與分析。

2.3觀察使用中藥材乙醇提取物后對(duì)于植物病原真菌形態(tài)的影響

將番茄灰霉病菌、甘藍(lán)枯萎病菌、蘋果綸紋病菌以及小麥赤霉病菌進(jìn)行培養(yǎng)，四十八小時(shí)后進(jìn)行制片與染色，然后在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察;將剩余三種植物病原真菌進(jìn)行培養(yǎng)，九十六小時(shí)后進(jìn)行制片與染色，然后在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。

3 觀察指標(biāo)

本次的觀察指標(biāo)為中藥材乙醇提取液對(duì)于植物病原真菌的抑制作用以及以及其對(duì)真菌形態(tài)的影響。

4 數(shù)據(jù)分析

本次數(shù)據(jù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS14.0軟件進(jìn)行，計(jì)量資料采用x±s表示，采用t進(jìn)行檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2進(jìn)行檢驗(yàn)。

二、結(jié)果

1 中藥材乙醇提取液對(duì)于植物病原真菌的抑制作用比較

通過(guò)探究可以發(fā)現(xiàn)[3]，五種中藥材對(duì)于植物病原真菌均有一定的抑制作用，抑制作用的強(qiáng)弱各不相同。在相同濃度的情況下進(jìn)行比較，青皮在甘藍(lán)枯萎病菌跟馬鈴薯干腐病菌中的抑制最好，有效抑制率達(dá)到50%以上;青皮在蘋果輪紋病菌跟棉花枯萎病菌中的抑制作用最好，有效抑制率達(dá)到54%以上;青皮在小麥赤霉病菌中的抑制作用最好，有效抑制率達(dá)52%以上。山豆根在番茄灰霉病菌中的抑制作用最好，有效率達(dá)50%以上。除此之外，我們可以發(fā)現(xiàn)穿心蓮對(duì)桃褐腐病菌的抑制作用顯著，有限抑制率甚至達(dá)到了75%以上。

2 中藥材提取液對(duì)真菌形態(tài)的影響

通過(guò)對(duì)比使用中藥材乙醇提取液前后的變化，我們可以發(fā)現(xiàn)在使用前后真菌的形態(tài)發(fā)生了不同程度的變化。其中，馬鈴薯干腐病菌菌絲出現(xiàn)了明顯的消融斷裂狀態(tài);棉花枯萎病菌菌絲出現(xiàn)了一定程度的彎曲以及斷裂;小麥赤霉病菌跟番茄灰霉病菌的菌絲出現(xiàn)了扭曲以及分支增多的現(xiàn)象;蘋果綸紋菌出現(xiàn)了斷裂以及分支增多的現(xiàn)象;而桃褐腐病菌的菌絲出現(xiàn)了嚴(yán)重的扭曲現(xiàn)象。

三、討論

山豆根在中藥上屬于清熱解毒的藥物，在其現(xiàn)代研究中發(fā)現(xiàn)其對(duì)金黃色葡萄球菌以及白色念珠菌具有抑制作用，對(duì)結(jié)核桿菌、皮膚致病的真菌具有抑制作用[4]。在本次的探究中，用山豆根的乙醇提取液檢查對(duì)于所選取植物病原真菌的抑制作用，發(fā)現(xiàn)山豆根提取液對(duì)于我們所選取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，其中對(duì)于番茄灰霉病菌的抑制率達(dá)到了50%以上，抑制作用顯著。

白頭翁在中藥上屬于清熱解毒的藥物，在其現(xiàn)代研究中發(fā)現(xiàn)其煎劑對(duì)于寄生蟲（阿米巴原蟲）具有顯著地抑制作用，并且研究人員通過(guò)不停地研究發(fā)現(xiàn)、白頭翁乙醇提取液以及煎劑可以抑制金黃色葡萄球菌、白念珠菌以及傷寒桿菌[5]。在本次探究中，我們檢驗(yàn)白頭翁乙醇提取液對(duì)于植物病原真菌的抑制作用，發(fā)現(xiàn)對(duì)于所選取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，沒(méi)有對(duì)某一種植物病原真菌有特別的抑制作用。

紫花地丁在中藥上屬于清熱解毒的藥物，治療毒蛇咬傷方面多有應(yīng)用，在其現(xiàn)代研究中，發(fā)現(xiàn)有明顯的抗菌作用，對(duì)于金黃色葡萄球菌、結(jié)核桿菌、肺炎球菌以及皮膚真菌等多種細(xì)菌真菌均具有抑制作用[6]。在本次的探究中，我們用紫丁地花乙醇提取液檢驗(yàn)對(duì)于植物病原真菌的檢驗(yàn)作用，發(fā)現(xiàn)紫丁地花乙醇提取液對(duì)于所選取的植物病原真菌均具有抑制作用，沒(méi)有對(duì)某一種植物病原真菌具有特別的抑制作用。

穿心蓮在中藥中屬于清熱解毒的藥物，在其現(xiàn)代研究中發(fā)現(xiàn)含有穿心蓮內(nèi)酯等多種化合物，其煎劑對(duì)于綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌等具有很好的抑制作用[7]。在本次的探究中，我們探究了穿心蓮乙醇提取液對(duì)于植物病原真菌的抑制作用，可以發(fā)現(xiàn)對(duì)于所選取的植物病原真菌均具有一定的抑制作用，發(fā)現(xiàn)穿心蓮乙醇提取物對(duì)于桃褐腐病菌的抑制作用尤為明顯，此結(jié)論在之前的研究中首次發(fā)現(xiàn)，本次探究再次證明并且結(jié)論一致。

青皮在中藥上屬于理氣藥，在其現(xiàn)代研究中發(fā)現(xiàn)其成分的量與陳皮不同，但是成分與陳皮比較相似。另外通過(guò)之前的研究可以發(fā)現(xiàn)它具有一定的抑菌作用。在本次的探究中，我們探究了青皮乙醇提取液對(duì)于很多植物病原真菌的抑制作用都非常顯著，例如甘藍(lán)枯萎病菌、馬鈴薯干腐病菌的抑制作用都非常顯著，抑制率均達(dá)到左右;對(duì)于棉花枯萎病菌以及蘋果綸紋菌的抑制率都達(dá)到54%以上，抑菌效果良好[8]。

四、總結(jié)

近幾年來(lái)，因?yàn)榛瘜W(xué)藥物的濫用導(dǎo)致植物病原真菌的抗藥性不斷增加，不僅給農(nóng)民帶來(lái)了嚴(yán)重的損失與巨大的痛苦，而且還對(duì)環(huán)境帶來(lái)了一定的傷害。所以，盡快研究以及使用安全有效的抑制植物病原真菌的藥物成了我們現(xiàn)在迫切需要解決的問(wèn)題。在本次探究中，我們選擇了白頭翁、紫花地丁、青皮、穿心蓮以及山豆翁五種藥物提取它們的乙醇提取液對(duì)馬鈴薯干腐病菌、桃褐腐病菌、甘藍(lán)枯萎病菌、棉花枯萎病菌、蘋果輪紋病菌、番茄灰霉病菌以及小麥赤霉病菌七種植物病原真菌的抑制作用進(jìn)行了探究。在探究中我們可以發(fā)現(xiàn)，青皮對(duì)于甘藍(lán)枯萎病菌、棉花枯萎病菌、馬鈴薯干腐病菌、小麥赤霉病菌等多種植物病菌都表現(xiàn)出了顯著的抑制作用，說(shuō)明青皮的抑制譜廣泛，抑制的真菌種類多。

通過(guò)本次的研究我們可以發(fā)現(xiàn)使用中藥乙醇提取物在一定程度上對(duì)于植物病原真菌具有抑制作用，但是由于在此方面的研究還是一個(gè)新興領(lǐng)域，相關(guān)研究還并不完善，所以有關(guān)于中藥乙醇提取物對(duì)于植物的后續(xù)傷害尚不清楚，建議繼續(xù)完善后續(xù)的研究，在效果與副作用明確后，再在社會(huì)上進(jìn)行使用與推廣。

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作者簡(jiǎn)介：李德成（1982年-），男，碩士研究生，副教授，主要從事中藥、中藥制藥教學(xué)研究。

通訊作者：劉慶燕（1981年-），女，碩士研究生，副主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)腎病治療研究。