高效液相色譜法測定食品中的抗氧化劑

胡玉霞

(浙江經貿職業技術學院，浙江 杭州 310018)

食品中存在易氧化的油脂、脂溶性維生素、磷脂和胡蘿卜素等物質[1]，在貯存過程中易導致食品感官發生變化。油脂中的不飽和脂肪酸被水解、氧化，導致油脂的酸價、過氧化值升高，破壞營養，產生異味，對人體健康有影響，嚴重時還會引起食物中毒[2]。抗氧化劑能阻止或延緩油脂的自動氧化，防止食品貯藏過程中的褐變、褪色和營養損失[3]，提高食品穩定性，延長貯存期。正確使用抗氧化劑，不僅可以給生產者、消費者帶來良好的經濟效益，而且能提高食品安全，防止食品安全事故發生。

特丁基對苯二酚(TBHQ)、丁基羥基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)是常用的油脂類抗氧化劑，限量標準已有規定[4]。已有研究發現，長期大量使用抗氧化劑有致癌作用[5-6]，快速檢測食品中抗氧化劑的含量，具有重要的意義。目前，我國檢測油脂類抗氧化劑常采用乙腈-正己烷液液萃取，C18固相萃取柱凈化的方法[6]，該方法前處理復雜、毒性大、成本高，不利于批量樣品的檢測分析。質譜法雖靈敏度高、檢出限低，但設備昂貴，難以推廣普及。本研究基于現有檢測方法，采用甲醇作為提取溶劑，重復提取后，直接過膜上機檢測。與標準方法相比，該方法簡單快捷、定量準確，檢測成本低，適于批量檢測，對提高檢測分析的效率和靈敏度具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

TBHQ、BHA、BHT標準品(TMstandard，含量≥99%，擴展不確定度0.5%)，北京壇墨質檢；0.22 μm有機濾膜，上海安譜實驗科技股份有限公司；甲酸、甲醇均為色譜純；餅干、食用油樣品采集于超市。

1.2 儀器與設備

超純水凈化器，美國Millipore公司；戴安p680液相色譜儀，二極管陣列檢測器，德國AUPOS公司；旋渦震蕩器，合肥艾本森科學儀器有限公司；電子天平，瑞士Mettler-Toledo公司。

1.3 色譜條件

色譜柱：Eclipse C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：A為0.5%甲酸水，B為甲醇；流動相梯度洗脫程序為：0～5 min，50% A；5～15 min，50%～20% A；15～20 min，20% A；20～25 min，20%～10% A；25～27 min，10%～50% A；27～30 min，50% A。流速1.0 mL·min-1，進樣量 10.0 μL，柱溫35 ℃，紫外檢測波長280 nm。

1.4 樣品前處理

準確稱量0.2～2.0 g樣品(精確到0.01 g)，加入甲醇5 mL，旋渦震蕩2 min，5 000 r·min-1離心5 min，取上清液，重復提取3次，合并提取液，55 ℃氮氣吹至近干，甲醇定容至2.0 mL，過膜上機分析。

1.5 標準曲線繪制

準確稱取BHA、BHT、TBHQ各0.05 g(精確至0.000 01 g)，用乙腈定容到50 mL，混勻，制成標準溶液儲備液(1 mg·mL-1)。將標準溶液儲備液用甲醇稀釋至2、5、10、20、50 μg·mL-1標準工作液，HPLC-DAD檢測。以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

2 結果與分析

2.1 線性范圍

以峰面積對應于各標準物質的質量濃度(μg·mL-1)進行線性回歸，實驗結果表明呈現良好的線性關系(表1)。

表1 方法的線性范圍

2.2 準確度、精密度及檢出限

選擇餅干作為樣品，檢測其中BHA、BHT、TBHQ含量。結果表明，餅干中未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為14.52 mg·kg-1，相對標準偏差(RSD)2.60%。以餅干為空白樣品基質，進行低、中、高3個濃度水平的添加實驗，進行回收測定，平均測定6次，結果見表2。

表2 方法的精密度和回收率(n=10)

由表2可見，抗氧化劑回收率90.4%～101.1%，相對標準偏差0.32%～2.46%，能夠較好地滿足GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》的要求。以樣品中目標物響應和基線噪音比計算本方法的檢出限，TBHQ、BHA、BHT的檢出限分別為0.6、0.2、0.6 mg·kg-1。

2.3 實際樣品含量的檢測

在上述試驗條件下，分別對市場上購買的食用油(未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為24.20 mg·kg-1)和糕點(未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為8.90 mg·kg-1)進行加標回收測定(每個樣品3個重復)，測定結果見表3。加標檢測結果表明，回收率97.0%～103.0%，RSD為0.95%～2.34%，可以滿足日常檢驗需求。

表3 實際樣品的加標回收檢測

3 小結

本實驗建立了用甲醇作為提取溶劑的高效液相色譜-二極管陣列檢測器(HPLC-DAD)測定食品中TBHQ、BHA、BHT 3種抗氧化劑殘留的方法，相比現行標準中液液萃取-過柱凈化的液相色譜分析技術，實現了簡化前處理操作、提高樣品提取效率、減少有機溶劑的使用和降低檢測成本等目的。精密度、準確度和檢出限結果表明，該方法滿足檢測標準要求，對政府部門或第三方檢測公司開展相關產品的檢驗檢測有重要的參考意義。