枸櫞酸坦度螺酮對(duì)高血壓大鼠BP、ET-1、NO水平及晝夜節(jié)律的影響

近年來(lái)人們生活節(jié)奏不斷加快，精神壓力越來(lái)越大，而精神壓力引起血壓、心率、心排血量、臟器血流量等循環(huán)要素發(fā)生變化，對(duì)高血壓發(fā)病、經(jīng)過(guò)、預(yù)后產(chǎn)生極大影響。因此，對(duì)高血壓病人進(jìn)行精神護(hù)理的重要性日益升高，如何合理使用抗焦慮抑郁藥，對(duì)高血壓治療非常重要。坦度螺酮是在抗焦慮作用基礎(chǔ)上兼具抗抑郁作用的5羥色胺激動(dòng)劑，屬于高血壓的治療藥物。血管內(nèi)皮系統(tǒng)在調(diào)節(jié)血壓與維持血壓晝夜節(jié)律方面具有重要作用，其中一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素1(ET-1)是具有代表性的一對(duì)血管活性物質(zhì)[1-2]。高血壓病可損傷機(jī)體內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致NO、ET-1合成釋放失衡[3]。本研究探討枸櫞酸坦度螺酮不同晝夜時(shí)間給藥對(duì)高血壓大鼠血壓(BP)、血漿NO和ET-1的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 戴爾實(shí)驗(yàn)用計(jì)算機(jī)，MS2000生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)(廣東龍飛達(dá)技術(shù)有限公司)、721分光光度計(jì)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 枸櫞酸坦度螺酮片(大日本住友制藥株式會(huì)社茨木工廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)021116)，硝基-L-精氨酸甲酯(NG -nitro-L-arginine-methlester，L-NAME，美國(guó)Sigma公司生產(chǎn))，ET-1和NO試劑盒(北京東亞生物技術(shù)研究所)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 同齡健康雄性SPF級(jí)大鼠90只，體重150～175 g(北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 大鼠在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房后明/暗各12 h下適應(yīng)2周，將L-NAME溶于水中灌胃，每次10 mL，連續(xù)灌胃5周后，參照Sigmon方法[4]復(fù)制高血壓模型，將大鼠分為高血壓對(duì)照組和坦度螺酮組，各45只。將各組大鼠按照隨機(jī)分配原則，分為峰值前給藥組(血壓峰值前2 h給藥)、中值前給藥組(血壓中值前2 h給藥)、谷值前給藥組(血壓谷值前2 h給藥)，每組15只。高血壓對(duì)照組大鼠給予飲用水灌胃，坦度螺酮組大鼠給予枸櫞酸坦度螺酮(研末后溶于飲用水)灌胃給藥，連續(xù)飼養(yǎng)4周。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 血壓測(cè)定 給藥前和給藥后分別測(cè)定各組大鼠尾動(dòng)脈血壓，采用尾動(dòng)脈介入法：2.4%水合氯醛(240 mg/kg)麻醉，大鼠背部向上固定，消毒尾部，直至尾動(dòng)脈顯現(xiàn)后，將儀器穿刺針緩慢插入尾動(dòng)脈，將有肝素生理鹽水的導(dǎo)管經(jīng)傳感器并與計(jì)算機(jī)連接，造模成功后將大鼠固定于特質(zhì)籠子，進(jìn)食和飲水正常進(jìn)行，大鼠清醒后MS2000多媒體生物信號(hào)記錄分析儀器連續(xù)監(jiān)測(cè)24 h，采用自身對(duì)照法觀察血壓變化。

1.5.2 血漿ET和NO檢測(cè) 血壓測(cè)定完成后，10%水

合氯醛(0.33 mL/100 g)腹腔麻醉，開(kāi)胸暴露心臟，取心室內(nèi)血液，測(cè)定ET-1、NO。取血時(shí)間08：00～09:00，1.0 mL血液中加入7.5%乙二胺四乙酸(EDTA)二鈉15 μL和抑肽酶20 μL[5]，以3 000 r/min離心3 min，分離血漿，置于-20 ℃冰箱保存，嚴(yán)格按照試劑盒檢測(cè)ET-1和NO。

2 結(jié) 果

2.1 正常大鼠尾動(dòng)脈壓晝夜節(jié)律 采用MS2000多媒體生物信號(hào)記錄分析儀器連續(xù)監(jiān)測(cè)24 h后，應(yīng)用余弦軟件分析血壓數(shù)據(jù)，得出正常大鼠血壓晝夜節(jié)律圖，其中中值(均值)M=89.324±2.570，振幅A=5.8±1.4，峰值位相Ф=5.204±0.334。

2.2 兩組大鼠不同時(shí)間血壓比較 治療后，坦度螺酮組3個(gè)時(shí)間血壓均降低，以峰值前血壓降低最明顯，與高血壓對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

組別只數(shù) 峰值前2 h 給藥前給藥后 中值前2 h 給藥前給藥后 谷值前2 h 給藥前給藥后高血壓對(duì)照組15132.4±6.1132.3±6.2133.4±6.3133.3±6.2131.2±6.0131.1±6.1坦度螺酮組15133.0±6.2112.4±4.3132.6±6.2122.0±3.4132.0±6.1122.4±3.9t值-0.6233.2010.5272.417-0.4272.214P>0.05<0.05>0.05<0.05>0.05<0.05

注：1 mmHg=0.133 kPa

2.3 兩組大鼠不同時(shí)間血漿NO和ET水平比較 坦度螺酮組大鼠血漿ET-1水平低于高血壓對(duì)照組，NO水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

組別只數(shù)NO(μmol/L)ET-1(pg/mL)高血壓對(duì)照組4525.3±1.7179.8±8.9坦度螺酮組4536.1±2.8160.3±9.01)t值-3.0212.174P<0.05<0.05

2.4 坦度螺酮組不同時(shí)間血漿NO和ET-1水平比較 不同時(shí)間給藥后，血漿NO水平均高于高血壓模型期(P<0.05)，峰值前2 h給藥后NO水平升高最明顯(P<0.05)；不同時(shí)間給藥后，血漿ET-1水平低于高血壓模型期，峰值前2 h和中值前2 h給藥后ET-1顯著降低(P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

時(shí)間NO(μmol/L)ET-1(pg/mL)高血壓模型期25.1±1.3179.8±8.7峰值前2 h39.6±0.71)2)163.1±10.21)2)中值前2 h34.7±0.81)161.0±7.91)2)谷值前2 h34.3±0.71)166.2±10.31)

與高血壓模型期比較，1)P<0.05；與谷值前2 h比較；2)P<0.05

3 討 論

人體各個(gè)系統(tǒng)生理活動(dòng)均具有明顯的節(jié)律現(xiàn)象，依照節(jié)律周期分為3種類型：①節(jié)律周期接近24 h為近日節(jié)律；②節(jié)律周期明顯小于24 h為超日節(jié)律；③節(jié)律周期長(zhǎng)于24 h屬于亞日節(jié)律。人體常見(jiàn)的生理活動(dòng)為近日節(jié)律，心血管系統(tǒng)多數(shù)生理與病理現(xiàn)象均屬此類[6]。心腦血管疾病的發(fā)生具有明顯晝夜節(jié)律，心肌梗死、心臟猝死、室性心律失常及腦卒中等均于早晨高發(fā)而夜間發(fā)病率最低。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，NO、ET-1等水平或活性均呈現(xiàn)典型的晝夜節(jié)律。人體血壓的晝

夜節(jié)律性較大程度取決于NO、ET-1時(shí)間生物學(xué)特征。有研究表明，血壓晝夜節(jié)律紊亂是導(dǎo)致靶器官損害的重要因素，非杓型高血壓病人靶器官損害程度嚴(yán)重，主要由于機(jī)體心肌肥厚，腦血管硬化嚴(yán)重。血壓晝夜節(jié)律消失是獨(dú)立于血壓之外的心腦血管病預(yù)測(cè)因素[7]。高血壓的臨床治療中，如何恢復(fù)或維持血壓的正常晝夜節(jié)律，是目前臨床研究的熱點(diǎn)。

本研究以高血壓大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，長(zhǎng)期應(yīng)用NO合成酶抑制劑L-NAME復(fù)制典型高血壓大鼠模型，并對(duì)每只大鼠進(jìn)行尾動(dòng)脈置管，并進(jìn)行24 h動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)，余弦軟件分析血壓節(jié)律情況，從而標(biāo)記高血壓模型大鼠高血壓期血壓峰值、中值及谷值時(shí)間，以確定實(shí)驗(yàn)給藥時(shí)間[8]。給藥枸櫞酸坦度螺酮2 h后，坦度螺酮血漿濃度達(dá)到峰值，因此，分組時(shí)以坦度螺酮藥效最佳時(shí)間前2 h灌胃給藥，使血藥濃度峰值分別處于以上3個(gè)時(shí)間。本研究結(jié)果表明，大鼠經(jīng)枸櫞酸坦度螺酮灌胃后4周，與高血壓對(duì)照組大鼠比較，血壓均明顯降低，表明枸櫞酸坦度螺酮可拮抗由L-NAME引起的高血壓；以峰值前2 h給藥后大鼠血壓下降最明顯，結(jié)果顯示最大血藥濃度出現(xiàn)在血壓處于峰值時(shí)，給予枸櫞酸坦度螺酮治療降壓效果顯著。

NO為近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新型信息傳遞體，作為機(jī)體主要的一類舒血管活性物質(zhì)，通過(guò)激活水溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，升高平滑肌環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)濃度，達(dá)到舒張血管目的[9]。ET-1是體內(nèi)已知的最強(qiáng)縮血管物質(zhì)，主要由日本學(xué)者Yanagisawade等于1988年經(jīng)豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離出的一種多肽[1]。本研究采用枸櫞酸坦度螺酮不同時(shí)間給藥后，坦度螺酮組與高血壓對(duì)照組比較，血漿NO水平升高，以峰值前給藥升高程度最明顯，這主要與峰值前給予坦度螺酮后血壓降低最明顯，峰值前和中值前給藥后血漿ET-1低于高血壓對(duì)照組。結(jié)果表明，降壓過(guò)程中NO可能起著重要作用，但具體作用機(jī)制需進(jìn)一步驗(yàn)證。

高血壓疾病的治療，不僅需考慮藥物的代謝動(dòng)力學(xué)，同時(shí)治療過(guò)程需根據(jù)病人血壓情況選擇合理時(shí)間給藥，從而為高血壓治療提供新方向[10]。選擇高血壓藥物或其他藥物治療時(shí)，根據(jù)病人血壓節(jié)律情況結(jié)合治療藥物的藥理性質(zhì)，選擇合適的給藥時(shí)間，反復(fù)研究進(jìn)而找到穩(wěn)定的降壓時(shí)間，最大程度降低病人血壓。本研究結(jié)果證明，枸櫞酸坦度螺酮對(duì)高血壓大鼠具有降壓作用，并可改善其內(nèi)皮功能。