慢性粒細胞白血病患者BCR-ABL融合基因P210表達對病程判斷和預后評估的臨床價值 *

劉偉平，官凡琪，宋耀輝，阮艷秋

(1.自貢市第一人民醫院檢驗科， 四川自貢 643000；2.遵義醫科大學醫學與科技學院，貴州遵義 563000)

慢性粒細胞白血病(chronic myelogenous leuke-mia，CML)是骨髓造血干細胞的惡性克隆增殖性疾病。臨床上通常按照病程將CML分為慢性期、加速期和急變期。一旦疾病進入急變期，預后極差[1]。90%以上的CML患者的血細胞中出現Ph染色體，即t(9；22)(q34；q11)，9號染色體長臂上abl原癌基因易位至22號染色體長臂的斷裂點集中區(bcr)，形成BCR-ABL融合基因，并表達BCR-ABL融合蛋白[2]。BCR-ABL 融合基因以不同剪接方式形成mRNA-b3a2和b2a2，編碼形成P210融合蛋白[3]；該蛋白具有異常活躍的酪氨酸激酶活性，并可活化細胞內相關的信號轉導通路，從而調控細胞的分裂與增殖，使細胞凋亡信號降低、存活率延長，這是引起白血病細胞惡性增殖及凋亡抵抗的主要機制之一[4]。因此，本研究旨在探討不同病程BCR-ABL融合基因P210的表達水平以及外周血象、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(α-hydroxybutyrate，HBDH)和血糖(glucose，GLU)的變化，以期為臨床的早期診斷、病程判斷和預后評估提供一良好指標。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2017年4月～2018年5月期間自貢市第一人民醫院住院的CML患者共計30例，其中男性18例，女性12例，年齡24歲～86歲。疾病分期：慢性期13例，加速期8例，急變期9例。

1.2 試劑和儀器 Agilent StrataGene MX 3005P 實時熒光定量PCR儀購自美國安捷倫科技公司；BCR/ABL210融合基因定量檢測購自上海源奇生物醫藥科技有限公司。XN-1000全自動血液分析儀購自希森美康生物有限公司，血清GLU，LDH，UA和HBDH購自邁克生物有限公司。

1.3 實驗方法 CML診斷依據中國慢性髓性白血病診斷與治療指南(2016年版)，結合骨髓細胞形態學、流式細胞術免疫表型、臨床癥狀等進行綜合分析。采用RT-PCR測定BCR-ABL融合基因P210表達水平，結果以BCR-ABL轉錄本水平與ABL(內參基因)轉錄本水平的比值(P210/ABL)來表示[5]；血細胞計數及分類采用XN-1000全自動血液分析儀，分類采用手工顯微鏡法進行確認；血清LDH和HBDH，GLU，UA，K+分別運用速率法、葡萄糖氧化酶法、尿激酶法、電極法進行檢測。

1.4 統計學分析 采用SPSS 23.0統計學軟件進行統計分析，符合正態分布的定量資料，三組間比較采用方差分析，非正態分布的定量治療采用Mann-WhitneyU檢驗，率的比較采用卡方(χ2)檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同病程CML患者BCR-ABL融合基因P210檢測結果 見表1。30例CML患者中，BCR-ABL融合基因P210陽性表達的有28例，占93.3%，其表達量通過Mann-WhitneyU檢驗分析比較，發現不同分期CML患者中BCR-ABL融合基因P210的表達差異有統計學意義(Z=9.561，P=0.000)，且運用伊馬替尼治療一年后，檢測各病程BCR-ABL融合基因P210的陽性表達情況，運用卡方檢驗分析比較治療前后BCR-ABL融合基因P210陽性表達率的差異，得出在13例慢性期CML患者中，治療后此基因陽性表達率較治療前差異有統計學意義(χ2=7.047，P=0.029)。此結果表明，BCR-ABL融合基因P210的表達在不同病程CML患者中表達差異有統計學意義，可用于臨床對CML患者病程判斷及預后評估。

表1 不同病程CML患者BCR-ABL P210檢測結果

2.2 不同病程CML患者外周血象檢測結果 見表2。測定30例不同病程CML患者外周白細胞(white blood cell，WBC)、血紅蛋白(hemoglobin，HGB)含量及中性粒細胞/淋巴細胞比值(NEU/LYM)并運用單因素方差分析比較。外周WBC，HGB和NEU/LYM在不同病程CML患者中的表達差異均具有統計學意義(均P=0.000)。由此得出，測定外周血中WBC，HGB的含量及NEU/LYM比值可用于臨床對CML患者的病程進行判斷，從而為其有效治療提供一可靠指標。

表2 不同病程CML外周血指標的比較

2.3 不同病程CML患者血清部分生化指標比較 見表3。利用單因素方差分析比較不同病程CML患者血清GLU，LDH，HBDH，K+和UA的表達差異。不同病程CML患者血清中GLU，LDH的表達差異有統計學意義(P=0.026，0.0482)，但血清HBDH，K+和UA的含量在不同病程CML患者之間比較，差異均無統計學意義(均P>0.05)。由此得出，CML患者血清中GLU，LDH在不同病程的差異表達可為臨床對其病程診斷提供一早期指標。

表3 不同病程CML部分生化指標的比較

3 討論

BCR-ABL融合基因是白血病發生的必要條件之一，利用實時熒光定量PCR技術可有效檢測BCR-ABL融合基因表達水平[6]。本研究顯示，不同疾病分期BCR-ABL P210轉錄本差異有統計學意義(P<0.05)，且急變期患者的BCR-ABL P210的轉錄水平明顯高于加速期和慢性期的患者。由此得出，通過對CML患者BCR-ABL P210的檢測，有助于臨床準確判斷患者病程和病情變化，從而有效實施個體化治療。

獲得深層的分子生物學反應是酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitors，TKI)治療CML追求的目標[7-8]。骨髓或外周血中BCR-ABL P210轉錄本為0或定性檢測結果為陰性是CML完全緩解的重要指標[6]。本研究結果顯示，13例慢性期CML患者采用伊馬替尼治療一年后，BCR-ABL P210陽性率明顯降低。因此，對伊馬替尼治療的慢性期CML患者進行BCR-ABL P210基因表達水平的檢測，有助于臨床判斷其療效和監測其復發，此與文獻報道相符[6，8]。

本研究表明，不同分期CML患者外周血WBC，NEU/LYM和HGB差異均有統計學意義。這提示針對不明原因的WBC，NEU/LYM異常升高和HGB下降對于CML患者的早期診斷具有重要意義。另外，各期CML患者LDH一般呈輕度或重度升高，其原因可能在于Ph染色體易位產生BCR-ABL融合基因并表達蛋白P210，使白血病細胞大量增殖，糖酵解增強，進而使血清中LDH及其同工酶活性增高。另有研究表明，CML患者骨髓增生程度極度活躍，各組織和器官被惡性細胞浸潤，其肝脾腫大及功能受損使LDH加速釋放入血，從而可導致血清LDH及其同工酶活性升高[10]。在對各期CML患者血糖測定過程中發現，血糖水平與CML分期密切相關。以上結果表明，在排除患者其它疾病情況下，測定LDH及GLU水平可用于CML臨床分期診斷及預后評估指標之一。

綜上所述，BCR-ABL融合基因P210表達水平可作為CML早期診斷、病程判斷和預后評估的良好指標。此外，外周血WBC數量，NEU/ LYM，GLU及LDH可用于CML的分期診斷和預后評估。兩者結合起來，可提高CML診斷和治療的敏感度及準確度。然而本研究檢測的臨床樣本較少，且分布較為局限，仍需納入不同地區，不同人種的臨床樣本進行分析研究，以增加本研究的可信度，以期為臨床對CML患者的分期診斷和預后提供理論依據。