KLF4在胃癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)性的Meta分析 *

杜正平，王轉(zhuǎn)兄，宋耀輝，張雪燕，顏春魯，汪永峰，李海龍

(1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)a.臨床醫(yī)學(xué)院臨檢基礎(chǔ)教研室；b.教學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)中心； c.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，蘭州 730030；2.甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 甘肅省高校重大疾病分子醫(yī)學(xué)與中醫(yī)藥防治研究省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730030)

胃癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)生率和病死率極高，預(yù)后不良[1]。Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子(KLF)是含有鋅指的轉(zhuǎn)錄因子，在多種細(xì)胞的發(fā)育、分化、增殖和凋亡等過(guò)程中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[2]。KLF4為KLFs家族成員之一，在胃腸道、皮膚和肺部的組織中高度表達(dá)[3]。研究顯示，KLF4在前列腺癌、黑色素瘤中表達(dá)上調(diào)，而在胃癌、食管癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肝癌等腫瘤中表達(dá)下調(diào)[4]。可見KLF4針對(duì)不同的靶基因和作用機(jī)制，同時(shí)起原癌基因和癌基因的作用[5]。有文獻(xiàn)表明，KLF4對(duì)胃癌的發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要[6]。為此，本研究通過(guò)薈萃分析，對(duì)國(guó)內(nèi)外已發(fā)表文獻(xiàn)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，旨在系統(tǒng)分析其臨床病理特征，為將其應(yīng)用于臨床診斷和分子靶向治療提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 文獻(xiàn)來(lái)源：使用計(jì)算機(jī)檢索PubMed，萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)，CNKI，Web of Science數(shù)據(jù)庫(kù)和EMBASE生物醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)等，檢索關(guān)于KLF4與胃癌相關(guān)性的所有文獻(xiàn)，檢索年限均從建庫(kù)到2018年5月。中文檢索詞有：胃癌，胃腫瘤，胃瘤，KLF4，Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子4。英文檢索詞有：gastric cancer，stomach neoplasm，gastric neoplasm，krupple-like 4。

1.1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)：納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)組織病理檢查明確診斷的胃癌組織標(biāo)本、正常組織或癌旁組織(距癌旁組織邊緣5 cm)標(biāo)本才可確立為研究對(duì)象；②納入的研究中信息完整，主要內(nèi)容包含作者、文章發(fā)表時(shí)間、所在地、研究方向、研究方法以及評(píng)價(jià)指標(biāo)等；③關(guān)于KLF4與胃癌及其臨床病理特征的研究，包含胃癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、TNM分期、分化程度等5個(gè)指標(biāo)的分析；④實(shí)驗(yàn)方法為免疫學(xué)法。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①重復(fù)發(fā)表，數(shù)據(jù)不完整，只有摘要卻無(wú)全文的文獻(xiàn)；②實(shí)驗(yàn)性研究，病例報(bào)告，薈萃分析；③缺少所有原始數(shù)據(jù)或無(wú)法直接計(jì)算OR，95% CI，P值等指標(biāo)。

1.2 方法

1.2.1 檢索方法：兩名研究人員獨(dú)立完成文獻(xiàn)檢索、篩選和數(shù)據(jù)提取以及交叉檢驗(yàn)，如果產(chǎn)生分歧，可以協(xié)商第三方，直到雙方達(dá)成協(xié)議為止。數(shù)據(jù)提取包括：①研究中所包含的主要信息，如第一作者、出版年份、研究課題、研究方法等；②納入研究的基本特征，胃癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、TNM分期、分化程度；③KLF4的表達(dá)與胃癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、TNM分期、分化程度相關(guān)性的結(jié)局指標(biāo)，提取的數(shù)據(jù)等。

1.2.2 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)：兩位研究人員根據(jù)Newcastle-Ottawa Scale (NOS)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)納入的研究進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，如果意見不同，可通過(guò)討論達(dá)成一致。通過(guò)對(duì)病例-對(duì)照的選擇、可比性和暴露信息三個(gè)方面的分析，將文獻(xiàn)質(zhì)量分為兩級(jí)，其中一級(jí)質(zhì)量研究為0～4分的文獻(xiàn)；而5～9分則被分為二級(jí)質(zhì)量研究。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Review Manager 5.3軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算相關(guān)效應(yīng)性指標(biāo)OR，95%CI，P值。用χ2檢驗(yàn)檢驗(yàn)納入研究的一致性，并用I2來(lái)判斷異質(zhì)性的高低程度。I2<25%為低度異質(zhì)性，I2=50%為中度異質(zhì)性，I2>75%為高度異質(zhì)性。若I2<25%，采用固定效應(yīng)模型分析，反之則采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。如果納入的研究中效應(yīng)量間存在差異，則需要進(jìn)一步分析異質(zhì)性來(lái)源，如若納入的研究異質(zhì)性很大，則應(yīng)采取必要的解決方案，進(jìn)行亞組分析或敏感性分析。Meta分析檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)篩選過(guò)程及結(jié)果 根據(jù)關(guān)鍵詞初次搜索文獻(xiàn)259篇，去重97篇，根據(jù)文獻(xiàn)題目與摘要剔除單純的實(shí)驗(yàn)研究，不符合本研究目的和方法的文獻(xiàn)117篇，余下45篇按照納入排除標(biāo)準(zhǔn)閱讀全文進(jìn)行篩選，并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，最后納入10個(gè)研究，共包括1 063例樣本量。

2.2 納入研究的基本信息 見表1。

2.3 Meta分析結(jié)果 ①KLF4在胃癌組織與正常組織或癌旁組織中表達(dá)情況：10篇研究均報(bào)告了KLF4在胃癌組與正常組織或癌旁組織組中的表達(dá)情況，其結(jié)果(圖1)為chi2=50.70，P<0.000 01，I2=88%，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。結(jié)果顯示：KLF4在胃癌中的表達(dá)低于正常組織或癌旁組織組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[OR=0.22， 95%CI(0.09，0.55)，P=0.001]。②KLF4在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無(wú)組的表達(dá)情況：10篇文獻(xiàn)均描述了KLF4在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)，其結(jié)果(圖2)為chi2=10.58，P=0.31，I2=15%<50%，使用固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析。結(jié)果表明：KLF4在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)更低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[OR=0.38，95%CI(0.28，0.51)，P<0.00001]。③KLF4在高中分化組與低分化組的表達(dá)情況：有6篇文獻(xiàn)報(bào)告了KLF4在高中分化組和低分化組的表達(dá)情況，結(jié)果(圖3)為chi2=3.97，P=0.55，I2=0%，使用固定效應(yīng)模型分析。結(jié)果顯示：KLF4在低分化組中的表達(dá)相對(duì)較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[OR=2.98，95%CI(1.93，4.61)，P<0.000 01]。④KLF4在Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)情況：10個(gè)研究全部報(bào)告了KLF4與胃癌TNM分期的相關(guān)性，其結(jié)果(圖4)為chi2=43.07，P<0.000 01，I2=79%，表明各研究之間存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。結(jié)果顯示：與Ⅰ～Ⅱ期相比，KLF4在Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[OR=2.93，95% CI(1.53，5.62)，P=0.001]。⑤KLF4在侵犯及漿膜與否組的表達(dá)情況：僅有3篇文獻(xiàn)報(bào)告了其與胃癌浸潤(rùn)程度的相關(guān)性，其結(jié)果(圖5)為chi2=3.30，P=0.19，I2=39%，采用固定效應(yīng)模型分析。結(jié)果表明：KLF4在漿膜以外組與未及漿膜組中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[OR=0.42，95%CI(0.27，0.65)，P=0.000 1]。

表1 納入研究的基本信息

注：“—”代表未描述；① 在胃癌組與正常組織或癌旁組織中KLF4的表達(dá)情況；②在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的KLF4的表達(dá)情況；③在高中分化組與低分化組中KLF4的表達(dá)情況；④在臨床Ⅰ～Ⅱ與Ⅲ～Ⅳ期中的KLF4的表達(dá)情況。

圖1 胃癌組織與正常組織或癌旁組織中KLF4表達(dá)的Meta分析

圖2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中KLF4表達(dá)的Meta分析

圖3 高中分化組和低分化組中KLF4表達(dá)的Meta分析

圖4 胃癌臨床Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ～Ⅳ期中KLF4表達(dá)的Meta分析

圖5 漿膜以外組與未及漿膜組中KLF4表達(dá)的Meta分析

3 討論

Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子(krupple-like，KLF)的序列包含C-末端三個(gè)C2H2型鋅和N-末端的激活結(jié)構(gòu)域，通過(guò)結(jié)合GC-rich DNA序列或CACC啟動(dòng)子，KLFs調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和腫瘤轉(zhuǎn)化等[17]。

KLF4是目前研究較為廣泛的腫瘤基因，因其N-端中包含了轉(zhuǎn)錄抑制域和轉(zhuǎn)錄抑制域，可以對(duì)腫瘤生物學(xué)產(chǎn)生雙向的調(diào)節(jié)作用[18]。例如，KLF4作為抑癌基因，可抑制食管癌的細(xì)胞遷移和侵襲[19]； KLF4轉(zhuǎn)錄下調(diào)β-catenin表達(dá)并抑制胃癌的增殖、入侵和轉(zhuǎn)移[20]。此外，KLF4在結(jié)腸癌中也明顯下調(diào)表達(dá)[21]。KLF4作為致癌基因，在前列腺癌中高表達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞增殖[22]。近年來(lái)，有新研究表明，KLF4可通過(guò)維持正常干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞的端粒酶活性，在干細(xì)胞的長(zhǎng)期增殖潛能方面扮演重要角色[23]。KLF4也可抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，改變肝癌間質(zhì)細(xì)胞特征，使之呈現(xiàn)上皮表型，從而抑制肝癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移和定植能力[24]。

雖然已有文獻(xiàn)報(bào)道了KLF4的異常表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但文獻(xiàn)中對(duì)于KLF4表達(dá)與胃癌臨床病理特征性的報(bào)道并不一致，有必要進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，以明確其在胃癌中的表達(dá)，并探明其表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。為闡明其分子機(jī)制，為應(yīng)用于臨床診斷和分子靶向治療提供依據(jù)。

綜上所述，KLF4與胃癌的發(fā)生、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度明顯相關(guān)，但KLF4作為鋅指轉(zhuǎn)錄因子，因其具有轉(zhuǎn)錄激活劑和轉(zhuǎn)錄抑制劑的雙重功能而變得復(fù)雜，KLF4無(wú)論是在正常干細(xì)胞還是腫瘤干細(xì)胞，亦或是癌細(xì)胞中，其作用機(jī)制尚不清楚，仍需繼續(xù)探究。本研究旨在通過(guò)納入近些年來(lái)發(fā)表的文獻(xiàn)對(duì)KLF4表達(dá)與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性進(jìn)行Meta分析，以期為臨床的治療和預(yù)后提供理論依據(jù)。但本研究仍存在很多不足，例如納入研究中的樣本量相對(duì)不足；只考慮了KLF4這一單因素對(duì)胃癌的影響，而沒有考慮KLF4與其他蛋白的協(xié)同作用。