NFATC2基因變異在某區兒童急淋白血病中的分布調查

韓怡波 劉 伶* 孫 智 張世恒 楊月明 慕萬穎 曲 暢 李 婷

（大連市婦女兒童醫療中心，遼寧 大連 116034）

近年兒童急性淋巴細胞性白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）的診斷治療取得顯著進步，發達國家對兒童ALL的總治愈率接近85%[1-2]。目前ALL復發的治療仍是難點，即使通過高強度聯合化療及異基因造血干細胞移植治療，也僅30%～50%的復發ALL患者可獲長期緩解[3-4]，提示此SNP可能與ALL復發相關，基于此項研究，我們對該SNP在我院治療ALL患兒中的分布作了調查。

1 資料與方法

1.1 一般資料：2014年11月至2017年11月在我院明確診斷的初診有治療意向ALL患兒，共30例?；純耗挲g最小1.0歲，最大13.2歲，中位年齡6.5歲。其中男性20位，女性10位。ALL類型B系ALL 28位，T系ALL 2位。其中1位男性T系患兒髓外ALL復發。白血病危險度分型依據《兒童急性淋巴細胞白血病診療建議（第四次修訂）》，高危9例，中低危21例。本研究經倫理委員會批準，所有入組患兒家屬均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 診斷方法：所有患兒均根據骨髓細胞形態學、免疫學、細胞遺傳學、特殊融合基因檢測診斷為ALL。

1.2.2 樣本SNP采集及檢測：取非抗凝靜脈血，由我院生殖遺傳實驗室采集樣本DNA，送由大連寶生物科技有限公司通過PCR擴增直接測序法檢測NFATC2 rs6021191核苷酸序列。

1.2.3 門冬酰胺酶使用及過敏反應觀察方法：我院使用兩種門冬酰胺酶制劑化療，大腸桿菌源左旋門冬酰胺酶（L-ASP）（誘導緩解用法：6000 U/m2，隔日1次，共10次；繼續治療中2次再誘導治療用法：6000 U/m2，隔日1次，10次）；聚乙二醇化門冬酰胺酶（Peg-ASP）（誘導緩解用法：2000 U/m2，第6及26天各用1次；繼續治療： 2000 U/m2/3周×6次）?；純簩﹂T冬酰胺酶過敏反應由臨床觀察，任何一種門冬酰胺酶過敏反應，包括皮疹、騷癢、皮試陽性等均記為有過敏反應，不包括肝功能損害、胰腺炎、高血糖、神經系統異常等門冬酰胺酶其他不良反應。

1.3 統計學處理：應用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，相關因素分析采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 NFATC2 rs6021191檢測結果：30例樣本，rs6021191位點AA 20例（66.67%），AT 9例（30%），TT 1例（3.33%）。

2.2 門冬酰胺酶過敏反應：30例患者共觀察到4例過敏反應，1例使用PEG-ASP后皮疹，1例使用L-ASP后發生皮疹，2例L-ASP皮試陽性。s6021191變異與門冬酰胺酶過敏反應發生比較，P=0.107＞0.05，未提示統計學相關性。在本次調查中此SNP與門冬酰胺酶過敏反應未表現顯相關性，有趣的是我院的門冬酰胺酶制劑過敏反應臨床報告率遠未達到文獻中的30%左右，一方面是由于過敏反應的觀察有相當的主觀性，另一方面我院主要使用Peg-ASP，治療方案中使用次數減少也有可能減少臨床過敏反應發生概率。

表1 rs6021191與門冬酰胺酶過敏反應的比較

2.3 ALL復發：本次調查中，僅有1位T系ALL患者發生髓外復發，rs6021191變異與ALL復發比較，P=0.772＞0.05，無統計學相關性。由于復發樣本過少僅作參考。

表2 rs6021191與ALL復發比較

2.4 ALL危險度分層：rs6021191變異與白血病危險度比較，無明顯統計學意義。雖然此SNP的變異（T及A/T）總發生率與按此次調查中判定為高?；颊弑嚷是∏上嗨疲邿o統計學聯系，也無臨床意義。

表3 rs6021191與高危ALL比較

3 討 論

ALL復發是目前兒童ALL治療中的重點難點，在臨床工作中，我們發現有部分復發ALL患兒來自中、低危組，其原因可能是目前已確定的預后不良因素未對初診ALL患兒進行精準的危險度分級，致使部分高危患兒納入低危組或中危組，導致復發率升高，因此發現新的ALL復發相關因素就有重要的意義。目前有研究認為ALL復發的主要機制包括腫瘤細胞對化療藥物的耐藥現象等，在Kawedia、Fernandez等人的一系列研究中發現門冬酰胺酶抗體與地塞米松暴露及白血病復發有相關性，并進一步篩選出rs17885382（HLA-DRB1）及rs6021191（NFATC2）兩組單基因可能與此相關，并在以人種分組的研究中發現前者與歐洲裔相關性較高，后者與亞裔相關性較明顯。

NFATC2是NFAT轉錄子家族中的一員。NFATC2在藥物致過敏風險性中的作用并不明確。NFATC2 rs6021191變異定位于基因內含子并且是HUVEC（人血管內皮細胞）和K562細胞系弱增強子激活區域，提示此SNP可以影響NFATC2的表達。當前NFATC2 rs6021191作為ALL復發相關因素的研究尚不完善，國內外關于此SNP與ALL間關系的文獻并不多，這種SNP與ALL相關性的研究必然需要多中心、大樣本調查才有價值，我們此次試驗僅就此SNP在我院ALL患兒中的分布作初步調查，也是為我們進一步研究此類基因的臨床意義所做的前期工作。