Xpert MTB/RIF檢測結核分枝桿菌的應用價值

孫菱　郭桂英　楊建科　歐陽慧　王燕玲　姚莉　成莉

【摘 要】目的：探討Xpert MTB/RIF檢測結核分枝桿菌在結核感染診斷中的臨床應用價值。方法：回顧分析2019年6月至8月我院151例臨床患者標本，所有樣本均同時采用抗酸染色法、Xpert MTB/RIF試驗進行檢測，并對檢測結果進行比較。結果：Xpert MTB/RIF檢測的總陽性率明顯高于抗酸染色法，差異有統計學意義（P<0.05）。采用Xpert MTB/RIF法檢測不同類型樣本的陽性率依次為：痰樣本陽性率56.3%、灌洗液陽性率40.0%、胸水陽性率5.2%，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：Xpert MTB/RIF技術檢測MTB具有簡單、快速、敏感性高等優點，在結核分枝桿菌及其對利福平耐藥的快速檢測方面有良好的應用

前景。

【關鍵詞】結核分枝桿菌;Xpert 結核分枝桿菌/利福平試驗;抗酸染色

【中圖分類號】R52 【文獻識別碼】B 【文章編號】1002-8714（2019）11-0011-02

【Abstract】Objective：To investigate the clinical application value of Xpert Mycobacterium tuberculosis（MTB）/rifampicin（RIF）assay in the diagnosis of tuberculosis. Methods A total of 151 patients were determined by XpertMTB/RIF assayand acid-fast stain，respectively. The results were compared.Results The positive rates of Xpert MTB/RIF assay for all types of samples were higher than those of acid-fast stain，and the difference is statistically significant（P<0.05）.Conclusions? Compared with acid-fast stain， Xpert MTB/RIF assayis simple， rapid and sensitive，and has a good application prospect.

【Key words】Mycobacterium tuberculosis;Xpert MTB/RIF assay;acid-fast stain

我國一直是世界上結核疫情較嚴重的國家之一，目前用于診斷結核病的方法有抗酸桿菌染色和結核分枝桿菌培養，但在臨床使用的過程中，前者陽性率低，后者周期長，可能延誤診斷及治療[1]。近幾年來，新的分子檢測方法Xpert MTB/RIF逐步發展，可在2h同時對MTB和RIF耐藥進行檢測[2]。我們對Xpert MTB/RIF與抗酸染色法以及Xpert MTB/RIF技術檢測情況進行了比較，初步探討Xpert MTB/RIF技術的臨床應用價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來源

收集樂山市人民醫院2019年6月至8月同時進行了抗酸涂片檢查和Xpert MTB/RIF的151例患者樣本，樣本包括痰80例、支氣管肺泡灌洗液35例、胸水19例，以及腹水、腦脊液、尿、膿液等非呼吸道標本17例。

1.1.2 儀器和試劑

抗酸桿菌染色液購自珠海貝索生物技術有限公司;Xpert MTB/RIF 檢測試劑盒購自美國 Cepheid 公司。

1.2 方法

對所有標本同時進行 Xpert MTB/RIF 檢測、抗酸染色法檢測。

1.2.1 抗酸染色法 按照《結核病實驗室標準化操作與網絡建設》進行操作。

1.2.2 Xpert MTB/RIF核酸擴增檢測

按試劑說明書對各類標本分別進行前處理，然后渦旋振蕩15s，靜置15min，取2mL處理后的樣本加入反應盒，然后將反應盒放入檢測模塊，儀器開始進行自動化檢測。反應結束后對MTB及RIF結果進行判讀。

1.3 統計學方法

用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，抗酸染色和Xpert MTB/RIF陽性率的比較采用McNemar檢驗;三種不同樣本陽性率之間的比較采用Pearson檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

Xpert MTB/RIF試驗陽性率41.7%（63/151）高于抗酸染色法27.2%（41/151），差異有統計學意義（P=0.00）。

Xpert MTB/RIF技術檢測呼吸道不同類型樣本陽性檢出率比較，其陽性率由高到低依次為痰[56.3%（45/80）]>灌洗液[40.0%（14/35）]>胸水[5.2%（1/19）]。經統計學分析，差異有統計學意義（x2=16.58，P=0.00）。

3 討論

結核感染是目前世界公共衛生面臨的最為嚴峻的挑戰之一。目前國內大多數醫院對結核分枝桿菌的檢測還是依賴于抗酸染色涂片鏡檢，鏡檢方法簡單快速，但是靈敏度不高，容易導致漏診。培養方法分離出結核分枝桿菌是診斷結核病的金標準，但結核分枝桿菌培養對實驗室生物安全級別要求高，在國內大多醫院還未開展，且培養周期長不利于結核病的早期診斷。

XpertMTB/RIF是一種能在2小時內完成結核分枝桿菌和利福平耐藥性快速檢測的方法。Xpert MTB/RIF為全自動一體化熒光定量PCR儀，其最低檢測限值低于TB-DNA，且手工時間僅需約20min。這種新型的診斷方法是由美國Cepheid公司開發的，Xpert MTB/RIF 基于全自動半巢式實時熒光定量 PCR 原理，將樣本的準備、擴增、檢測集于一體，對結核分枝桿菌特有的序列rpo B基因進行檢測。Xpert MTB/RIF 有5條分子信標探針，覆蓋目標基因，第6條探針用于質量控制。與傳統的結核檢測方法相比，XpertMTB/RIF更加簡便、快捷、安全、準確，其對硬件設備和人員的要求比較低，成本也在可接受的范圍內，且在診斷結核分枝桿菌感染的同時對利福平耐藥一并進行了檢測，在結核病診治中具有非常重要的作用。

本研究通過比較Xpert MTB/RIF與痰涂片抗酸染色鏡檢的陽性率，初步探討其在診斷結核感染方面的價值，結果表明，其陽性率明顯高于痰涂片抗酸染色鏡檢法，提示可以通過 Xpert MTB/RIF聯合痰涂片抗酸染色鏡提高診斷結核感染的敏感度，降低漏檢率。另外，通過比較Xpert MTB/RIF檢測不同標本陽性率，發現其診斷價值受到標本類型的影響。但由于本次研究采用的標本量較少，結果存在一定局限性，接下來應收集更多標本以彌補此不足，且增加培養結果。總之Gene Xpert系統具有簡便快速、安全、敏感性高等優點，XpertMTB/RIF在結核病診斷以及利福平耐藥檢測等方面必將具有廣闊的應用前景。

參考文獻

[1] Bates M，Ogrady J，Maeurer M，et al. Assessment of the xpert MTB / RIF assay for diagnosis of tuberculosis with gastric lavage as-pirates in children in sub-Saharan Africa：a prospective descriptive study[J].Lancet Infect Dis，2013，13（1） ： 36-42.

[2] Lawn SD，Nicol MP.Xpert MTB/ RIF assay： development，evaluation and implementation of a new rapid molecular diagnostic for tuberculosis and rifampicin resistance[J].Future Microbiol，2011，6（9）：1067-1082.