植物酶抑制技術用于檢測蔬菜中有機磷及氨基甲酸酯類農藥殘留

李海英 袁柱良

摘 要 對于蔬菜中有機磷與氨基甲酸酯類農藥的檢測可采用植物酶抑制技術，在預處理樣品時可使用小柱，以此可將葉綠素的干擾有效去除，致力于檢測靈敏度的顯著提高。

關鍵詞 植物酶抑制技術；蔬菜；有機磷；氨基甲酸酯類農藥

當下，關于檢測痕量、微量有機磷與氨基甲酸酯類農藥殘留多采用酶化學比色分析法，但是乙酰膽堿酶來源于動物體，材料比較昂貴且很難保存，由此植物水解酶代替乙酰膽堿酯酶的分析方法應運而生，使用植物水解酶可對2，6-二氯乙酰靛酚進行有效水解，按照反應溶液在水解前后的顏色變化，關于農藥對于酶的抑制程度，在辨別時刻使用眼睛或儀器，有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在會抑制植物水解酶的活性，因此靛酚的顏色會逐漸變淺[1]。

1 儀器與試劑

LD4-2離心機、XK95-I型多用振蕩器、帶恒溫裝置等。

2，6-二氯乙酰靛酚；磷酸鹽緩沖液；面粉酶溶液等。

2 樣品預處理

預處理柱：取一10ml塑料離心試管，直徑為1cm，在其底部鉆一小孔（直徑為2mm），然后加入1g硅藻土545、少量玻璃纖維。

取10g蔬菜菜葉，適當的剪碎后放置在25ml離心管中，加入磷酸鹽緩沖液10ml，進行1min振蕩，然后在預處理柱中倒入液體，接收引流液，即為樣品溶液[2]。

3 定性與定量分析

定性分析：取試管兩支，分別加入2.7ml樣品溶液、2.7ml磷酸鹽緩沖液，然后各加入植物酶溶液0.2ml，放置在40℃下恒溫10分鐘，然后分別加入2，6-二氯乙酰靛酚0.1ml，40℃下再恒溫10分鐘，對兩試管中溶液顏色進行比較與分析。如果樣品溶液藍色較淺或呈橙色，則說明有效抑制了酶活性，含有有機磷或氨基甲酸酯類農藥出現在樣品中。

繪制標準工作曲線：將磷酸鹽緩沖液2.4ml、農藥水溶液0.3ml、植物酶溶液0.2ml依次加入到1cm的比色皿中，在40℃下恒溫10分鐘，關于吸光值得讀取在605nm處，然后加入2，6-二氯乙酰靛酚0.1ml，40℃下再恒溫10分鐘并讀取吸光值[3]。

使用磷酸鹽緩沖液將上述農藥溶液代替，根據上述操作計算空白溶液吸光值。

定量分析：使用外標法。

4 去除萃取液中葉綠素對方法靈敏度的貢獻

在預處理葉類蔬菜時，同農藥可將葉綠素、其它雜質一起萃取出來，綠色葉綠素會直接影響顯色反應，為此為致力于方法靈敏度的提高需去除萃取液中的雜質，如葉綠素等。根據報道方法：取萃取液上清液或使用具有545硅藻土的濾紙進行過濾。由于葉類蔬菜樣品具有較大的體積，上清液的獲取在萃取液一定的情況下很難得到。使用鋪有硅藻土545的濾紙進行過濾，可有效將葉綠素去除，但是需要長時間過濾，對于吸附劑的使用量比較大。

取未過柱和過柱后的樣品萃取液，吸光值的讀取在波長為645nm時，經不同吸附劑后葉綠素的殘留率：濾紙、硅鎂型吸附劑、201紅色擔體、硅藻卡545分別為70.3%、17.9%、34.0%、15.4%，說明硅鎂型吸附劑與硅藻卡545能夠有效的吸附葉綠素[4]。

取未過柱和過柱后的農藥溶液，關于農業被吸附劑吸附情況的判斷可根據它們的抑制率值。在同一農藥溶液試驗中，根據過柱后和未過柱后的樣品抑制率百分比率可將樣品經預處理后的農藥殘留直接反映出來，其中硅鎂型吸附劑為62.2%、硅藻土545為99%。

在去除葉綠素時硅藻土545能夠發揮良好的效果，且不會對樣品中的農藥濃度造成影響，因此可選為預處理柱的填充材料，經研究發現對于方法靈敏度的提高當屬1g硅藻土545，因此可將其作為樣品預處理柱。

5 敵敵畏濃度和抑制率之間的關系

在作抑制率圖時刻根據敵敵畏濃度對數，根據圖示所致濃度對數和抑制率呈基本線性關系時敵敵畏的濃度為0.01mg·1-1——0.1mg·1-1時。

將酶加入到農藥中混合后，酶活性被抑制程度在一定程度上直接取決于恒溫時間。通常情況下，恒溫時間與反應時間呈正比，即恒溫時間越長、反應時間越長，由此會提高酶活性被抑制程度?；诖?，為充分確保數據準確性，就需要對恒溫反應時間進行嚴格控制[5]。

6 結束語

為更好的驗證方法可靠性，對同一蔬菜樣品噴灑濃度不同的久效磷農藥，在分析測定時使用國家標準法、已建立的植物酶法，在濃度為5.0mg·1-1時，二者的測定結果分別為0.23mg·1-1和0.13mg·1-1；濃度為1.0mg·1-1時，分別為0.047mg·1-1、0.029mg·1-1。

針對水溶性農藥乳油，植物酶的檢測結果略微低于標準氣相色譜法，但是檢測要求能夠獲得有效滿足。因氣相色譜法的萃取、檢測、操作比較復雜，而預處理相比就較為簡單、速度快且成本低，可進行大力推廣與使用。在檢測市場所出售的新鮮蔬菜的農藥殘留時刻使用所建立的方法，隨機檢測，檢出率大約為10%。

參考文獻：

[1]陳軍麗.不同前處理對酶抑制法檢測蔬菜有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的影響[J].現代農村科技，2019（05）：50-51.

[2]宋瑋，錢群麗，劉持典，胡斐斐，宋衛國.市售有機磷類和氨基甲酸酯類農藥殘留快速檢測卡的質量研究[J].江西師范大學學報（自然科學版），2018，42（06）：565-570.

[3]謝俊平，李慧琴，梁科，盧新.速測卡法快速檢測蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留[J].食品安全質量檢測學報，2018，9（06）：1269-1274.

[4]宋利軍，劉瑞弘，李騰根，廖秀海，周銀古，付倩.QuEChERS提取-氣相色譜法測定蔬菜中的10種有機磷類和氨基甲酸酯類農藥殘留量[J].中國衛生檢驗雜志，2017，27（16）：2304-2307.

[5]宋利軍，付倩，劉瑞弘，李騰根，廖秀海，周銀古.QuEChERS提取-氣相色譜質譜法測定蔬菜中的21種有機磷類、氨基甲酸酯類和擬除蟲菊酯類農藥殘留量[J].中國衛生檢驗雜志，2017，27（15）：2135-2139.