放療聯合免疫治療頭頸癌的療效觀察

雷學 段鵬 畢艷華 趙紅林 秦越亮 郭麗雙

晚期頭頸癌療效較差,隨著分子生物學的不斷發展,腫瘤免疫治療有了明顯的進步,筆者采用細胞因子誘導殺傷(CIK)細胞聯合放療治療晚期頭頸癌取得較好療效,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 38例均為 2006年 1月至 2008年 8月在我院治療的頭頸癌患者,其中男 24例,女 16例;年齡 33～68歲,平均年齡 55歲。所有病例均經病理證實,鼻咽癌 13例,喉癌 12例,口咽癌 8例,下咽癌 5例;Ⅲ期 24例,Ⅳ期 14例。隨機分為放療聯合免疫治療組(聯合組)和單純放療組(單放組),每組19例。2組近 1個月未抗腫瘤治療,3個月未使用過免疫增強劑。

1.2 主要試劑 PE標記的鼠抗人 CD4、CD8抗體,FITC標記的鼠抗人 CD25、CD3抗體,同型對照分別為 PE標記的鼠抗人IgG 1免疫球蛋白,FITC標記的鼠抗人IgG 1免疫球蛋白均為美國公司產品。

1.3 方法

1.3.1 CIK細胞制備及回輸[1]：抽取外周血 20ml,利用密度梯度離心分離并收集單個核細胞,用RPMI-1640完全培養基洗滌 3次,調整細胞到 1×106/ml,加入 IFN-γ1 000 U/m l,24 h后加入 rh IL-2 1 000U/ml,anti-CD3McAb 50 ng/ml,孵箱中常規條件培養。隔天換液,補加 rhIL-2 1 000 U/ml。培養 21 d收集細胞合格后,回輸細胞總數為 1.6×1010,懸浮于含500 g/L人血白蛋白0.9%氯化鈉溶液 250ml內,分 4次回輸給患者。

1.3.2 流式細胞儀檢測：靜脈血 2ml,EDTA抗凝。取不同熒光標記的單克隆抗體各 20μl,分別加入 100μl抗凝外周血,室溫下孵育 15m in,加入紅細胞裂解液,PBS洗滌兩次,用流式細胞儀檢測,Cellquest軟件分析數據,記錄陽性細胞百分率。

1.3.3 治療方案：單放組和聯合組放療方案相同,聯合組在放療開始前 1周內給予 CIK細胞回輸。

1.3.4 觀測指標及療效判定：瘤體變化、生存期、外周血淋巴細胞亞群(CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T)及CD4+CD25+T調節細胞亞群水平等。腫瘤客觀療效分為完全緩解(CR),部分緩解(PR),輕度緩解(MR),穩定(SD),進展(PD),總緩解=CR+PR+MR。

1.4 統計學分析 應用 SPSS 13.0統計軟件,計量資料以±s表示,采用t檢驗,計數資料采用 χ2檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 客觀療效 聯合組緩解率高于單放組(χ2=5.216,P＜0.05)。見表 1。

表 1 2組治療后療效比較 n=19,例

2.2 機體免疫狀態 單放組和聯合組治療后患者細胞免疫總體水平差異無統計學意義(P＞0.05),但在細胞水平上差異有統計學意義(P＜0.05);聯合組治療后誘導輔助 T細胞水平(CD3+CD4+T)及細胞毒性殺傷效應細胞水平(CD3+CD8+T)均較單放組增高(P＜0.05);而單放組抑制性調節細胞水平(CD4+CD25+T)較聯合組增高明顯(P＜0.05或 ＜0.01),見表 2。

表 2 2組治療后免疫狀態比較 n=19,±s

表 2 2組治療后免疫狀態比較 n=19,±s

組別 CD3+T CD3+CD4+T CD3+CD8+T CD4/CD8 CD4+CD25+T聯合組 67.6±0.4 36.9±0.4 30.7±0.3 1.27±0.02 17.2±0.7單放組 66.6±0.4 35.6±0.4 29.2±0.3 1.22±0.02 19.6±0.9 t值 1.676 2.221 3.126 1.508 2.089 P值 0.102 0.033 0.004 0.140 0.044

2.3 不良反應 聯合組不良反應主要是發熱和類流感癥狀,癥狀均較輕,耐受性好,無因不良反應而退出治療者。

3 討論

腫瘤患者體內抗原提呈細胞功能缺陷、腫瘤免疫殺傷細胞作用一過性、腫瘤免疫療效低等影響了腫瘤免疫治療。生物治療是通過誘導機體主動免疫或過繼性免疫法來調整被破壞的機體與腫瘤之間的平衡,使患者免疫功能得到恢復,增強對癌癥的防御力。

放療對頭頸癌療效確切,但長期生存和生活質量改善不能令人滿意,其中一個原因是患者經放療后體內免疫系統遭到破壞,自身免疫力下降。CIK細胞是人外周血單個核細胞經體外激活、培養后獲得的一群同時表達 CD3和 CD56分子的異質細胞,兼具有 T淋巴細胞強大的抗瘤活性和自然殺傷細胞的非MHC限制性殺瘤優點[2]。調節性 T細胞是存在于正常機體內的一類具有獨特的免疫調節作用的細胞,在介導機體腫瘤免疫耐受過程中起著重要作用[3]。

筆者研究結果發現,在放療前給予 CIK過繼免疫治療后,患者體內特異性免疫細胞水平明顯增高,同時負性調節因子明顯下降,說明經過免疫強化后,體內免疫水平處在較高且平穩的激活水平,有利于效應細胞發揮對放療后殘存的腫瘤細胞的殺傷作用,提高療效[4]。

1 李翠萍,陳寶安,陳津,等.臍血來源的 CIK細胞大容量制備方法的建立.臨床腫瘤學雜志,2005,17：291-292.

2 吳擘颋,徐建民.CIK細胞：過去、現在與將來.中國臨床醫學,2006,23：782-784.

3 Mottet C,Golshayan D.CD 4+CD 25+Foxp3+regulatory T cells：from basic research to potential therapeutic use.Swiss Med Wkly,2007,37：625-634.

4 Linn YC,Lau LC,Hui KM.Generation ofcytokine-induced cells from leukaem ic samples with in vitro cytotoxicity againstautologous and allogeneic leukaemic blasts.Br JHaematol,2002,116：78-86.