硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Sialin）與口腔癌的相關(guān)性研究

陳國棟，歐陽嘉杰，許錦心，陳伊燕

（佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院/南方醫(yī)科大學(xué)順德醫(yī)院 口腔醫(yī)學(xué)中心，廣東 佛山 528000）

0 引言

口腔癌作為口腔及頜面部常見的一種癌癥，在我國的發(fā)病率較高，每年有近5 萬新發(fā)病例，且患者多為中晚期，預(yù)后較差，嚴(yán)重影響患者的身心健康[1]。目前的研究提示，口腔癌診斷標(biāo)志物缺乏一定的特異性，為早期診斷帶來了一定困難，影響口腔癌的及時(shí)治療[2]。而最新的研究將目標(biāo)放在了與血管生成密切相關(guān)的一氧化氮（NO）分子上，研究顯示哺乳動物唾液腺細(xì)胞中存在特定的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Sialin），且多種癌組織中的硝酸鹽濃度有顯著的升高，提示著二者的緊密關(guān)系[3]。本研究旨在通過對口腔癌組織的研究，探究Sialin 與口腔癌的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018 年1 月至2018 年8 月我院收治口腔癌患者50 例，取其口腔癌組織、癌旁組織及臨近正常組織，患者年齡23-76 歲，平均（51.28±10.57）歲，男28 例，女22 例。納入標(biāo)準(zhǔn):①所有患者均經(jīng)過病理學(xué)診斷為口腔癌；②術(shù)前未進(jìn)行任何放化療；③簽署治療研究知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并患有其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病的患者；②發(fā)生其他系統(tǒng)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的患者。同時(shí)選取同期于我院體檢的正常人群口腔組織50 例作為對照組，比較三組樣本提供者的一般臨床資料，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 方法

所有樣本均使用10%甲醛進(jìn)行固定，并用石蠟進(jìn)行包埋，以4 m 進(jìn)行連續(xù)切片，切片組織進(jìn)行常規(guī)烤片、脫蠟、微波抗原修復(fù)以及清除內(nèi)源性過氧化物酶，使用兔多克隆抗體Sialin 進(jìn)行孵育一抗，后孵育二抗，以二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，無水乙醇脫水后，封片觀察。對照組使用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照組。

1.3 觀察指標(biāo)

采用雙盲法由2 位經(jīng)驗(yàn)豐富的臨床病理專家分別進(jìn)行單獨(dú)判斷，每張切片共觀察5 個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200 個(gè)腫瘤細(xì)胞，共計(jì)數(shù)1000 個(gè)細(xì)胞。計(jì)算陽性細(xì)胞的占比情況，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為1 分，11%-50%為2 分，51%-75%為3 分，＞70%為4 分；后按染色強(qiáng)度進(jìn)行評分:無色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；最后按照兩項(xiàng)評分乘積將結(jié)果分為4 個(gè)等級:0-2 分為“-”，3-4 分為“+”，6-8 分為“++”，9-12 分為“+++”。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ 2 檢驗(yàn)或Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Sialin 在口腔癌、癌旁組織及正常口腔組織中的表達(dá)情況

Sialin 的陽性表達(dá)率大小為:口腔癌組織＞癌旁組織＞正常口腔組織，三者表達(dá)陽性率有顯著的不同（P＜0.05），口腔癌組織中陽性表達(dá)率為94.00%，癌旁組織為62.00%，具體見表1。

表1 Sialin 在口腔癌、癌旁組織及正常口腔組織中的表達(dá)情況

2.2 Sialin 表達(dá)與口腔癌臨床病理因素的相關(guān)性

Sialin 的表達(dá)與口腔癌的分期和分化程度有關(guān)（P＜0.05），與患者的年齡、性別、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性（P＞0.05），具體見表2。

3 討論

在既往的許多研究中均發(fā)現(xiàn)，口腔癌的發(fā)生發(fā)展和NO 具有密切的關(guān)聯(lián)，普通腫瘤的生長和NO 密切相關(guān)，NO 能夠調(diào)節(jié)腫瘤生長的重要過程，其中包括血管生成、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期以及腫瘤的轉(zhuǎn)移侵襲等，目前關(guān)于NO 的作用途徑仍處于研究中，其中NO 非酶源途徑，即硝酸鹽-NO 途徑在口腔癌中的研究較少，而其作用主要依賴于體內(nèi)的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。有研究表明[4]，在哺乳動物的唾液腺細(xì)胞中存在特定的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，即Sialin，能夠?qū)⒓?xì)胞內(nèi)的硝酸鹽向細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)，通過口腔厭氧菌的代謝作用，將其轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽，最后進(jìn)一步還原成NO，發(fā)揮生理作用。

表2 Sialin 表達(dá)與口腔癌臨床病理因素的相關(guān)性

通過比較口腔癌組織中Sialin 的表達(dá)情況和口腔癌患者的臨床資料，結(jié)果顯示Sialin 的表達(dá)與口腔癌的分期和分化程度有關(guān)（P＜0.05），與患者的年齡、性別、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性（P＞0.05）。這表明通過對組織中的Sialin 進(jìn)行陽性率檢測，能夠?qū)颊叩脑\斷分期進(jìn)行判斷，對臨床診斷治療具有相當(dāng)重要的意義。

綜上所述，Sialin 作為體內(nèi)重要的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在口腔癌的發(fā)生中具有一定的特異性，同時(shí)與患者的臨床分期、腫瘤分化程度具有顯著相關(guān)性，對其進(jìn)行檢測有利于臨床診斷研究。