4 種消毒劑對豬源大腸桿菌和沙門氏菌的殺滅作用對比

劉新雷

（默沙東動物保健品（上海）有限公司，上海 200233）

自2018 年以來，豬病呈現新的流行趨勢，原有的傳染性疾病沒有減少，甚至還出現了增多的趨勢，更可怕的是還有新的烈性傳染性疾病進入中國，給中國養豬業造成毀滅性的打擊。預防和控制動物傳染性疾病的發生即是一項長期而艱巨的任務，又是眼前迫在眉睫需要面對的一項挑戰。動物傳染病的發生和流行必須同時具備傳染源、傳播途徑和易感動物等三個條件[1]。因此，在預防控制動物傳染病時，除了降低易感動物易感性、消滅傳染源之外，做好生物安全，切斷病原的傳播途徑才是高效且成本最低的措施。生物安全成為我們當前預防傳染病的主要手段，科學消毒是生物安全中最重要的環節，而消毒劑的效果又是決定消毒成敗的核心因素，因此消毒劑的選擇至關重要。好的消毒藥可以在病原微生物進入動物體內前將其消滅，阻斷傳染病的傳播途徑，起到防控疾病的目的[2]。目前市場上銷售的消毒藥種類很多，其中以戊二醛類和碘制劑使用最多。

戊二醛消毒劑的作用機理：戊二醛是一種很好的蛋白質交聯劑，主要通過與菌體蛋白質中的氨基相結合讓其變性或者使蛋白質分子烷基化，進而起到破壞細菌表面蛋白受體的作用。戊二醛具有固定蛋白的作用，在戊二醛存在時能夠造成膜蛋白交聯，導致膜蛋白的構象發生改變，膜蛋白的三級結構趨于收縮。膜蛋白在交聯作用的影響下膜蛋白的流動性受到約束，使蛋白功能受到影響，進而起到殺滅細菌的作用。在堿性溶液里面，戊二醛分子之間發生聚合作用，形成醛醇型不飽和聚合物，更容易與蛋白質的賴氨酸發生交聯作用。大量的戊二醛分子滲入菌體內部，改變細胞膜的通透性，使細菌胞內的內容物外滲，導致細菌死亡[3]。碘類消毒劑的作用機理：碘類消毒劑中起殺菌作用的主要是游離碘和次碘酸。游離碘能夠迅速穿透細胞壁，次碘酸具有很強的氧化作用，對不同病原體而言，他們的殺滅作用也不盡相同。對細菌和芽孢而言，游離碘的滅活效果要高于次碘酸，而對于病毒的殺滅效果而言，次碘酸要高于游離碘。經過初步的研究推測，碘通過多種途徑跟病原體發生反應，其中主要是通過與羥基、氨基、烴基、巰基相結合導致蛋白質變性沉淀，使病原微生物滅活。

市場上銷售的以戊二醛和碘制劑為主要成分的消毒劑很多，效果也有著較大的差別，本次試驗選取國產戊二醛消毒劑、國產碘制劑消毒劑、進口復方戊二醛消毒劑、進口碘制劑消毒劑4 類，分別對大腸桿菌和沙門氏菌進行作用，收集試驗結果，評估消毒劑對常見病原的殺滅效果。

1 試驗設計

從市場上購得以下4 種消毒劑：1）國產戊二醛消毒劑；2）國產碘制劑消毒劑；3）進口復方戊二醛消毒劑；4）進口碘制劑消毒劑。按說明書要求配成現場使用的比例，敞開放置于空氣中，每天分別跟大腸桿菌菌液和沙門氏菌菌液相互作用后涂于LB 平板，12 h 后觀察菌落生長情況，并且與對照組進行比較，記錄結果，進而評價消毒劑的效果。

2 材料與方法

2.1 試驗材料

2.1.1 試驗細菌

豬源大腸桿菌（分離自哈爾濱周邊某豬場）、豬源沙門氏菌（分離自哈爾濱周邊某豬場）。

2.1.2 培養基

血瓊脂培養基、LB 平板培養基、血清肉湯培養基。

2.1.3 主要試劑

蛋白胨、牛肉膏、瓊脂粉、氯化鈉、磷酸氫二鉀、甘油、吐溫-80、卵磷脂、犢牛血清、生理鹽水等。

2.1.4 主要儀器

恒溫培養箱、壓力蒸汽滅菌器、超凈工作臺、37 ℃恒溫搖床、冰箱、電子天平、移液器等。

2.1.5 消毒劑

國產戊二醛消毒劑、國產碘制劑消毒劑、進口復方戊二醛消毒劑、進口碘制劑消毒劑，均購自獸藥大市場。

2.2 試驗方法

先將在豬場采集的肛門拭子在無菌環境下劃線涂于血液瓊脂培養基，37 ℃溫箱恒溫培養18 ～24 h，革蘭氏染色鏡撿，分離得到大腸桿菌和沙門氏菌。分別接于LB 培養基進行單純培養，然后挑取典型的菌落接種于血清肉湯培養基中，恒溫37 ℃培養12 ～18 h 后，菌液出現渾濁之后菌落計數。然后用無菌生理鹽水將菌落總數測定的細菌分別制成5×105～5×106CFU/mL 懸液備用。

4 種消毒藥分別為進口復方戊二醛消毒劑，進口碘與磷酸合劑，國產戊二醛與季銨鹽合劑，國產碘制劑。按使用說明書中的比例（表1）稀釋成溶液并分組編號，敞口置于環境中，對照組不加何消毒劑，用生理鹽水代替。

分組配制消毒稀釋液完成后，每組各取消毒溶液500 μL 與稀釋好的大腸桿菌菌液500 μL 進行混合作用10 min，然后均勻涂于LB 平板上放置在37 ℃培養箱內進行培養，對照組500 μL 大腸桿菌菌液與500 μL 生理鹽水混合作用10 min后涂于LB 平板上，放入溫箱培養。按上述同樣方法再將各分組溶液與稀釋好的沙門氏菌進行作用，然后涂板進行培養，對照組500 μL 沙門氏菌菌液與500 μL 生理鹽水混合作用10 min 后涂于LB 平板上，放入溫箱培養。12 h 后觀察平板細菌生長情況。所配4 組稀釋液敞口放置7 d，每天重復上述操作。

表1 消毒劑溶液配制

3 試驗結果

每天對接種過細菌的平板進行觀察和拍照記錄，所得到的試驗結果見表2 和表3。

從表2 和表3 中可以看出，國產戊二醛組在配制成溶液后僅第1 天和第2 天沙門氏菌長菌略少于對照組，第3 天以后跟對照組沒有差別。國產碘制劑僅在配置完成后當天作用的沙門氏菌長菌略少于對照組，之后就跟對照組沒有差別。進口碘制劑和進口復方戊二醛，自配制完成后第1 天到第7 天均沒有見到長菌。

4 討論

通過上述試驗可以初步得出以下結論，市場上所購買的國產消毒劑無論是戊二醛還是季銨鹽類，在剛剛配制好之后對沙門氏菌有不是很明顯地殺滅效果，對大腸桿菌沒有效果。放置超過24 h 后對大腸桿菌和沙門氏菌都沒有任何殺滅效果。進口復方戊二醛消毒劑和進口含碘消毒劑在配制成稀釋液之后在環境中放置，在7 d 之內均可以保證對大腸桿菌和沙門氏菌有完全殺滅作用。

表2 不同消毒劑對大腸桿菌殺滅效果（與對照組相比）

表3 不同消毒劑對沙門氏菌殺滅效果（與對照組相比）

圖1 殺菌效果

近日各地豬價開始上漲，養豬業的又一個暴利時代已經來臨，眼下只要有豬就能賺取暴利，因此保證自己的豬場安全才是重中之重，而做好生物安全又是目前防控重大疫情的唯一有效手段。消毒是生物安全體系中非常關鍵的一環，也只有選擇有效的消毒劑才能保證消毒環節起到真正的作用，告別過去形式化、走過程的習慣，做到真正的有效消毒，才是生存下去高盈利的王道。

因此建議大家在這關乎生死的時刻選擇消毒產品時一定要選擇大品牌且是已經認證過的有效產品，避免出現“選擇不對，努力白費”的情況。