1例頭部蠅蛆病的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)鑒定

曾懷躍，邢凡凡，劉永棠

(香港大學(xué)深圳醫(yī)院臨床微生物及感染控制科，廣東深圳 518053)

蠅蛆，蒼蠅幼蟲感染活體動物稱之為蠅蛆病，蠅蛆感染人體頭部鮮有報(bào)道。成蟲蒼蠅將卵產(chǎn)于活組織之中，孵化出幼蟲，幼蟲以活組織為食，經(jīng)過4個發(fā)展階段：1齡幼蟲，2齡幼蟲，3齡幼蟲，最后變成成蟲。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者，女，78歲，漢族，2017年11月因患有右額基底細(xì)胞癌，頭皮有潰爛未做任何治療，突然發(fā)現(xiàn)有蟲子從頭部爬出，前來本院就診。用鑷子將蟲子取出，送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，鑒定為蠅蛆，經(jīng)去蟲、手術(shù)清創(chuàng)、抗感染、植皮等治療，情況改善后出院。

1.2儀器與材料 解剖顯微鏡：雷卡(LEICA M60),放大倍數(shù)為10×2。隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技儀器有限公司)：35 ℃。材料：無菌瓶、血培養(yǎng)瓊脂(購自法國梅里埃公司)、福爾馬林、玻片、空普通平皿。

1.3實(shí)驗(yàn)過程與方法 將取自患者頭部的6只蛆蟲，分別置于6個無菌瓶之中，其中2只各加入10%的福爾馬林1～2 mL，浸泡8 h，取出放在玻片上，在10×2倍的解剖鏡下觀察。4只加血平板內(nèi)的瓊脂(小塊)至瓶內(nèi)一半高度，蓋好蓋子后，擰松以便有空氣進(jìn)入，其中2只放入35 ℃隔水式恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察,溫箱內(nèi)的水盤要加水，以保證適當(dāng)?shù)臐穸龋硗?只放置室溫(24 ℃)培養(yǎng)，每天觀察。加福爾馬林的2只蛆蟲，經(jīng)解剖顯微鏡鏡檢可見口鉤，后氣門，見圖1。幼蟲長度為9 mm,體分13節(jié)，一對口鉤，氣門環(huán)較厚，3個氣門裂排列在一起，略彎曲，氣門鈕在氣門環(huán)下方開口處。

注：A表示口鉤；B表示后氣門

圖1顯微鏡檢驗(yàn)結(jié)果(10×2)

2 結(jié) 果

4只加血瓊脂的幼蟲中，2只幼蟲在35 ℃恒溫培養(yǎng)，取食活躍，經(jīng)培養(yǎng)4.0 d后變成了蛹，見圖2A；蛹經(jīng)培養(yǎng)3.0 d后變成了成蟲，見圖2B。2只幼蟲在室溫下培養(yǎng)，整個變化過程與35 ℃溫箱培養(yǎng)的幼蟲一樣，只是延遲了2.0 d完成全變態(tài)過程，變成成蟲，可見培養(yǎng)溫度對蠅蛆的演化過程快慢是有影響的。經(jīng)解剖顯微鏡檢驗(yàn)的幼蟲，明顯可見口鉤，后氣門，見圖1，氣門環(huán)較厚，3個氣門裂排列在一起，略彎曲，氣門鈕在氣門環(huán)下方開口處。常見蠅類成熟幼蟲(蛆)形態(tài)及幼蟲氣門，經(jīng)對比鑒定為蛆癥金蠅。

經(jīng)解剖顯微鏡鏡檢明顯可見蠅幼蟲的口鉤及后氣門，經(jīng)培養(yǎng)幼蟲變成了蛹，蛹變成了成蟲蒼蠅，經(jīng)對比鑒定為蛆癥金蠅。確診患者為蠅蛆感染。

注：A表示蛹；B表示成蟲

圖2培養(yǎng)結(jié)果圖

3 討 論

蠅是全變態(tài)生物，生活史包括卵、幼蟲、蛹、成蟲，發(fā)育過程受溫度、濕度明顯影響，卵產(chǎn)出6～12 h后孵化，若遇低溫，則時(shí)間更長。幼蟲發(fā)育可在3.0～5.0 d內(nèi)完成，不利環(huán)境可能需要7.0～10.0 d，溫度較低時(shí)甚至需要24 d；蛹在溫度較高時(shí)需要3～5 d，較冷的情況下需要7.0～14.0 d。從蟲卵發(fā)育到成蟲的時(shí)間隨著溫度而異，如16 ℃時(shí)49.0 d，20 ℃時(shí)25.0 d，25 ℃時(shí)16.0 d，30 ℃時(shí)10.0～12.0 d，35 ℃時(shí)需8.0～10.0 d，很少會短于7.0 d[1]。幼蟲有3個齡期：1齡幼蟲體長1～3 mm，僅有后氣門。蛻皮后變?yōu)?齡幼蟲，長3～5 mm，有前氣門，后氣門有2裂。再次蛻皮即為3齡幼蟲，長5～13 mm，后氣門3裂。蠅蛆體色，1～3齡由透明、乳白色變?yōu)槿辄S色，直至成熟、化蛹[2]。據(jù)國外文獻(xiàn)報(bào)道，第1幼蟲發(fā)育需要約1.8 d，第2幼蟲發(fā)育約需2.5 d，第3幼蟲發(fā)育需4.0～6.0 d[3]。從上可推斷出本研究取出用于觀察的幼蟲就為3齡初期幼蟲，可見口鉤和后氣門3裂，在35 ℃溫箱內(nèi)，經(jīng)4.0 d變成蛹，再經(jīng)3.0 d羽化為成蟲。在此過程中，筆者用福爾馬林固定，解剖顯微鏡觀察，清晰可見幼蟲的特征性結(jié)構(gòu)，體長9 mm，體分13節(jié)，一對口鉤，氣門環(huán)，氣門裂，氣門鈕特征明顯，判斷為蠅蛆，與蛆癥金蠅口鉤及氣門比對，為蛆癥金蠅，經(jīng)35 ℃溫箱培養(yǎng)，證明診斷是正確的。

在我國，較少有蠅蛆病報(bào)道，該病多發(fā)生在農(nóng)村、牧區(qū)，兒童多見，以皮膚蠅蛆病為主，頭部少見，皮膚蠅蛆病的臨床表現(xiàn)與蠅蛆對患者的機(jī)械刺激有關(guān)。蠅蛆在皮下移行時(shí)患者可感到皮下痛癢感、異物感、移行感等，有時(shí)皮下可見蠅蛆移行后遺留的痕跡。由于蠅蛆體表常帶有細(xì)菌，可能引起皮下感染。少數(shù)過敏體質(zhì)的皮膚蠅蛆病患者發(fā)病后可出現(xiàn)蕁麻疹樣皮膚損害，甚至出現(xiàn)弛張熱，嚴(yán)重者可引起休克、死亡。皮膚蠅蛆病患者嗜酸細(xì)胞百分比升高[4]；創(chuàng)傷性蠅蛆病常見有金蠅、綠蠅等[5]。國內(nèi)病例報(bào)道以臨床病癥報(bào)道為主，沒有病原體的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)室診斷證據(jù)，說服力不佳；國外曾有1例陰道陰唇蠅蛆病報(bào)道，報(bào)道病例情況全面，對實(shí)驗(yàn)室病原體診斷清楚，形成有力證據(jù)[3]。

國外報(bào)道的實(shí)驗(yàn)室鑒定方法：將取到的蠅蛆浸入沸水之中60 s，然后浸入90%的乙醇中，用無菌刀片將含有后氣門的蛆體末段切開，浸入5%的氫氧化鉀之中，輕柔加熱至100 ℃ 5 min，冷卻，用蒸餾水清洗，然后轉(zhuǎn)移到玻片之上用10倍放大的光學(xué)和解剖顯微鏡觀察[3]。美國臨床微生物學(xué)綜述在幼蟲保存與鑒定一節(jié)中則寫明：將蠅蛆浸入非常熱(足以產(chǎn)生蒸汽)但不是沸水之中30 s，這樣可防止腐爛又可維持蛆的自然顏色，然后保存在有70%～95%的乙醇之中，可最好保持幼蟲的長度和形態(tài)；不應(yīng)使用福爾馬林溶液，因?yàn)樗鼤褂紫x組織過度硬化，從而造成處理困難。而我國教材檢查蠅蛆的方法是：將蠅蛆置于10% 氫氧化鈉溶液中浸泡4～8 h，用水洗數(shù)次后鏡檢[5]。培養(yǎng)的方法是：必要時(shí)，可將獲得的幼蟲置泥土中培養(yǎng)為蛹和成蟲，以便進(jìn)一步鑒定，該方法不易控制實(shí)驗(yàn)條件、溫度、濕度，筆者沒有采用。而筆者實(shí)驗(yàn)時(shí)僅用福爾馬林浸泡蛆蟲，用解剖顯微鏡檢查可清楚看到口鉤和后氣門，用血平板內(nèi)瓊脂，切成小塊，在瓶子內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)出成蟲蒼蠅，證明筆者的鑒定方法是正確的、可行的。但是筆者認(rèn)為，應(yīng)該結(jié)合國內(nèi)外的方法，制訂出一個更加科學(xué)合理的方法。實(shí)驗(yàn)中需要注意控制溫度、濕度，瓶蓋要松開適當(dāng)，以便空氣流入；要每天觀察，以防幼蟲死亡。