重慶市永川區HPV感染情況回顧性分析

彭書生，王 科，袁永強

(重慶醫科大學附屬永川醫院檢驗科,重慶 402160)

人乳頭瘤病毒(HPV)是一類感染表皮和黏膜鱗狀上皮的小DNA病毒，具有高度種屬特異度，人類皮膚角質形成細胞/黏膜鱗狀上皮細胞是其天然宿主，目前最新研究認為HPV基因型有100多種，其中有40多種與人類生殖道感染相關。多中心、多樣本研究表明超過70%的女性一生中至少感染一次HPV，其中大部分能自身清除，也有少部分持續感染高危型HPV的女性逐步發展成宮頸上皮內瘤變(CIN)，并進一步發展為宮頸癌[1]。多個國家相關的臨床指南推薦將高危型HPV檢測用于篩查宮頸癌[2-3]。本研究對就診于本院的患者進行23種HPV常見亞型檢測，了解本地區HPV感染現狀和亞型分布情況，為HPV疫苗的選用以及宮頸癌預防提供一定的依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入標準：2015年9月至2017年5月來本院就診并接受HPV基因分型檢測的女性患者。排除標準：患者資料完整度低于80%；月經期間、嚴重的疾病或精神疾患無法配合的患者。經篩選后得到10 889例患者，分別來源于婦科、產科、計劃生育科、健康管理科、泌尿科等15個科室門診或住院部，年齡16～84歲，平均年齡43.76歲。

1.2試劑和儀器 普通PCR擴增儀(杭州博日生物技術有限公司)，恒溫金屬浴(上海嘉鵬科技有限公司)，H18全自動核酸雜交儀(深圳亞能生物技術有限公司)，高速離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司)，HPV23型基因芯片檢測試劑(深圳亞能生物技術有限公司)。

1.3標本采集及保存 患者自愿接受檢查并在采集標本前將相關事宜告知：月經正常的婦女，在月經來潮后第10～18天為最佳檢查時間，檢查前3天內不要做陰道沖洗，不要用避孕藥膏等陰道內用藥物；檢查前24 h內不應有性行為。以專用宮頸脫落細胞采集器對宮頸外口鱗-柱上皮移行區進行采樣。完成采樣后，將拭子或采集器放入專用的樣本保存管中，并貼上患者的條形碼，標本一經采集，應盡快用冰壺或泡沫箱加冰袋密封送檢，標本室溫保存不超過12 h，4 ℃保存不超過7 d，-20 ℃保存不超過3個月，避免反復凍溶。

1.4方法

1.4.1樣本DNA提取 充分震蕩洗脫宮頸刷，將洗脫液0.5 mL轉移到1.5 mL微量離心管中，13 000 r/min離心10 min，棄去上清液，保留管底的細胞塊。加入100 μL裂解液懸浮沉淀，100 ℃加熱10 min，13 000 r/min離心10 min，保留上清待用。

1.4.2PCR擴增 取PCR反應管，在管壁上做好標記，低速離心機瞬時離心2 s，然后分別加入上一步保留的上清液(即待測樣本DNA )5 μL ，PCR反應的總體積為25 μL。按以下條件進行擴增：50 ℃ 15 min；95 ℃ 10 min；94 ℃ 30 s，42 ℃ 90 s，72 ℃ 30 s，40個循環；72 ℃ 15 min。PCR擴增完成后，95 ℃變性10 min，立即置冰上2 min。

1.4.3芯片雜交和顯色 取出全自動核酸雜交儀孵育盒，依次放入標有編號的膜條(在膜條的一角用簽字筆標記)，然后將上一步中變性后產物全部加入全自動核酸雜交儀孵育盒，進行PCR膜雜交、洗膜與顯色。

1.4.4HPV結果判讀 HPV雜交膜條IC位置出現藍色，可認為此次結果有效，否則為病例取樣不成功或試驗操作不成功；經由芯片閱讀儀掃描讀取分析結果，將大于8.8灰度值(int)的檢測結果判斷為陽性。

1.5統計學處理 使用SPSS20.0統計軟件，計數資料以率表示，采用χ2檢驗進行數據分析。以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV感染 本研究所納入的10 889例患者標本中，檢出HPV感染者2 679例，感染率為24.60%。HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、81、82、83型共23種亞型均有檢出。其中單一型、二重型、多重型(三重及以上)感染例數分別為1 926、508、245例，感染率分別為17.69%、4.67%、2.25%，見表1。

表1 HPV感染情況(%)

2.2HPV感染的亞型分布 單純高危型別(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)和單純低危型別(HPV6、11、42、43、81、83)感染例數分別為1 538和388例，感染率分別為14.12%和3.56%，單純高危型檢出數是單純低危型檢出數的3.96倍。高危型(含單一、二重、多重)感染率前3位分別是HPV52、16、53，感染例數分別為588、503、296例，感染率分別為5.40%、4.62%、2.72%，在HPV感染的患者中所占比例分別為21.95%、18.78%、11.05%。低危型(含單一、二重、多重)感染率前3位分別是HPV81、43、42，感染例數分別為359、167、116例，感染率分別為3.30%、1.53%、1.07%，在感染患者中所占比例分別為13.40%、6.23%、4.33%。見表2。

在二重型感染中，高危型以HPV52和HPV68混合感染為主，其次為HPV16和HPV52(或HPV51和HPV52)混合感染、HPV52和HPV53(或HPV52和HPV58)混合感染，分別為16、14、13例。低危型以HPV43和HPV81混合感染為主，其次為HPV42和HPV43(或HPV42和HPV81)混合感染，分別為14、2例。高低危混合型以HPV52和HPV81為主，其次為HPV16和HPV81、HPV43和HPV52混合感染，分別為13、11、10例。

2.3不同年齡段感染HPV情況 根據就診患者生理及社會生活特點，將所有患者分為<20歲、20～30歲、30～40歲、40～50歲、≥50歲共5個年齡組。各年齡段總感染例數分別為15、298、545、1 071、750例，分別占總感染患者的0.56%、11.12%、20.34%、39.98%、28.00%。整個研究對象以單一感染為主，高發年齡40～<50歲；二重感染次之，高發年齡50歲及以上；多重感染最少，高發年齡50歲及以上；二重及多重感染中年齡越大，感染率越高。整個年齡組以40～<50歲感染率最高，其次50歲及以上年齡段，整體呈倒“U”型。見表3、圖1。HPV感染率在不同年齡組間差異具有統計學意義(χ2=13.26，P<0.05)。

表2 HPV感染的亞型分布(n)

注：二重型及多重型感染例數不能由此表縱向直接相加得到，因為這樣二重型及多重型包含的HPV亞型會存在重復計算，其具體例數需排除重復部分

表3 不同年齡段感染HPV情況

圖1 不同年齡段感染HPV情況

3 討 論

全球性的調查研究顯示，宮頸癌在女性惡性腫瘤中占據第二位[4]。研究表明HPV感染與宮頸疾患有著密切聯系，WHO于1995年將HPV感染確定為宮頸癌的病因，高危型HPV持續性感染是導致上皮內瘤變發生的重要條件，若不及時處理，可進一步發展為宮頸癌[5]。可見，HPV感染能對廣大女性的健康造成嚴重影響，甚至威脅生命。因此，臨床對高危人群篩查HPV感染能及時發現高危感染并進行適時適當的干預，預防上皮內瘤變甚至宮頸癌的發生、發展。同時，研究不同地區HPV感染現狀有助于評估各地區HPV流行情況，制訂針對性的防治措施，還能為國產HPV疫苗的研制方向提供指導。

本研究發現重慶市永川地區進行HPV檢測的10 889人中，檢出HPV感染者2 679例，感染率24.60%，與我國大部分同類研究結果基本一致，但HPV感染型別上存在一定差異[6-7]。在永川地區感染HPV亞型中，高危型HPV感染前3位分別是HPV52、16、53，低危型HPV感染前3位分別是HPV81、43、42。與本地區先前的研究[8]相比，各型別所占比例發生改變，HPV52亞型取代HPV16亞型成為高危型中感染率最高的型別，與國內外部分研究報道的HPV16亞型感染率最高有一定的差異[9-10]，與云南省的一項大樣本分析一致[11]。其原因可能是HPV亞型分布存在明顯的地區差異，我國人口眾多，人文地理環境復雜，人口流動、當地經濟、教育條件、某區域生活方式或風俗的不同等均可使各地區HPV亞型分布不盡相同[12]，但有研究顯示地理位置靠近的區域HPV感染的流行情況接近[13]，結合我國各地優勢HPV亞型基本一致的特征，本文將其特點歸納為總體呈現“大體符合，區域差異”。同時本研究也提示某地區HPV的流行情況可能會隨著時間推移發生變化，這表明即使是同一地區，也應定期進行HPV的流行病學調查，以便及時調整該地區的防控策略。本地區二重感染的感染率較高，而多項研究結果表明混合感染特別是高危型混合感染可大幅增加宮頸病變和發展為宮頸癌的風險[14]。因此，針對這部分患者的早期診斷和及時干預顯得尤為重要 。此外本研究結果還顯示目前HPV感染率以 40～<50歲最高，整體呈倒“U”形,與國內外部分研究結果顯示HPV檢出率呈雙峰年齡分布存在差異[15-16]。這可能與納入的樣本量或地區差異有關，也可能與本地區人群對HPV篩查重視程度有關。

自2006年美國批準使用HPV疫苗以來，一項來自澳大利亞的研究顯示女性接種人群HPV感染率下降了77%，效果顯著[17]。2016年7月我國也正式批準HPV疫苗在我國的應用，但目前使用的疫苗由于從國外引進，二價疫苗(HPV16、18亞型)、四價疫苗(HPV6、11、16、18亞型)均沒有針對HPV52、58亞型是我國HPV感染常見亞型的特點，盡管疫苗對未包含的亞型存在交叉保護作用，但仍難以達到較全面有效的HPV預防[18]。本地區高危型HPV52、16、53、58亞型的感染率較高，預防接種時選取九價HPV疫苗能更好地進行覆蓋。根據本地區隨著年齡增加HPV感染率增高的特點及HPV疫苗在感染前接種效果更好的特性，推薦本地區有接種條件的女性盡早進行疫苗接種。但由于我國人口基數大及九價疫苗價格昂貴，覆蓋范圍受限，因此，推動針對我國國情或區域特點的國產HPV疫苗研制，可能將更合理、高效地防控HPV感染，使宮頸癌有望成為人類第一個通過綜合防控戰勝的惡性腫瘤[19]。

4 結 論

重慶市永川地區HPV的感染率、感染亞型及年齡分布較本地區以往研究有所變化：感染率前5的亞型分別為HPV52、16、81、53、58型，HPV52超過HPV16成為感染率最高的HPV亞型；感染率最高的年齡段也由30～<40歲變為40～<50歲，感染率曲線整體呈倒“U”形。根據本地區特點，推薦有接種條件的女性盡早進行HPV亞型覆蓋面更廣的疫苗的接種，并加強本地區HPV宣傳及篩查工作，實現HPV的有效防控并為區域性HPV疫苗的研制提供指導。