淺析高效液相色譜法測(cè)定甘蔗及土壤中環(huán)嗪酮的殘留量

臧穩(wěn)

摘 要：環(huán)嗪酮作為一種除草劑，對(duì)于阻止雜草合成生長(zhǎng)、防治甘蔗等作物的常見病蟲害等均具有積極的幫助作用。在這一背景下，本文將結(jié)合相關(guān)研究資料，采用實(shí)驗(yàn)分析的方式，重點(diǎn)對(duì)高效液相色譜法測(cè)定甘蔗及土壤中的環(huán)嗪酮?dú)埩袅窟M(jìn)行簡(jiǎn)要分析研究。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜;甘蔗;土壤;環(huán)嗪酮

1 材料與實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

在本次實(shí)驗(yàn)中所選用的儀器，除了精準(zhǔn)性較高的高效液相色譜儀這一主要儀器外，同時(shí)還使用了支持波長(zhǎng)自動(dòng)調(diào)節(jié)的可變紫外檢測(cè)器，與專業(yè)的數(shù)據(jù)處理儀等相關(guān)儀器設(shè)備。在試劑選取中，本文所選擇的實(shí)驗(yàn)試劑，主要包括用以兩次蒸餾的水、含量為99%的環(huán)嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品，級(jí)別均為分析純的乙酸與鄰苯二甲酸二乙酯，以及同為HPLC級(jí)的乙腈和甲醇。

1.2 色譜條件

在色譜條件中，本試驗(yàn)色譜柱為phenomenex C18 1500mm×4.6（i.d.）mm不銹鋼柱，5μm且柱溫控制在25℃。檢測(cè)波長(zhǎng)與流速分別設(shè)定為253nm與1mL/min。流動(dòng)相即乙腈、甲醇和水、HAc的比例為15：30：55：0.5，設(shè)定環(huán)嗪酮保留時(shí)間為5min。

1.3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.3.1 樣品提取

在提取甘蔗樣品時(shí)，需在具塞容量瓶?jī)?nèi)，加入精準(zhǔn)稱取的10g完全粉碎的甘蔗樣品，而后將50mL氯仿加入其中進(jìn)行30min的振蕩，在進(jìn)行過(guò)濾后分別使用30mL氯仿提取兩次。將所有提取液全部合并并將其置入150mL濃縮瓶中，在37℃的溫度環(huán)境下對(duì)其進(jìn)行減壓濃縮直至接近完全干燥，最后對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)凈化處理即可。在提取土樣樣品時(shí)，則需要在離心管內(nèi)加入精準(zhǔn)稱取的25g土樣，隨后分別將5mL與45mL的甲醇混合溶劑與乙酸乙酯加入其中，進(jìn)行30min振蕩提取。在將轉(zhuǎn)速設(shè)定為4000r/min后進(jìn)行5min的離心處理，取全部上清液。重新進(jìn)行2次提取，將所有提取液合并置入150mL梨形瓶中，同樣在37℃的溫度環(huán)境下進(jìn)行減壓濃縮直至其接近完全干燥。使用N2將其吹干后用甲醇定容，最后進(jìn)行相應(yīng)的過(guò)濾處理。

1.3.2 樣品測(cè)定

按照此次實(shí)驗(yàn)中的液相色譜條件，當(dāng)儀器具有良好穩(wěn)定性時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員需進(jìn)幾針1μL標(biāo)樣溶液，并對(duì)每次響應(yīng)值的比值進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)定。要求前后兩次響應(yīng)值之比的偏差變化不超過(guò)1.0%。此后實(shí)驗(yàn)人員需要按照先標(biāo)樣溶液后樣品溶液、而后樣品溶液最后標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行進(jìn)樣分析。對(duì)兩針樣品溶液與樣品溶液之前、之后的兩針標(biāo)樣溶液中，環(huán)嗪酮峰面積值進(jìn)行計(jì)算。其計(jì)算公式如下：

在這一公式當(dāng)中，X代表環(huán)嗪酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其單位為%。S1與S2分別代表著標(biāo)樣溶液與試樣溶液當(dāng)中，環(huán)嗪酮峰面積值。m1與m2則分別代表環(huán)嗪酮標(biāo)樣與試樣的質(zhì)量，其單位均為g。標(biāo)樣當(dāng)中環(huán)嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量分?jǐn)?shù)則用P進(jìn)行表示[1]。

2 結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)條件選擇

在此次實(shí)驗(yàn)當(dāng)中不僅使用了C18柱，同時(shí)還采用了腈基柱，當(dāng)樣品長(zhǎng)度為150mm，C18柱的內(nèi)徑為4.6mm時(shí)，柱上出現(xiàn)了較好分離度。從價(jià)格角度看，因甲醇價(jià)格明顯低于乙腈，因此實(shí)驗(yàn)開始時(shí)直接選擇將甲醇與水作為流動(dòng)相，但樣品組分并未出現(xiàn)理想的分離度。此后實(shí)驗(yàn)人員選擇直接將乙腈和水作為流動(dòng)相體系，同樣未發(fā)現(xiàn)環(huán)嗪酮與雜質(zhì)具有良好分離度。經(jīng)過(guò)綜合考慮，實(shí)驗(yàn)人員最終選擇將C18柱作為分離柱的基礎(chǔ)上，將甲醇與水以及乙腈共同作為流動(dòng)相體系，使得選擇性在一定程度上得到了有效改善，主峰和雜質(zhì)峰不僅在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)了分離，同時(shí)其分離度也相對(duì)較好[2]。在采用可變紫外檢測(cè)器對(duì)環(huán)嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品的波長(zhǎng)進(jìn)行掃描時(shí)，發(fā)現(xiàn)其紫外吸收在254nm處有最大吸收值，因此將254nm設(shè)定為紫外吸收波長(zhǎng)具有較高的合理性。

2.2 分析方法線性關(guān)系

在本次實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)人員分別選用了容量為10mL、20mL、50mL以及100mL和500mL的容量瓶，依次向各容量瓶?jī)?nèi)加入精準(zhǔn)稱取的0.040g環(huán)嗪酮土壤標(biāo)準(zhǔn)品和0.02g甘蔗標(biāo)準(zhǔn)品，并全部使用甲醇溶解稀釋定容。前者的濃度范圍在0.17g/L至0.05g/L之間，后者的濃度范圍在0.40g/L至0.0080g/L之間。在現(xiàn)有色譜條件下，將橫縱坐標(biāo)分別設(shè)定為環(huán)嗪酮與外標(biāo)峰質(zhì)量比，以及峰面積比，根據(jù)得到的相應(yīng)工作曲線圖，可計(jì)算得到環(huán)嗪酮回歸方程為Y=1.1564X+0.0033，其相關(guān)系數(shù)為0.9999，即表明本分析方法具有較高的可行性。

2.3 方法精密度回收率

在對(duì)土壤與甘蔗環(huán)嗪酮樣品進(jìn)行精準(zhǔn)稱取并平行測(cè)定各樣品的含量之后，根據(jù)相關(guān)計(jì)算結(jié)果可知，甘蔗中的環(huán)嗪酮標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.96%，土壤中環(huán)嗪酮標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.10%。前者變異系數(shù)為0.58%，后者變異系數(shù)則為0.77%。實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)將定量甘蔗內(nèi)環(huán)嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品與土壤內(nèi)環(huán)嗪酮標(biāo)準(zhǔn)品，分別添加至有效成分含量已知且精準(zhǔn)的樣品中后，在不改變色譜條件的情況下進(jìn)行測(cè)定，可知甘蔗內(nèi)環(huán)嗪酮與土壤內(nèi)環(huán)嗪酮的平均回收率各為99.6%與99.4%。

3 結(jié)語(yǔ)

本文通過(guò)采用高效液相色譜法測(cè)定甘蔗和土壤中的環(huán)嗪酮組分，根據(jù)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，使用高效液相色譜法不僅能夠快速完成組分測(cè)定工作。同時(shí)其可以得到較為精準(zhǔn)且可信度較高的分析結(jié)果，因此在其他組分測(cè)定中也可以選擇合理使用這一分析方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]馬建民，段素云，張凡建.高效液相色譜法檢測(cè)奶牛血清中脂肪酸濃度[J].畜牧與獸醫(yī)，2019，51（10）：62-65.