探討結核分枝桿菌耐藥檢測及其臨床意義

徐濤

【摘? 要】結核病是我國乃至全球都十分嚴重的疾病類型，據WTO2016年統計數據顯示，全球共有1040萬結核病患者，當年死亡人數130萬。在新增的結核病患者中，耐多藥性結核病患者數量居多。因此，對耐藥結核病耐藥性檢測、診斷和治療成為當前結核病防控的重點。本文對分枝桿菌耐藥機制概述，討論藥物敏感性檢測方法，并分析分枝桿菌藥敏檢測結果的臨床價值，希望對相關研究提供支持。

【關鍵詞】結核分枝桿菌;耐藥檢測;臨床意義

【中圖分類號】R446.5????? 【文獻標識碼】A????? 【文章編號】1672-3783（2019）09-0090-01

耐藥結核?。═B）在世界范圍內都是臨床醫學長期以來難以攻堅的難題，其中耐多藥結核病和廣泛耐藥結核病對TB防控起到重要的影響。結核分枝桿菌（Mtb）主要的耐藥機制是藥物代謝酶編碼基因變異或者藥物作用靶標導致的。常見的臨床Mtb藥物敏感性檢測主要是分子藥敏方法和表型藥敏方法，以下就相關內容做出綜述。

1 分枝桿菌耐藥機制

對于Mtb耐藥機制來說，目前依然沒有取得整體上的研究進展，不過依然在一些方面取得了研究成果，見表一：

2 藥物敏感性檢測方法

在當今的臨床檢測方法中，只利用一種藥物敏感性檢測不具有檢測意義，往往會利用多達數十種的藥物敏感檢測方法結合藥物耐藥基因型的分子藥敏方法，通過該檢測方法可以實現優勢互補，耐藥TB檢測效果顯著提升。表型檢測這種方法需要一定的觀察時間去培養，觀察Mtb的生長情況可以分析起耐藥性，這種檢測方法也是對藥物耐藥性檢測的基本準則，雖然部分藥物的檢測時間較長，但是可以對多種藥物的耐藥情況分析。具體說來：

2.1 傳統的藥敏試驗方法

建立在含抗結核藥物的固態培養基的基礎上，可以對Mtb的生長情況檢測，同時也可以判斷藥物的敏感性，主要方法為絕對濃度法以及比例法，WHO倡導我國使用比例法為DST的標準，結果顯示耐藥菌比率超過1%就說明具有耐藥性，目前已經有相關藥物在臨床使用。該方法可以同時對一線、二線的十幾種藥物同時檢測，檢測方法簡單，并且具有經濟性的特點，但是培養時間較長是其缺點，往往需要1-2月的時間^[3]。

2.2 分枝桿菌快速培養藥敏試驗方法

建立在含抗結核藥物的液態培養基的基礎上，通過分枝桿菌快速培養系統可以同時對4-5種一線的抗結核藥物藥敏試驗情況檢測，這種檢測方法體現出速度快的優勢在1-2周的時間即可完成檢驗，但是檢測成本高成為了不足，對二線抗結核藥物的敏感性也不能做出檢測。

2.3 分子或基因檢測方法

這種方法采用了分子生物學技術檢測，近年來隨著 Mtb 對抗結核藥物耐藥分子機制研究的深入，有很多的相關產品在我國臨床應用，這樣的檢測方法有著快速、靈敏檢出耐藥 Mtb的優點，但檢測的藥物種類不多。

2.4 羅氏培養法

該方法目前已經得到了廣泛的應用，主要是對羅氏培養基上生命力旺盛的菌株選取， 然后將其放在無菌操作瓶里打磨成乳酪樣，再用 1 g /L的生理鹽水嚴格配制菌懸液， 之后需要把其稀釋到10g/L-2g/L，操作人員還要把吸收菌液（0.1mL）接種到不同濃度的液體培養基中，最終得到藥物濃度為 2mg/L、2. 5mg/L、10mg/L、20 mg/L，然后需要做一組空白對照、一組無藥物的活菌以及一組死菌對照，并且使用流式細胞儀檢測細菌的數量和熒光強度，分析其檢測結果。

3 分枝桿菌藥敏檢測結果的臨床價值

DST結果便于醫生對結核患者使用各類抗結核藥物耐受程度分析，進而制定出合理的化療方案，對難治患者和復治患者的幫助更大。DST結果得出以下結論：對1種抗結核藥物耐藥為單耐藥;若對2種以上的抗結核藥物耐藥為多耐藥;若同時對RFP和INH耐藥則為耐多藥;如果同時對一種注射針劑、RFP和INH、氟喹咯酮類、耐藥就是廣泛耐藥;如果同時對所有抗結核藥物耐藥就是完全耐藥。在近年來的;臨床研究中，DST的重要性得到廣泛的認可，但是在表型藥敏試驗和反應出的基礎問題依然需要進行深入研究，也需要對臨床研究意義深入探討。

在我國的TB患者中，RFP耐藥情況的出現絕大部分的原因在于rpoB突變導致的，其中513位、526位和531位密碼子突變會導致患者高水平耐藥，RFP分子藥敏檢測結果和表型藥敏試驗結果基本一致，耐藥交叉率達到70%-90%。因此，RFP耐藥不建議更換為526位^[4]。

在我國TB患者中，70%-80%INH耐藥與katG315位密碼子突變發生突變有關，這說明突變會降低katG酶活性，不過依然可以催化INH轉換為活性型異煙酸，使其發揮出抗結核的作用，但是缺點在于轉換效率不高，表型藥敏試驗會表現為結核分枝桿菌對INH耐受程度不高，所以建議臨床上加大劑量。10%左右患者的結核分枝桿菌katG會完全缺失，受耐水平很高，繼續治療效果不顯著，建議更換成PTO或者ETO^[5]。

4 結束語：

綜上所述，在臨床醫學的不斷發展下，對結核分枝桿菌的研究更加深入，傳統的藥物檢測方法存在一定缺陷，部分患者會有較高的耐藥性，雖然目前在臨床應用中取得了一定成效，但是還需要進一步研究。

參考文獻

[1]??? 陽幼榮，吳雪瓊.結核分枝桿菌耐藥檢測及其臨床意義[J].臨床藥物治療雜志，2018，v. 16（04）：24-28.

[2]??? 鄒遠嫵，劉尚武，朱蕾，etal.XpertMTB/RIF檢測結核分枝桿菌及其耐藥性在結核病輔助診斷中的臨床價值[J].臨床肺科雜志.

[3]??? 曾松芳，郭美麗，趙珊珊，etal.結核分枝桿菌/利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術在肺結核快速診斷中的應用價值[J].中國衛生檢驗雜志，2016（5）：683-685.

[4]??? 胡春梅，郭晶，嚴虹，etal.熒光定量PCR探針熔解曲線法在結核分枝桿菌耐藥基因檢測中的應用[J].中國防癆雜志，2016，38（1）：38-41.

[5]??? 李妍，張天華，鮮小萍，etal.利用XpertMTB/RIF檢測結核分枝桿菌及利福平耐藥性的研究[J].臨床肺科雜志，2016，21（10）：1762-1765.